简介：摘要目的通过构建多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）患者卵丘颗粒细胞的环状RNA（circular RNA，circRNA）-微小RNA（microRNA，miRNA）-信使RNA（messenger RNA，mRNA）调控网络，并进行临床标本验证，以探寻PCOS发病机制并提供诊疗靶点。方法使用R软件分析来自基因表达图谱（gene expression omnibus，GEO）数据库的数据，得到差异表达的circRNA、miRNA、mRNA；使用CircInteractome、Starbase数据库，预测构建circRNA-miRNA-mRNA调控网络。回顾性研究收集2018年1月至2018年12月期间于郑州大学第二附属医院生殖医学部就诊的PCOS患者（记为PCOS组，n=40）和因男方或者输卵管因素治疗的患者（记为对照组，n=20）的卵丘颗粒细胞，提取RNA后进行实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）验证。结果筛选出278个差异表达mRNA、23个差异miRNA和2402个差异circRNA（P<0.05和 |log2FC|>0.8）；构建256条circRNA-miRNA-mRNA调控网络，包含13个mRNA、2个miRNA和40个circRNA；临床验证后提示，妊娠相关血浆蛋白A（pregnancy-associated plasma protein A，PAPPA）、hsa-miR-127-3p、hsa_circ_0086809/hsa_circ_0063556及其调控网络与PCOS相关（P=0.004、P=0.002、P=0.014、P=0.003）。结论卵丘颗粒细胞中PAPPA、hsa-miR-127-3p、hsa_circ_0086809/hsa_circ_0063556的表达水平及其调控网络与PCOS发生相关。

简介：摘要目的研究miRNA-29c在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus, T1DM）早期肾病患者中的表达情况，及对早期肾病的诊断价值。方法回顾性选取2019年1月至2022年3月期间于杭州市临安区第一人民医院接受治疗的168例T1DM患者作为研究对象，根据肾病发生情况分为单纯性糖尿病组（122例）及糖尿病肾病组（46例）。采用RT-PCR法检测血清miRNA-29c水平，比较两组的性别、年龄、病程、血清miRNA-29c水平等一般资料，采用Logistic回归分析T1DM患者发生早期肾病的影响因素。采用ROC曲线分析miRNA-29c对于T1DM发生早期肾病的诊断价值。结果早期肾病组的病程、血压（收缩压、舒张压）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、血尿酸高于单纯性糖尿病组，而白蛋白、总胆红素、miRNA-29c（0.82±0.22 vs 1.24±0.33）低于单纯性糖尿病组，差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic分析显示：长病程（OR=2.061，95%CI=1.090~3.896）、收缩压（OR=1.143，95%CI=1.023~1.279）、舒张压（OR=1.151，95%CI=1.022~1.298）、高HbA1c（OR=1.317，95%CI=1.049~1.653）、高血尿酸（OR=1.306，95%CI=1.028~1.659）、低miRNA-29c（OR=0.845，95%CI=0.730~0.979）是影响T1DM患者发生早期肾病的危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析显示miRNA-29c诊断早期肾病的截断值为0.952，曲线下面积（AUC）为0.863（95%CI: 0.801~0.925），敏感度、特异度分别为84.78%、80.33%。结论T1DM早期肾病患者血清miRNA-29c处于低表达状态，是T1DM患者发生早期肾病的影响因素，对于早期肾病具有良好的诊断价值。

简介：摘要目的探讨miRNA-618（miR-618）对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测miR-618在THP-1细胞和健康人外周血分离的单核细胞中的相对表达量。构建过表达miR-618质粒载体，以空载体作为阴性对照，将二者分别转染THP-1细胞，设定为miR-618过表达组和阴性对照组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。采用TargetScan软件预测miR-618靶基因，通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证。采用蛋白质印迹法检测miR-618过表达组或阴性对照组的THP-1细胞和健康人外周血单核细胞中预测的miR-618靶基因蛋白表达的水平。结果PCR结果显示，与健康人外周血分离的单核细胞相比，THP-1细胞中miR-618表达量低（P<0.05）。CCK-8法检测结果显示，与阴性对照组比较，miR-618过表达组THP-1细胞增殖能力降低（转染0、24、48、72 h细胞吸光度值：0.20±0.03比0.20±0.03、0.28±0.02比0.35±0.03、0.34±0.03比0.43±0.04、0.39±0.02比0.53±0.05，均P<0.05），细胞晚期凋亡率升高[（27.1±0.1）%比（14.9±0.1）%，t=2.13，P=0.03]。TargetScan软件预测miR-618靶基因为ARPP19。荧光素酶报告基因实验结果显示，转染野生型ARPP19基因质粒+ miR-618基因质粒组的THP-1细胞相对荧光素酶活性均高于空白对照组和转染野生型ARPP19基因质粒+ miR-618空载质粒组（0.170±0.003比0.100±0.004、0.100±0.001，均P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，miR-618过表达组THP-1细胞ARPP19蛋白表达水平低于阴性对照组，而两组健康人外周血单核细胞中ARPP19蛋白表达水平相近。结论miR-618可能通过抑制急性单核细胞白血病THP-1细胞ARPP19的表达而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。

简介：目的：探讨在喉癌细胞株Hep-2中上调miRNAlet-7a的表达对高迁移率族蛋白（highmobilitygroupA,HMGA2）的作用机制以及对喉癌细胞增殖的影响。方法：合成miRNAlet-7a模拟体（let-7amimics）并采用阳离子脂质体法转染入Hep-2内;分别用流式细胞术和MTT法检测let-7a高表达对细胞凋亡和增殖的影响;实时荧光PCR（Real-timeqPCR）和Westernblot检测上调let-7a后对HMGA2表达的影响。结果：本实验将let-7amimics成功转染入Hep-2内,流式细胞术及MTT法检测显示Hep-2内let-7a的表达上调会抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞的凋亡。RT-qPCR检测显示：let-7amRNA在空白组和阴性对照组（NC组）的表达水平明显低于实验组（P〈0.05）;HMGA2mRNA在空白组、NC组的表达水平明显高于实验组（P〈0.01）。Westernblot检测细胞中HMGA2蛋白的表达显示：实验组HMGA2蛋白的表达量明显低于空白组和NC组（P〈0.01）。上述实验中空白组与NC组之间比较均无统计学差异（P〉0.05）。结论：let-7a能够显著下调HMGA2基因和蛋白的表达,抑制喉癌细胞的增殖,促进其凋亡,为喉癌基因靶向治疗提供坚实的理论基础。

简介：摘要目的探讨Bcl2相关抗凋亡基因3(BAG3)对食管癌细胞的增殖作用及其与微小核糖核酸let-7(miRNA let-7)的相关性。方法抽取2016年5月至2019年3月焦作市第二人民医院收治的食管癌患者180例，通过手术取患者的食管癌病灶组织及食管正常组织，分别作为观察组与对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测观察组与对照组中BAG3及miRNA let-7表达量。采用person相关系数分析法分析BAG3与miRNA let-7的相关性。通过对食管癌细胞EC109及TE10细胞进行传代培养并转染BAG3，构建过表达及敲低BAG3的EC109及TE10细胞，分别作为BAG3过表达组与敲低BAG3组，监测两组细胞增殖情况。结果观察组BAG3表达量高于对照组(P<0.05)。观察组miRNA let-7低于对照组(P<0.05)。BAG3蛋白与miRNA let-7呈负相关。BAG3过表达组增殖速度高于敲低BAG3组。结论BAG3在食管癌病灶组织中高表达，在食管正常组织中低表达，具有促进食管癌细胞增殖作用。食管癌中BAG3与miRNA let-7呈负相关，敲低BAG3表达量可抑制肿瘤细胞增殖。

简介：摘要：目的：分析COL1A1在膀胱癌及癌旁组织中表达差异，研究COL1A1下调抑制膀胱癌细胞增殖和迁移的机制。方法：采用实时荧光定量 PCR检测 8例膀胱癌组织、癌旁组织和膀胱癌细胞系T24、UM-UC-3，以及人正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中COL1A1 mRNA及预测miRNA表达水平；敲减COL1A1和阴性对照转染T24，通过 CCK-8、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移水平；生物信息学预测COL1A1上游miRNA, miRNA-29b-3p mimic转染 T24细胞后实时荧光定量 PCR检测检COL1A1 mRNA表达水平；采用双荧光素酶实验验证miRNA-29b-3p和 COL1A1之间的关系。结果：与癌旁组织相比，COL1A1在膀胱癌组织中表达明显升高。COL1A1敲减后，明显抑制 T24增殖、迁移；生信预测miRNA-29b-3p与COL1A1靶向结合证据最强；与癌旁组织相比，miRNA-29b-3p在膀胱癌组织中表达明显降低，miRNA-29b-3p过表达之后，COL1A1 mRNA表达水平明显降低。双荧光素酶报告实验显示，miRNA-29b-3p靶向 COL1A1 mRNA的 3'非编码区。结论：相较于癌旁组织，COL1A1在膀胱癌组织中高表达，miRNA-29b-3p在膀胱癌组织中低表达；miRNA-29b-3p通过靶向下调COL1A1实现抑制膀胱癌进展，从而降低膀胱癌细胞的增殖、迁移。

简介：摘要：晚期宫颈癌患者已经丧失根治性手术的时机，放化疗是该病首选治疗方案。但晚期宫颈癌患者的死亡率较高，无病生存率较低，为进一步提高患者的治疗效果，改善预后情况，积极探讨宫颈癌放化疗敏感性是很有必要的。宫颈癌分子机制比较复杂，涉及较多基因表达、蛋白质变化，比如微小 RNA（miRNA）可在基因表达调控中发挥显著作用。文章主要分析miRNA-21对晚期宫颈癌放化疗敏感性的影响及其意义，希望能为临床研究宫颈癌放化疗提供一定的理论参考。

简介：摘要目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体中微小RNA(miRNA)的差异表达，为进一步阐明H．pylori的致癌机制提供新线索。方法超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组细胞释放的外泌体，采用透射电镜、纳米粒子跟踪分析和Western blot对外泌体进行鉴定；荧光染料PKH67标记的外泌体与THP-1源性巨噬细胞共孵育，共聚焦显微镜观察巨噬细胞内吞外泌体的情况；miRNA基因芯片分析两组细胞外泌体miRNA差异表达谱，采用qRT-PCR对其中4个差异表达miRNA进行验证；生物信息学软件预测、分析部分差异表达miRNA结合的靶基因及其功能和可能参与的信号通路。Cy3标记差异表达miR-382-5p，观察其能否通过外泌体传递给巨噬细胞；qRT-PCR和ELISA检测miR-382-5p mimic转染巨噬细胞表型分子CD206和细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达，流式细胞术分析表达CD206和HLA-DR的细胞比例。结果提取的外泌体符合外泌体形态，且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101；外泌体与THP-1巨噬细胞共孵育12 h后被细胞内吞；与对照组相比，H.pylori刺激组有上调miRNA 130个、下调miRNA 111个；部分差异表达miRNA预测的靶基因主要参与调节PI3K-AKT、NF-κB、JAK-STAT、干细胞多能性等炎症和肿瘤相关通路。miR-382-5p可通过外泌体传递给巨噬细胞，诱导巨噬细胞M2型表型分子CD206和细胞因子IL-10表达，并抑制TNF-α、IL-6表达，CD206highHLA-DRlow细胞比例升高。结论H．pylori处理SGC-7901细胞导致其外泌体miRNA表达水平发生显著改变。生物信息学预测结果显示，部分差异表达miRNA的靶基因产物在炎症和肿瘤相关信号通路调节中发挥重要作用。miR-382-5p具有诱导巨噬细胞向M2极化的潜能。

简介：摘要微小非编码RNA(microRNA, miRNA)作为参与基因表达调控的非编码小RNA，在精神疾病的发生发展中发挥重要效应。有证据表明，精神疾病患者存在miRNAs表达失调。由于其在外周血、脑脊液中的稳定性与可定量检测性，miRNA是极具吸引力的生物标志物。本文旨在探讨精神疾病与miRNAs之间的关系以及miRNAs参与疾病发生的可能机制，重点关注3种常见的高致残、高致死性的精神障碍，即精神分裂症、双相情感障碍和抑郁症，综述从各疾病特有的失调miRNA分子到跨疾病的共同失调miRNA。本文总结了2016年至2020年相关研究积累的证据，并探究了一些显著失调的miRNA的功能以及miRNA在精神病学研究领域的应用前景。

简介：摘要目的探讨肝动脉阻力指数（Hepatic artery resistance index，HARI)、miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断及预后评估的临床价值。方法选择2016年12月至2019年02月沧州市中心医院EICU收治的176例脓毒症休克患者作为研究对象，根据有无肝损伤分为无肝损伤组（90例）、肝损伤组（86例）。肝损伤组患者再按肝损伤程度分为轻度肝损伤组（20例）、中度肝损伤组（25例）、重度肝损伤组（41例）。脓毒症休克合并肝损伤患者根据28 d转归分为存活组（26例）和死亡组（60例）。选择健康体检者40例作为对照组。分析两组患者的临床资料，采用彩色多普勒超声测定肝动脉阻力指数（HARI)，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR)测定血清miRNA- 122a表达量。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析HARI、血清miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断价值。采用二元Logistic回归分析影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的危险因素。结果①与对照组比较，脓毒症休克无肝损伤组、脓毒症休克合并肝损伤组患者的HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，差异有显著统计学意义(P <0.01)。ROC曲线分析显示，HARI、血清miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC分别为：0.872[95% CI=(0.813, 0.919)]、0.796 [95% CI=(0.728, 0.854)]。当HARI最佳临界值为0.738时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为77.65%，特异度为83.53%。当miRNA-122a表达量最佳临界值为2.80时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为71.76%，特异度为75.29%。当HARI联合miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC为0.927[95% CI=(0.876, 0.961)]，最佳临界值为0.276时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为91.76%，特异度为85.29%。②脓毒症休克无肝损伤组与轻度肝损伤组比较，HARI差异无统计学意义(P>0.05)，而血清miRNA-122a差异有统计学意义(P <0.01)。随肝损伤严重程度加重，HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，重度肝损伤组显著高于轻度和中度肝损伤组，差异有显著统计学意义(P <0.01)。③与存活组比较，单因素分析显示，脓毒症休克合并肝损伤28 d死亡组患者的肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、PCT、Lac、miRNA-122a、HARI显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。④二元Logistic回归分析发现，肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、HARI、miRNA-122a是影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的独立危险因素。结论HARI联合血清miRNA-122a检测对评估脓毒症休克合并肝损伤具有较高的敏感度和特异度，且对预后评估有一定的临床价值。

简介：【目的】探讨糖尿病视网膜病(diabeticretinopathy,DR)变患者血清、玻璃体中miRNA-200b、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达水平及临床意义。【方法】选取2016年2月至2017年2月我院收治的79例2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)患者为研究对象,根据是否合并DR及病变程度将其分为增殖型DR组(PDR组)(27例)、单纯型DR组(BDR组)(30例)、单纯T2DM组(NDR组)(22例)3组,同期选取25例体检健康者为对照组(NC1组),选取7例因孔源性视网膜脱离行玻璃体切割术患者作为玻璃体研究对照组(NC2组),利用全自动生化分析仪检测各组血糖、血脂指标,采用qRT-PCR检测miRNA-200b表达水平,采用ELISA法检测VEGF水平。【结果】DR组空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、血清VEGF水平明显高于NC1组,差异有统计学意义(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、血清miRNA-200bmRNA水平明显低于NC1组(P<0.05),且随着DR病情加重,空腹血糖、糖化血红蛋白、餐后2h血糖、低密度脂蛋白胆固醇、VEGF呈明显递增趋势(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、miRNA-200bmRNA呈明显递减趋势(P<0.05);PDR组玻璃体中VEGF水平明显高于NC2组(P<0.05),miRNA-200bmRNA水平明显低于NC2组(P<0.05);相关性分析结果显示,DR患者血清中miRNA-200b表达水平与糖化血红蛋白呈明显负相关(r=-0.426,P<0.05),VEGF水平与糖化血红蛋白呈明显正相关(r=0.579,P<0.05),miRNA-200b与VEGF表达呈明显负相关(r=-0.512,P<0.05)。【结论】DR血清、玻璃体中miRNA-200b呈明显低表达,VEGF明显高表达,二者血清中表达异常与DR患者血糖控制差、代谢紊乱密切呈正相关。

简介：摘要MicroRNA（miRNA）是RNA的一种具体类型，其大小一般在21～23核苷酸范围内，因而属于单链小分子RNA。在中枢神经系统中，存在一组特有的miRNA，其在中枢发育、神经元分化、突触塑形各过程中均扮演着非常重要的角色，关系着神经系统功能发挥，因此引起了医学界的高度关注，成为了神经系统研究的新焦点，相当一部分的学者对此展开了研究。本文就miRNA在中枢神经系统发育中的作用机制及临床应用情况进行综述，旨在为妊娠糖尿病引发新生儿神经行为发育异常所致的大脑认知功能障碍的基因诊断和治疗提供新的思路。

简介：目的揭示参与绝经后骨质疏松症(postmenopausalosteoporosis,PMOP)生理病理过程的核心基因,并预测可能与之相互作用的微小核糖核酸(micro-ribonucleicacid,miRNA)。方法选取NCBI基因表达综合数据库基因芯片GSE57273,应用GEO2R和Morpheus分析软件获得差异基因(differentiallyexpressedgenes,DEGs),并通过DAVID(DatabaseforAnnotation,VisualizationandIntegratedDiscovery)进行功能富集分析。应用STRING(SearchToolfortheRetrievalofInteractingGenes)、Cytoscape和MCODE(MolecularComplexDetection)软件建立蛋白相互作用网络计算DEGs的各个连接度并分析网络集簇模块。由CyTargetLinker预测与核心基因互作的miRNA。结果本研究共获得841个DEGs,其功能主要富集于基因表达过程,细胞大分子生物合成过程等。蛋白相互作用网络共包含523个节点与2026条连线。本研究列出了前3个集簇模块,同时筛选出10个核心基因:HSP90AA1、EP300、SMARCA2、RANBP2、ASH1L、EIF4E、PTEN、CNOT6L、RPL7、KRAS,并预测出37个miRNA可与其中7个核心基因靶向性相互作用。结论核心基因与其相互作用的miRNA的发现可能有助于了解PMOP的病理机制,或为药物的开发提供治疗靶点。同时,通过对核心基因富集功能的鉴定为PMOP建立新的科学假说提供依据。

简介：摘要外泌体是一种具有磷脂双分子层的微小囊泡，可以向受体细胞传递生物大分子进而影响受体细胞的生物过程。巨噬细胞作为重要的固有免疫细胞，在促进人体组织发展、抵御病原体入侵、维持机体内环境稳态方面发挥重要作用。M2型巨噬细胞更与肿瘤等重大疾病的发生发展密不可分。近期，一部分研究者将目光投放在M2型巨噬细胞与外泌体两大热点之上，通过大量的实验发现，M2型巨噬细胞来源的外泌体可通过携带微小核糖核酸(microRNA，miRNA)调节靶基因的表达，进而影响受体细胞相关蛋白的合成，这种作用可对机体生物功能产生影响，进而影响疾病的进程。M2型巨噬细胞分泌的外泌体中miRNA或可成为临床上疾病诊疗的新靶点，可为重大疾病如癌症的诊断与监控、药物载体等方面在个体化医疗领域中提供新的思路与可能。

简介：摘要目的筛选17-AAG-M诱导的人非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞在X线下差异表达miRNA并研究其对放射敏感性的影响。方法对17-AAG-M及4Gy处理的A549细胞完成芯片筛选，公共数据库观察兴趣miRNA在肿瘤中的表达，GO及KEGG分析目标miRNA并通过qPCR验证。MTT及克隆形成实验分别检测目标miRNA在X线作用下对A549细胞存活率及克隆增殖活力的影响，单击多靶模型拟合实验方程分析放射增敏性。结果筛选出20个差异表达miRNA，其中下调的hsa-miR-30a-3p在数据库中表现出与肺癌的密切相关性，涉及含细胞增殖在内的50个生物学过程，影响MAPK信号通路、肿瘤相关路径及细胞周期等。与17-AAG-M组相比，hsa-miR-30a-3p在17-AAG-M和X线共同作用下，相对表达量由2.42降至0.16。而hsa-miR-30a-3p抑制A549细胞存活率，并在X线作用下由78.52%下降至69.00%。上调其表达能抑制肿瘤细胞增殖，提高放射敏感性，放射增敏比为1.18。在17-AAG-M作用下上述表现更加明显。结论A549细胞中hsa-miR-30a-3p在17-AAG-M和X线的作用下差异表达，且上调其水平能抑制细胞生长及增殖，并提高放射敏感性，联合17-AAG-M后抑制效果更显著。

简介：摘要目的探讨miRNA-296-5p（miR-296-5p）对缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关机制。方法选择人胰腺癌细胞株PANC-1；收集上海市奉贤区中心医院和蚌埠医学院附属第一医院2010年1月至2014年12月55例胰腺癌患者手术切除的胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织。采用免疫组织化学及原位杂交法检测胰腺癌及癌旁正常胰腺组织芯片中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、miR-296-5p的表达水平，分析二者的相关性及其与患者临床病理特征的关系。PANC-1细胞分为缺氧组和常氧组，采用Transwell法测定两组细胞迁移与侵袭能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-296-5p及HIF-1α mRNA表达。转染小干扰RNA（siRNA）干扰HIF-1α的表达，将细胞分为PANC-1组（空白对照）、PANC-1-NC组（阴性对照）、PANC-1-siRNA组，检测miR-296-5p的表达；同时转染miR-296-5p激动剂和抑制剂，分为Agomir-miR-296-5p组（激动剂组）、Agomir-miR-296-5p-NC组（激动剂阴性对照组）、Antagomir-miR-296-5p组（抑制剂组）、Antagomir-miR-296-5p-NC组（抑制剂阴性对照组）；Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-296-5p启动子区是否存在HIF-1α的结合位点。结果胰腺癌组织HIF-1α高表达率高于癌旁正常胰腺组织[81.8%（45/55）比0（0/10），P<0.01]；胰腺癌组织miR-296-5p高表达率低于癌旁正常胰腺组织[12.7%（7/55）比90.0%（9/10），χ2=27.23，P<0.01]。HIF-1α表达和miR-296-5p表达呈负相关（r=-0.53，P<0.01）；miR-296-5p低表达与肿瘤长径、TNM分期、淋巴结转移均有关（均P<0.05）。常氧组PANC-1侵袭细胞数为（15.3±2.1）个，缺氧组为（24.7±1.5）个，差异有统计学意义（t=0.26，P=0.003）；常氧组PANC-1迁移细胞数为（20.7±3.8）个，缺氧组为（32.7±1.2）个，差异有统计学意义（t=5.25，P=0.006）。常氧组PANC-1细胞HIF-1α mRNA相对表达量为0.30±0.02，缺氧组为1.00±0.01，差异有统计学意义（t=56.45，P<0.01）；常氧组PANC-1细胞miR-296-5p相对表达量为3.05±0.20，缺氧组为1.14±0.04，差异有统计学意义（t=16.05，P<0.01）。PANC-1组、PANC-1-NC组、PANC-1-siRNA组侵袭细胞数分别为（24.7±1.5）个、（25.7±1.5）个、（12.0±1.7）个，差异有统计学意义（F=68.13，P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞侵袭能力下降（t=9.50，P=0.001）；迁移细胞数分别为（32.7±1.2）个、（37.0±1.0）个、（17.3±1.2）个，差异有统计学意义（F=262.09，P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞迁移能力下降（t=16.26，P<0.01）。Antagomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力增强（均P<0.05）；Agomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力减弱（均P<0.05）。荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性结果显示，miR-296-5p存在与HIF-1α结合的靶点。结论HIF-1α通过负向调控miR-296-5p在缺氧诱导的胰腺癌细胞的侵袭、迁移中发挥重要作用。

简介：摘要目的探讨紫云英苷上调miRNA-513（miR-513）对前列腺癌细胞株C4-2B细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法选取前列腺癌细胞株C4-2B，采用125 μg/L紫云英苷作用48 h者为紫云英苷组，未处理者为对照组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测两组C4-2B细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期。采用miRNAMap预测软件预测miR-513的靶基因为叉头框蛋白R2（FOXR2），并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-513和FOXR2 mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测两组细胞中FOXR2、细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）、β-actin和细胞周期蛋白H（cyclin H）的表达。结果与对照组比较，培养第2、3、4、5天紫云英苷组C4-2B细胞增殖活力均降低（均P<0.05）。对照组和紫云英苷组S期细胞比例分别为（48.1±3.2）%和（36.0±2.1）%，紫云英苷组S期细胞比例降低（t=3.12，P=0.021）；G2期细胞比例分别为（24.9±3.3）%和（11.8±2.4）%，紫云英苷组G2期细胞比例降低（t=3.18，P=0.019）。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平分别为1.01±0.22和6.55±0.61，紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平升高（t=7.70，P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验验证FOXR2为miR-513的靶基因。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中FOXR2 mRNA相对表达水平分别为1.04±0.14和0.19±0.06，差异有统计学意义（t=5.53，P=0.002），提示紫云英苷促进miR-513表达后，FOXR2 mRNA表达降低。紫云英苷组C4-2B细胞FOXR2、CDK7和cyclin H蛋白相对表达水平较对照组均降低。结论紫云英苷可能通过上调miR-513的表达，抑制前列腺癌C4-2B细胞增殖，诱导细胞周期停滞。

简介：摘要目的探讨原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency，POI)患者miRNA-146、氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，OX-LDL)、活性氧(reactive oxygen species，ROS)的表达及临床意义。方法100例POI患者作为观察组，随机匹配100例卵巢功能正常的妇女作为对照组。通过荧光定量PCR(real-time PCR，qRT-PCR)检测血清miRNA-146，酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测OX-LDL和ROS，超声评估卵巢体积和卵巢动脉收缩期峰值血流速度。miRNA-146模拟物或抑制剂转染小鼠卵巢颗粒细胞，与OX-LDL共培养，评估其细胞活力、集落形成能力、细胞凋亡率和Toll样受体4(toll like receptor 4，TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)通路蛋白的表达。结果与对照组相比，POI组miRNA-146表达水平显著下降(P<0.05)，OX-LDL和ROS表达水平显著升高(P<0.05)，卵巢体积显著缩小(P<0.05)，卵巢动脉收缩期峰值血流速度显著下降(P<0.05)。OX-LDL呈剂量依赖性抑制颗粒细胞活性，上调miRNA-146表达可增加卵巢颗粒细胞活力和集落数，降低其凋亡率和TLR4/NF-κB表达水平。结论miRNA-146可能靶向调控下游TLR4/NF-κB信号通路，影响OX-LDL和ROS诱导的POI氧化应激和炎症反应。miRNA-146有望成为早期预测POI的生物标志物和治疗新靶点。

简介：摘要目的探索激素对股骨头骨微血管内皮细胞(BMEC)miRNA表达谱的影响及相关的生物信息学分析。方法选取SPF级8周龄雌性SD大鼠14只，适应性饲养1周后，按照随机数字表法分为2组，模型组7只、空白组7只。模型组腹腔注射脂多糖(20 μg/kg)，每次间隔24 h，连续注射2次，24 h后肌内注射大剂量甲强龙(40 mg /kg)，每次间隔24 h，连续注射3次。空白组与模型组相同的时间点给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射、肌内注射。注射后4周随机从2组中各取2只大鼠行股骨头病理苏木精-伊红染色，评估造模是否成功，同时行股骨头BMEC培养，形态学观察与鉴定及生物信息学检测如使用Agilent GeneSpring软件对差异表达的miRNA进行筛选，采用miRWalk 2.0软件对差异表达的miRNA进行靶基因预测，Panther数据库被用来预测靶基因的信号通路，Gene Ontology (GO)对靶基因进行功能注释分析。结果通过联合采用脂多糖及甲强龙成功地建立早期股骨头坏死(ONFH)大鼠模型；分离的骨BMEC纯度高达98.5%；与空白组比较，模型组共检测到4个差异有统计学意义异常表达的miRNA(2个上调：miR-132-3p、miR-335，2个下调：miR-466b-2-3p、let-7c-1-3p)，其靶基因共3 808个；靶基因调控的信号通路可能包括JAK/STAT signaling pathway等，其富集的生物途径包括metabolic process等，富集在细胞定位中包括organelle、nucleoid等，富集在生物学功能中的包括nucleic acid binding transcription factor activity等。结论激素可诱导股骨头BMEC miRNA的表达谱发生变化。miR-132-3p和miR-335的异常表达可能在激素性股骨头坏死发生中起重要作用。

简介：摘要目的探讨血清外泌体miRNA-155-5p（miR-155-5p）表达与食管鳞状细胞癌（ESCC）患者预后的关系。方法收集2014年10月至2015年12月福建省肿瘤医院收治的336例ESCC患者标本，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清外泌体miR-155-5p的相对表达量。用X-tile软件获得血清外泌体miR-155-5p表达水平的截断值，根据最佳截断值分为miR-155-5p低表达组和高表达组。运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用Cox比例风险回归模型进行生存分析。结果采用X-tile软件获得血清外泌体miR-155-5p表达水平的截断值为2.340。根据此截断值将患者分为miR-155-5p低表达组（<2.340）51例和高表达组（≥2.340）285例。两组患者年龄（χ2=0.020，P=0.887）、性别（χ2=0.283，P=0.595）、肿瘤部位（χ2=0.063，P=0.977）、分化程度（P=0.474）、临床分期（χ2=3.996，P=0.136）和是否手术治疗（χ2=0.941，P=0.332）比较，差异均无统计学意义。血清外泌体miR-155-5p高表达组患者的死亡风险比低表达组高（HR=1.763，95% CI 1.049~2.961，P=0.032）。结论血清外泌体miR-155-5p表达水平高与ESCC不良预后相关，可作为ESCC患者预后的新型标志物。