简介:【摘要】目的:分析实时定量PCR实验室开展强化管理对污染的预防效果。方法:我中心于2020年6月在实时定量PCR实验室开展强化管理,分别于强化管理开展前(2019年6月-2020年5月)、强化管理开展后(2020年6月-2021年5月)对工作人员项目合格率进行对比。结果:强化管理后,工作人员操作流程知晓、污染来源知晓、个人防护措施、手卫生、污物处理、高压消毒锅使用等检查项目合格率均较强化管理前更高,数据差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实时定量PCR实验室开展强化管理有助于提高工作人员防范意识,做好污物处理,避免污染发生,值得推广。
简介:目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TV)DNA多聚酶I(polA)基因序列,设计MGB—Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。
简介:目的应用PCR检验技术在口岸进行鼠疫检测,以提高鼠疫诊断的准确性和灵敏度,建立适合于口岸鼠疫检测的快速诊断方法,提高鼠疫检测水平.方法首先,根据口岸地区样品的特点确定相应PCR检测方法,然后对样品进行PCR检测、鼠疫细菌学检验和反向间接血球凝集试验.结果形成了一套适合于口岸地区鼠疫PCR检测的方法,灵敏度为7cfu的鼠疫菌.PCR反应体系中以dUTP代替DTTp,加入UDG酶防止产物污染,对特异性和敏感性无影响.对在口岸地区采集的鼠类标本111份、进口旱獭皮张500份进行了PCR检测,并分别进行鼠疫细菌学、反向间接血球凝集试验.PCR检测出3份阳性鼠类标本,与鼠疫细菌学检验结果一致:对进口旱獭皮张的PCR检测和反向间接血球凝集试验均为阴性.结论经实验研究建立了一套完整的鼠疫PCR检测方法,本方法特异性和敏感性强、操作简便、快捷、成本较低,适合在口岸地区推广应用.
简介:摘要目的比较PCRHBV-DNA和ELISAHBsAg两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况,从而确定本次研究的试验方法。方法现场采集内窥镜各关键部位(镜身、孔道、活检钳)的样品207份,平均分成两份,按各自所用试剂盒的要求分别进行试验,比较两种试验的阳性检出率、一致性等试验评价指标。结果PCRHBV-DNA阳检率为27.54%、ELISAHBsAg阳检率为2.42%,经χ2检验,χ2=4.63P=0.031、一致性检验,kappa=0.089,P=0.008,由此说明两种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中有显著性差异。结论PCRHBV-DNA对与内窥镜中痕量的HBV的检测试验方法优于ELISAHBsAg方法,在本次调查研究中应该采用PCRHBV-DNA的检测方法。
简介:摘要目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定,对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离,对两种方法的检测结果进行分析,对比特异性及灵敏度。结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例,阳性率24.6%;细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例,阳性率12.8%,实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸,是实验室快速诊断的有效手段。
简介:摘要目的通过观察我院收治的对宫颈病变患者的临床诊断资料,探讨分析采用实时荧光PCR检测高危型HPV的价值。方法对我院收治的158例宫颈病变患者患者,进行实时荧光PCR检测,分析检测结果,并与第2代杂交捕获法(HC-Ⅱ)的检测结果对比。结果HPV在宫颈癌患者阳性表达率达90%以上,与HC-Ⅱ相比,差异无统计学意义;PCR检测宫颈病变与HC-Ⅱ的检测结果的阳性率分别为74.7%与70.9%,差异无统计学意义(P>0.05);但两种方法检测HSIL的HPV阳性率明显高于宫颈炎症、湿疣(P<0.01),除LSIL外,其他病变中的PCR检出率均略高于HC-Ⅱ。结论采用实时荧光PCR检测高危型HPV,可用于确诊患者是否患有宫颈癌,提示高危型HPV感染与宫颈病变、宫颈癌发生有一定的相关性,值得进一步推广与应用分析。
简介:【目的】谷斑皮蠹是一种重要的检疫性害虫,在新疆周边多个国家分布,口岸检疫人员多次从进境货物中截获谷斑皮蠹,该虫对新疆的农业生产极具威胁。【方法】以谷斑皮蠹的16SrDNA基因为靶序列,用昆虫通用引物对4种供试皮蠹进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆和测序,用生物软件设计检测谷斑皮蠹的特异性引物与探针。【结果】设计的特异性引物(TG-SNP-F/TG-SNP-R)及所建立的常规PCR方法能有效检测出谷斑皮蠹,其扩增产物的片段大小为250bp,灵敏度为3ng·μL^-1设计的特异性引物(TG-F/TG-R)和探针(TG-probe),以及所建立的实时荧光PCR方法,对谷斑皮蠹的检测特异性强,灵敏度达0.8fg·μL^-1【结论】建立的常规PCR方法和实时荧光PCR检测方法能够对谷斑皮蠹进行准确鉴定,为口岸检疫人员检测进境货物中携带的谷斑皮蠹提供技术支持。