简介：目的用PCR和ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA（mtDNA）D环高变区,通过碱基组成分析mtDNA的异质性。方法从华东汉族群体选取12名无关个体,用PLEX-ID平台进行mtDNA分型。该平台使用12对引物,对mtDNA高变区1（HVⅠ,引物所跨区域为15893~16451）进行碱基组成分析;使用另外12对引物,对mtDNA高变区2（HVⅡ,引物所跨区域为5~603）进行碱基组成分析,考察mtDNA异质性频率。结果mtDNA多态性区域的碱基组成信息反映出区段内有无异质性。在高变区Ⅰ的12个区段中,有3个区段表现出多聚C长度异质性：在mtDNA高变区Ⅱ（31~576）的12个区段中,有3个区段检见点异质性,另外5个区域检见PolyC长度异质性。结论群体调查表明,mtDNA的序列异质性多见于高变区Ⅱ的103~267区段,多聚C长度异质性多见于高变区Ⅰ的16124~16201、16157~16201、16182~16250区段和高变区Ⅱ的234~367、431~576区段。将mtDNA标记用于母系关系检验和（或）个体识别时,需要格外留意这些异质性信息,以免结论错误。

简介：应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联一段与丙肝病毒(HCV)核酸某段序列互补的探针使之成为特异性活化乳胶颗粒。将这种乳胶颗粒混悬在6M硫氰酸胍中，在检测时，将待检血清与之混合并置室温振摇，病毒RNA在病毒脱壳后释放出来并与活化颗粒的探针杂交，从而被分离出来．本研究应用这种方法检测临床血清50例，并与经典法、蛋白酶K法，血清直接扩增法进行比较．结果表明：一步法提取RNA，检测方法简便、敏感性高、重复性好，是一种较理想的RNA分离技术．

简介：摘要目的探析分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用效果。方法选取167份肺结核患者痰液为研究标本，分别采用分子信标荧光定量PCR技术、抗酸染色法、集菌培养法对标本进行检测，回顾性分析三种检测方法的阳性检出率。结果分子信标荧光定量PCR技术的阳性检出率为70.66%，抗酸染色法为29.34%，集菌培养法为42.51%，分子信标荧光定量PCR技术的阳性检出率优于其他两种检测方法（P＜0.05）。结论分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌的阳性检出率、特异性、敏感性较高，可为肺结核的临床诊断和治疗提供借鉴，值得进一步推广和应用。

简介：摘要目的研究从业人员伤寒痢疾快速筛查中采用荧光PCR技术的效果与作用。方法选择2016年8月至2017年8月从业人员进行肛拭子采集，共采集粪便检测样本9000份，其中传统伤寒痢疾检测结果作为参照组，荧光PCR技术检测结果作为实验组，对比实验组与参照组从业人员伤寒痢疾筛查阳性结果。结果实验组沙门氏菌（1.44‰）及志贺氏菌（1.67‰）检出率明显高于参照组（0.44‰、0.56‰），两者差异明显（P＜0.05）。结论与传统检测方式相比，荧光PCR技术更加方面，且特异性与灵敏性较强，能够在短时间内得出准确的检测结果，应予以推广应用。

简介：摘要目的探究对结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变以PCR-反向点杂交法检测的效果。方法设计结核分歧杆菌rpoB基因引物，采用PCR-反向点杂交法对40例结核杆菌临床菌株耐药性进行检测，对照由DNA测序法检测的标准结核分歧杆菌（H37Rv）rpoB基因，确定rpoB基因的变异情况，对PCR-反向点杂交法的灵敏度和准确性作出评价。结果40株临床菌株中有11株利福平敏感株的基因序列与对照的H37Rv相同，剩下的29株耐药株中检测到变异基因27株，其特异性为100%，阳性率为93.1%。结论rpoB基因本身高度保守,但由于rpoB基因突变导致结核分枝杆菌对利福平耐药。本研究使用PCR-反向点杂交法针对rpoB基因高突变区设计引物，此方法快速、简便、准确,能有效监测临床标本中结核分枝杆菌,对临床早期诊治结核病有极大帮助。

简介：[目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。

简介：目的：评价一种直接从标本中快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光PCR方法。方法：临床送检标本中筛选出46份金黄色葡萄球菌阳性的标本,进行实时荧光聚合酶链反应（PCR）检测,并与全自动细菌鉴定仪（VITEK-2Compact）/头孢西丁纸片扩散法进行比较,评价实时荧光PCR方法的敏感性及特异性。结果：VITEK-2Compact分离出金黄色葡萄球菌46株,其中MRSA12株,与头孢西丁纸片扩散法结果一致。实时荧光PCR法检测出金黄色葡萄球菌46株,其中MRSA13株,敏感性及特异性分别为100%（95%CI,75.75,100）,97.06%（95%CI,85.08,99.48）。2种方法有很好的一致性[Kappa=0.945（95%CI,0.839,1.000）]。结论：实时荧光PCR法是一种能从标本中直接检测MRSA的快速,敏感的方法。

简介：摘要目的鼻咽癌病人多项免疫功能及EB病毒PCR检测的综合研究。方法本文选取我院于2014年04月~2015年04月收治的18例鼻咽癌患者，对其免疫功能及其EB病毒PCR检测方式之间存在的关系加以有效研究和探讨，进一步对鼻咽癌患者血液中EB病毒抗体、其他氧化物活性等多项指标值进行测定。结果鼻咽癌患者患者的锌离子、铜离子、钙离子微量元素指标大小结果分别是（16.09±5.17）umol/l、（17.40±5.13）umol/l、（2.19±0.17）umol/l，和正常人群的三项微量元素指标大小结果对比存在显著性差异（P<0.05），具有统计学意义。结论鼻咽癌患者采用通过开展免疫功能及其EB病毒PCR检测方式的有效探索，发现鼻咽癌患者血清中含有多种微量元素及其EB病毒抗体等物质成分，这对于通过血液指标含量来测定鼻咽癌疾病奠定了坚实的条件。

简介：摘要目的建立可以检测阿瓦朗病毒(Avalon virus，AVAV)和休斯病毒(Hughes virus，HUGV)两种内罗病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法，并进行初步的评价。方法收集、整理、比对、分析在公共数据库发布的两种病毒基因组核苷酸序列，确定检测靶标，设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法可有效扩增检测AVAV和HUGA靶标RNA，检测限分别约为20拷贝/μl和70拷贝/μl，检测科萨努尔森林病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、发热伴血小板减少综合征、内罗毕羊病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，两种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性比较分析显示变异系数小于2%。结论本研究建立的检测AVAV和HUGV的实时荧光定量RT-PCR方法，可用于临床样本检测和媒介生物、宿主动物标本筛查，便于病原的快速识别和疾病诊断。

简介：摘要： 为了对猪繁殖及呼吸综合征病毒的冻干疫苗，在具体生产阶段的支原体检验体系进一步完善，本文展开对冻干疫苗的支原体检验工作，通过采用 DNA 荧光染色、 PCR 技术，对疫苗生产不同阶段进行检验，证实这两个技术方法的技术可行和优势。发现两种检测技术均可以获得可靠的疫苗支原体检验结果，提高支原体检出率确保冻干疫苗的生产质量。

简介：病毒的紧张的坏死(VNN)在海洋的鱼引起高死亡，特别在grouper，全球并且在中国。因为没有有效疫苗或药处理VNN，早察觉和预防是重要的堵住它的爆发。在这研究，反向的抄写聚合酶链反应(RT-PCR)为VNN病原体的快速、方便、敏感的察觉被开发，紧张的坏死病毒(NNV)，在grouper。整个过程从RNA抽取在3.5h以内被完成到PCR产品可视化。这个方法的察觉限制是NNVRNA标准的200个拷贝，它对应于病毒粒子的200个拷贝。这个RT-PCR方法对NNV察觉没有特定对另外的鱼跨反应病毒的疾病病原体例如传染胰腺的坏死病毒(IPNV)，传染造血的坏死病毒(IHNV)，鲤鱼病毒(SVCV)的春天viraemia，流行于家畜的造血的坏死病毒(EHNV)，并且大黄croakeriridovirus(LYCIV)。与这个方法，看到橘子的grouper(Epinepheluscoioides)从育种站与或没有在福建省的VNN流行病的发生的油炸食品被检测。结果都显示出那或当从没有VNN的二个育种站的40%油炸食品或25%流行病也作为NNV被检测时，从有流行病的发生的二个育种站的93%油炸食品作为积极被诊断积极，显示这个RT-PCR方法能被用于快速，NNV感染的敏感察觉并且在VNN流行警戒适用。

简介：

简介：摘要为了可以同时对待测样品的基因序列进行检测，在本次有那就中采用多重pcr分析技术来全方位检测转基因大豆食品，为了将增扩结果当中的假阴性结果排除，大豆外援凝集素基因和肌动蛋白基因作为内部对照来针对所有pcr反应效率进行评价。实验结果可以证明，在转基因大豆含量为1.5‰时，仍然可以保持较高的转基因鉴定可靠性，所以这种检测方法敏感度较高。本文针对这种检测方法进行了介绍，其检测程序简单，敏感程度高，需要单一反应就可以对多个目标基因序列进行检测，所以可以用于转基因原料加工进行高精度和高灵敏度检测。

简介：摘要目的本文分析的是PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体的方式和效果。方法本文选择了在2015年6月到2017年6月到我院接受检查的200例男性泌尿生殖系感染患者，应用PCR技术对其进行了淋病双球菌、沙眼衣原体、解脲支原体三种性病病原体检测，并统计了患者的检测阳性结果。结果在此次检查中淋病双球菌感染患者有24例（12%），沙眼衣原体感染患者有30例（15%），淋病双球菌感染患者有16例（8%），淋病双球菌混合沙眼衣原体感染患者有10例（5%），淋病双球菌混合解脲支原体感染患者有4例（2%），沙眼衣原体混合解脲支原体感染患者有6例（3%），未发现三种性病病原体共同感染患者。结论PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体具有显著效果，适合被广泛应用。

简介：Objective:Todevelopasensitive,specificandsimplemethodfordetectionofextremelylownumbersofT.palliduminclinicalspecimens,asasignificantadditiontotheserologictestsforsyphilisdiagnosis.Methods:Double-tubenestedPCR(DN-PCR)andsingle-tubenestedPCR(SN-PCR)assayswereperformedtoamplifyspecificfragmentsoftheDNApolymeraseIgene(polA)ofT.pallidum.SensitivityandspecificityofthetwoPCRassaysweretested.EightysixwholebloodspecimensfrompersonswithsuspectedsyphilisweredetectedbythetwonestedPCRmethods.TheTPPAtestwasusedasacomparisonfordetectingsyphilisinserafromcorrespondingpatients.Results:OnlyspecificampliconscouldbeobtainedduringamplificationoftheT.pallidumpolAgeneandthedetectionlimitwasapproximately1organismwhenanalyzedongelbythetwoPCRmethods.Of86clinicalspecimens,62werepositivebyTPPA.Ofthese,54and51werepositivebytheDN-PCRandSN-PCR,respectively,whichdoesnotrepresentastatisticallysignificantdifferencebetweenthetwoPCRtests.Of24TPPA-negativespecimens,5werepositivebybothDN-PCRassayandSN-PCRassay.Conclusion:TheSN-polAPCRmethodisextremelysensitive,specificandeasytoperformfordetectinglownumbersofT.palliduminclinicalbloodspecimensasacomplementarytoserologyforsyphilisdiagnosis.

简介：目的：建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法：将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞，提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物，在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品，建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论：建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性，该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

简介：摘要目的利用荧光定量PCR检测技术,建立由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的快速检测方法.方法以金黄色葡萄球菌的特异性DNA核酸片段作为靶序列,采用聚合酶链反应(PCR)结合Taqman技术,以哈尔滨市２０１３~２０１４年度食源性致病菌主动监测分离鉴定的菌株作为阳性菌,对其进行荧光检测.结果本研究建立的反应体系对１８株金黄色葡萄球菌呈现出良好的扩增曲线,在５株相关细菌的检测中,除金黄色葡萄球菌结果为阳性外,其余菌株均为阴性.结论该方法特异性强、灵敏度高,操作简便快速,适应于由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及食源性疾病的快速检测,具有较大的推广及应用价值.

简介：无

简介：目的建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌的快速检测方法--PCR法.方法根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列,设计并合成一对特异性的引物,利用PCR技术扩增nuc基因片段.对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增.结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现668bp的特异性DNA扩增片段,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性.将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释,测定此PCR体系的敏感性,结果显示,该PCR体系能检出3pg金黄色葡萄球菌DNA,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需4h.结论本研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测,适合应用于实验大小鼠的监测.

简介：摘要目的评价实时荧光定量PCR检测HPV-DNA在宫颈癌筛查中应用价值。方法2015年1月～2015年12月，对我中心经病理组织学诊断宫颈疾病女性500例开展实时荧光定量PCR检测HPV-DNA水平。结果y（Ct）=-3.3236lgx＋34.713，R2=0.9986，批内、批间、日间重复性检测CV均在合格范围内；不同病理类型HR-HPV阳性率差异具有统计学意义（=56.416，P＜0.05）；不同类型HR-HPV阳性者拷贝数分布差异无统计学意义（μ=11.495，P=0.063＞0.05）。结论实时荧光定量PCR检测HPV-DNA可作为宫颈癌筛查方法，筛查早期CIN病变。