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  • 简介:SMAD4蛋白在嗜甲醇酵母中表达后,纯化鉴定。将纯化产生与两株胰腺癌细胞株共同孵育,用DNA序列梯图谱和TdT末端标记两种方法考察了此蛋白对体外培育胰腺癌细胞生长作用。结果显示SMAD4对胰腺癌细胞株SW1990有明显促调亡作用,而对胰腺癌细胞株CapanⅡ未见这种作用。

  • 标签: SMAD4 胰腺癌 调亡
  • 简介:在30L搅拌式反应器中用多孔微载体培养分泌尿激酶原DNA重组中国仓鼠卵巢细胞(rCHO),研究了血清浓度及溶氧对细胞生长和表达影响.结果表明,在2×105/ml低密度接种条件下,使用低(无)血清培养基会延长细胞生长延滞期并降低比生长速率,而细胞密度大于106/ml时,血清浓度对细胞生长和产物表达影响没有显著差别.溶氧(DO)维持在20%~45%时,对细胞表达产物和葡萄糖代谢无明显影响,但溶氧降至7%~9%时,细胞表达水平明显降低,葡萄糖代谢转化为乳酸比例上升.

  • 标签: 细胞培养 多孔微载体 尿激酶素 无血清培养基 溶氧 血清浓度
  • 简介:探讨一种菊科植物抽提物对小鼠血液生化成分影响.利用半自动生化分析仪测定血液生化成分,结果表明该抽提物可降低血清白蛋白和总蛋白含量;降低乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性和丙氨酸氨基转移酶活性;对血清中尿素、尿酸、肌酐都有明显降低作用;可减少血清二价金属离子Ca2+、Mg2+含量,增加Cl-含量;对碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、血清无机磷影响不明显.

  • 标签: 菊科植物 抽提物 小鼠 血液 生化成分 二价金属离子
  • 简介:生命中无时无刻不存在生物大分子之间相互作用,其中包括核酸之间、核酸与蛋白质之间以及蛋白质之间相互作用。以往研究蛋白质之间相互作用通常采用生化技术,如偶联、免疫共沉淀等方法。1989年,Fields和Song创立了一种崭新遗传学方法用于研究蛋白质之间相互作用,即酵母双杂交系统(Yeast

  • 标签: 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用 报告基因 转录激活 杂交蛋白 细胞周期
  • 简介:通过PCR方法扩增并分析了恶性疟原虫多抗原表位融合基因awte序列,再分别克隆于温度诱导型融合表达载体pEX31b和IPTG诱导型融合型表达载体pGEMEX1中,并进行了诱导表达,并对表达产物MS2-AWTE和T7Ф10-AWTE融合蛋白进行间接ELISA检测,证实MS2-AWTE和T7Ф10-AWTE都具有免疫学活性.另外,同样将a1wte基因分别克隆于温度诱导型和IPTG诱导型非融合表达载体pBV200、pKEN中并进行诱导表达,但在SDS-PAGE中并未检测到可见AWTE表达带.

  • 标签: PCR 基因克隆 表达 融合蛋白 ELISA 恶性疟原虫
  • 简介:采用PCR方法,根据文献报道的人成骨蛋白-1(OP-1)成熟肽基因序列,设计并合一对引物,从含人成骨蛋白基因质粒中扩增获得大小420bpDNA片段,连接到pGEM-T载体进行测序,证明获得人成骨蛋白成熟肽基因片段,继之以pPIC3.5k为表达载体构建重组表达质粒,并经PCR及酶切鉴定。

  • 标签: 人成骨蛋白成熟肽基因 毕赤酵母 序列分析 基因克隆
  • 简介:从药用植物中华芦荟组织中分离出一株抗菌内生细菌A11#,该菌产生广谱抗菌活性物质,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌和植物病原真菌均有较强抑制作用;通过形态学观察及生理生化特征测定,初步鉴定归属于芽孢杆菌属(Bacillus).该菌在初始pH值为5.O~10.0PDA培养基上生长旺盛,生长最适pH为5~7,培养液初始pH为6~10时发酵产生大量粘性物质;生长温度范围在10~45℃,最适温度28~37℃;在初始pH5.0和30.5℃条件下发酵,其发酵液抑菌作用最强;该菌所产抗菌物质能耐121℃处理30min而不影响其活性.在阿须贝无氮培养基上生长良好,在不加葡萄糖、蔗糖或淀粉LB和牛肉膏蛋白胨培养基上不生长;同时还产生对高岭土有絮凝活性物质.

  • 标签: 芦荟 内生细菌 分离 鉴定 生物学性质 培养基
  • 简介:利用DNA重组和细胞体内同源重组技术,分别获得了P7.5启动子和P11启动子单独带动乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因重组痘苗病毒和同一个重组痘苗病毒中含有P7.5和P11启动子分别带动一个HBsAg基因(正反两个插入方向)四种重组痘苗病毒,比较了它们对HBsAg表达影响。含P7.5启动子比含P11启动子重组痘苗病毒表达HBsAg水平更高些;在同一个重组痘苗病毒中P7.5和P11两个启动子分别带动HBsAg基因时,两个启动子同向转录表达HBsAg水平较低,而两个启动子又向转录时表达HBsAg水平较高,但均没有单一P7.5启动子带动HBsAg基因表达水平高。

  • 标签: 乙型肝炎病毒表面抗原 重组痘苗病毒 启动子
  • 简介:选择适合于HAb18F(ab′)2片段抗体冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品质量关键之一,对不同种类和不同浓度保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab′)2片段抗体冻干样品剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(<10s)、纯度(>95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合适用于HAb18F(ab′)2片段抗体最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.

  • 标签: 抗人肝癌单抗 片段抗体 HAb18f(ab)2 冻干工艺
  • 简介:在哺乳动物体细胞核移植中,供体细胞是影响其效率主要因素之一.供体细胞类型、细胞周期、细胞培养代数、冷藏与冷冻处理,以及供体动物性别、年龄等都可能影响核移植胚胎发育.根据现有资料,简要综述了在哺乳动物体细胞核移植中有关供体细胞研究进展.

  • 标签: 体细胞核移植 供体细胞 细胞类型 细胞周期
  • 简介:通过研究接种量、培养基、碳源、氮源及激素组合等生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长影响,建立了一种可快速生长薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养体系.结果表明,在添加0.05mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、30g/L蔗糖及0.5g/L水解酪蛋白MS培养液中,以50g/L接种量进行薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养,其生长速率可达24.14g/(L·d).

  • 标签: 薰衣草 胚性愈伤组织 悬浮培养 接种量 培养基 碳源
  • 简介:利用氨基酸密码子简并性及大肠杆菌中高表达真核基因时,转录起始区结构特点:①在起始密码子ATG后使用富含嘌呤密码子延长其mRNA同tRNA反密码子loop互补;②通过应用富含A/U密码子,避免mR-NA形成稳定二级结构;③减少潜在第二个Shine-Dalgarno序列。通过聚合酶链式反

  • 标签: 人甲状旁腺激素 肠杆菌 反密码子 医学研究所 南京军区 简并性
  • 简介:黄酮类化合物是一类低分子天然植物成分,这类化合物具有共同母核C6-C3-C6.黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、改善心血管功能等生物活性.国内、外大量研究表明,促进肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤机理之一.随着分子生物学技术发展,黄酮类化合物诱导肿瘤细胞凋亡分子机理也逐渐被阐明.本文简要综述国内外黄酮类化合物诱导癌细胞凋亡分子机理研究进展.

  • 标签: 癌细胞 细胞凋亡 黄酮类化合物
  • 简介:SDS-PAGE将SDS所带大量阴性电荷和聚丙烯酰胺凝胶高分辨率相结合,使蛋白自身电荷被大量阴性电荷所淹没,这样蛋白在电泳时迁移率仅与其分子大小有关。蛋白电泳时凝胶孔径大小和电泳介质对不同大小分子分辨率有不同影响,特别对相对分子量小于10000低分子量蛋白,常规电泳方法完全不能分辨,国外报道尿素、缓冲液浓度及聚丙烯酰胺中单体和双体比例对蛋白分辨率有较大影响,但将几种不同因素进行综合研究,未见报道。

  • 标签: 聚丙烯酰胺 凝胶电泳 分离胶 小分子物质 低分子量 蛋白分子
  • 简介:利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体同源和异源相互作用双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递功能区在中间连接区,SMAD3功能区在C末端。

  • 标签: SMAD3 SMAD4 酵母双杂交
  • 简介:以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR.对重组质粒进行酶切分析和序列测定.将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定.经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR.RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因表达.以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗功能蛋白提供了实验材料.

  • 标签: 丙型肝炎病毒 干扰素敏感决定区 HELA细胞系 增强型绿色荧光蛋白 丙型肝炎 真核表达载体
  • 简介:收集产重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)CHO工程细胞灌流培养上清,经过Streamline扩张柱床和赖氨酸-Sepharose4B柱亲和吸附色谱纯化后,最后产品比性达到600000IU/mg蛋白,rt-PA总活性回收率在98%左右,经还原SDS-PAGE分析主要为高相对分了质量rt-PA蛋白,HPLC分析达到色谱纯,N端15个氨基酸序列和pI与文献报道一致。蛋白质印迹实验证实具有t-P

  • 标签: 组织型纤溶酶原激活剂 纯化 性质
  • 简介:单核苷酸多态性(SNP)是继限制性片段长度多态性、微卫星标记之后第三代分子标记,通常呈双等位基因多态.本文从SNP特点、SNP发现与检测、SNP数据库、SNP频率及其与表型关系等方面简述了SNP在鸡遗传变异中研究及应用进展.

  • 标签: 单核苷酸多态性 遗传变异