简介:以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因.设计引物进行PCR扩增。扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10S,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min。用试剂盒回收PCR产物,以PGEM—TEasyVector为载体。产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E’coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆。提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109Ecoli细胞中的表达。结果表明:PCR扩增出1,67kh的基因片段。并成功克隆在EcoliJM109细胞中:挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoRⅠ酶切检测到3.0kh的载体和1,67kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67kb基因片段。证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67kh的基因片段。并在EcoliJM109细胞中表达。
简介:用超声波辅助纤维素酶法提取芦荟多糖,并测定其抗肿瘤活性。采用响应面法优化超声波辅助纤维素酶提取芦荟多糖的条件。通过测定芦荟多糖对人体肝癌细胞HepG2生长的影响,研究其抗肿瘤活性。结果显示,当料液比1/30(g/mL)、超声波功率600W、pH5.0时,最佳提取条件为加酶量0.2%、提取温度49℃、提取时间16min。此条件下芦荟多糖的提取率为5.99%,比超声波辅助法和纤维素酶法分别提高了9.91%和37.38%。芦荟多糖具有较好的抗肿瘤活性,随着浓度的增加,其对HepG2细胞的生长抑制率逐渐增强。当其质量浓度为160mg/mL时.使70%的HepG2细胞处于裂解状态。超声波辅助纤维素酶法是一种新的、有效的芦荟多糖提取方法。
简介:为了探讨超声波处理对低嘌呤脱脂豆腐粉的影响,利用扫描电镜技术、红外光谱技术及动物实验分别研究超声波处理对低嘌呤脱脂豆腐粉微观结构、蛋白质二级结构及营养功能的影响。研究结果表明:超声波处理的豆腐粉颗粒大部分呈球形体,且表面布满微孔;未经超声波处理的脱脂豆浆、低嘌呤脱脂豆腐粉和经超声波处理的脱脂豆浆、低嘌呤脱脂豆腐中蛋白质的β-折叠和无规则卷曲的总含量分别是59.64%,52.49%,65.46%,56.21%;低嘌呤脱脂豆腐粉的雄性和雌性小鼠蛋白质消化率分别是79.33%,70.03%。超声波处理改变了低嘌呤脱脂豆腐粉的微观结构,蛋白质的二级结构,改善了蛋白质的营养功能。