简介：摘要腺相关病毒载体（AAV）是目前最重要的病毒工具，已在基因治疗领域得到广泛应用；因其具有体积小、无包膜、无致病性等特点，故而是治疗遗传性视网膜疾病的主要手段之一。目前针对原癌基因酪氨酸激酶基因治疗视网膜色素变性、ND4基因治疗Leber遗传性视神经病变以及Rab伴随蛋白-1基因治疗无脉络膜症的临床试验均发现约一半的患者视力改善。针对AAV基因治疗Leber先天性黑矇、X连锁视网膜劈裂症、全色盲以及老年性黄斑变性的临床试验也正在开展。而关于Stargardt病、Usher综合征、真性小眼球的AAV基因治疗尚在动物实验或理论阶段。目前AAV基因治疗主要用于隐性遗传性视网膜疾病，对于显性遗传性视网膜疾病需采用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9技术等来干预。对于遗传性视网膜疾病的治疗，这将是一个重要且复杂的系统性工程，需投入更多人力物力共同参与和研究，期待在不久的将来能有大的突破。

简介：摘要目的探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MDSCs)应用于基因治疗的可行性。方法培养并纯化MDSCs细胞株，采用具有高效转染能力的腺病毒载系统将NGF基因导入MDSCs中，采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR (qPCR)检测目的基因NGF的表达情况。结果腺病毒感染MDSCs的感染复数为1000时最佳，感染率可达80%。EGFP自72 h时荧光表达开始逐渐增强。转染的MDSCs中NGF基因高表达。结论通过携带NGF的腺病毒载体可以成功转染MDSCs,从而上调目的基因在肌源干细胞中的表达；且通过腺病毒介导转染的目的基因NGF不会导致肌源干细胞的过度增殖和凋亡。

简介：EB病毒(EBV)与多种人类肿瘤,如Burkitt淋巴瘤以及鼻咽癌、胃癌等上皮性肿瘤相关。病毒编码的潜伏膜蛋白2A(LMP2A)存在于部分EBV相关胃癌(EBVaGC)中,与肿瘤发生、发展密切相关。目的:应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术抑制LMP2A基因表达,探讨下调LMP2A对EBVaGC细胞体外生长的影响。方法:构建慢病毒载体pGCSIL-LMP2A-shRNA-LV和阴性对照载体并转染EBVaGC细胞株GT38,以real-timePCR和蛋白质印迹法检测慢病毒载体的抑制效率,CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞术检测GT38细胞的细胞生长、细胞周期和细胞凋亡。结果:GT38细胞转染LMP2A-shRNA-LV后,LMP2AmRNA和蛋白表达分别下调65.4%和50.8%,进而导致细胞体外增殖受抑,克隆形成能力降低,G0/G1期细胞比例增加,细胞凋亡率增高,与转染阴性对照慢病毒载体和未予转染慢病毒的GT38细胞相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:慢病毒介导的RNAi技术能高效抑制LMP2A基因表达,进而抑制EBVaGC细胞的体外生长,诱导G0/G1期阻滞,促进细胞凋亡。LMP2A可作为EBVaGC基因治疗的潜在靶点。

简介：摘要目的观察对接受抗病毒治疗的慢乙肝患者实施护理干预的临床效果。方法选取笔者所在医院200例慢乙肝患者进行研究，患者资料选择起止时间为2018年5月至2018年10月。入组患者均接受抗病毒治疗，并对其实施护理干预，观察护理前后患者的治疗依从性变化情况。结果经调查统计与比较，护理干预的实施显著提高了患者的治疗依从性，患者总依从率从护理前的81.00%显著提高为94.50%，（P＜0.05）。结论慢乙肝患者抗病毒治疗中，通过对患者实施护理干预可显著改善患者的治疗依从性。

简介：目的：构建汉滩病毒包膜糖蛋白基因的真核表达载体，并加入可增强免疫应答效应的细胞因子CD40L基因，检测其可否在真核细胞中表达。方法与结果：参照GenBank中汉滩病毒M基因和小鼠CD40L的全基因序列设计引物，通过聚合酶链反应（PCR）获得M和CD40L基因片段，将其与pCI—neo载体相连，测序证实该载体构建成功后，将此真核表达载体以脂质体转染法转染至哺乳动物细胞CHO—K1中，利用间接免疫荧光法（IFA）检测发现M基因和CD40L基因可以同时表达于CHO-K1细胞中。结论：构建了带有CD40L基因的汉滩病毒包膜糖蛋白重组质粒并获得表达，为深入研究汉滩病毒感染后包膜糖蛋白引起的特异性免疫应答规律奠定了实验基础。

简介：脑缺血的基因治疗是颇具前景的治疗手段，以病毒为载体的基因治疗的有效性和安全性关系到最终治疗的成败。重组腺相关病毒（recombinantadeno-associatedvirus，rAAV）载体作为目前安全性最好的病毒载体系统，在动物中枢神经系统（centralnervoussysterm，CNS）中已进行了有效转导。随着国内外研究的日趋深入，rAAV在脑缺血基因治疗中的应用也越来越倍受瞩目。现就其进展予以综述。

简介：目的构建人雌激素受体相关受体α(hERRα)逆转录病毒载体.方法用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pSG-hERRα质粒和pLXSN空白质粒,采用凝胶DNA回收方法回收纯化hERRα片段,用T4连接酶进行连接反应,构建成PLXSN-neo-hERRα重组体.结果经pCR、酶切鉴定、测序等对重组体进行鉴定,证实构建的重组体方向、序列正确.结论已成功构建hERRα逆转录病毒载体,为研究hERRα的功能奠定了基础.

简介：摘要昆虫杆状病毒表达载体系统是基于昆虫杆状病毒及其宿主细胞建立的真核表达体系，具有安全性高、重组蛋白表达水平高、能同时表达多个基因，可对重组蛋白进行正确折叠和翻译后修饰等优势，主要应用于预防性及治疗性疫苗和基因治疗药物的研发及生产。本文对该载体系统的关键技术及应用进展作一综述。

简介：目的探讨不同血清型对成熟肌纤维的转导效率.方法我们用不同的血清型AAV(rAAV-1,rAAV-2,rAAV-3和rAAV-5)表达LacZ和GDNF基因研究在小鼠骨骼肌转导效率,转基因表达用组化方法或ELISA来评定.结果在3周龄的小鼠中,LacZ组化染色显示rAAV5在慢和快的肌纤维中都有效的转导,而rAAV2和rAAV3优先在慢纤维中转导.在8周龄的小鼠(成年鼠)中,rAAV3和rAAV5在慢纤维和快纤维中都有效的转导.用rAAV3-LacZ或rAAV5-LacZ优先转导的慢纤维与rAAV2相比没有显著性差异.用8周龄的小鼠肌肉注射不同血清型的rAAV-GDNF后,结果显示rAAVl-GDNF表达最高;rAAV2、rAAV3和rAAV5在骨骼肌的表达也有效.结论在肌肉基因转导中,rAAV3和rAAV5介导的载体都是有效的,能克服rAAV2所受到的限制.

简介：摘要目的建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus, RCL) VSV-G qPCR检测方法，并进行方法学性能验证及初步应用。方法以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列，建立荧光定量PCR检测方法，并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、准确度、线性范围、检测限、定量限及耐用性进行验证。利用所建立的方法进行CAR-T细胞、慢病毒载体生产终末细胞及慢病毒载体收获液样品的初步应用性研究。结果建立的VSV-G荧光定量PCR法，专属性较好，对293T细胞、PBMC细胞及C8166细胞均无特异性扩增，线性范围为1×102拷贝/test～1×109拷贝/test，R2能够达到0.998以上，扩增效率在93%～98%之间，精密度RSD<12%，准确度回收率为85%～106%，最低检出限和最低定量限分别为5拷贝/test和40拷贝/test。另外，该方法的耐用性较好。各项验证结果均表明该方法能够满足检测的要求。利用该方法对54批样品(包括CAR-T细胞、慢病毒载体及载体生产终末细胞)进行RCL C8166细胞培养法的终点检测，结果显示54批样品均为阴性。结论成功建立了VSV-G实时荧光定量PCR法，各项验证参数均可满足检测要求，该方法的应用将进一步提高慢病毒载体相关产品的安全性。

简介：摘要本文通过与苦参素胶囊的对照,确定虎驹乙肝胶囊的临床疗效。方法随机分组,虎驹乙肝胶囊为治疗组,苦参素胶囊为对照组,主要观察二组抑制病毒、e抗原及临床症状的缓解等作用，疗程为6个月。结果治疗组总有效率为84.9%，对照组总有效率为56.6%，两者有显著差异(P<0.05)，值得关注的是，治疗组在治疗过程中并未发生1例不良反应。结论临床治疗表明虎驹乙肝胶囊治疗低病毒慢性乙肝患者具有很好效果，HBV-DNA转阴率较高、HBeAg及临床症状明显改善,安全、无毒副作用，值得临床广泛应用。

简介：摘要目的观察应用大黄煎剂（大黄30g，乌梅30g）治疗病毒性乙肝慢加急性肝衰竭的临床疗效。方法选择62例病毒性乙肝慢加急性肝衰竭患者，按肝衰竭诊疗规范1随机分为单纯西药治疗的对照组及使用大黄乌梅合剂结肠透析的实验组。统计分析治疗的不同时间（基线、2周）肝脏功能、凝血功能相关检测指标的差异性及并发症发生差异性。结果中药灌肠配合治疗对改善临床症状及肝脏功能的恢复效果优于单纯西药治疗（P＜0.05）。

简介：慢速快门摄影，就是通过长时间的曝光，记录平时我们眼睛观察不到的影像。曝光时间可能是几秒钟，甚至是几小时。在慢门之下，流水像丝绸一般柔软，嘈杂的行人奇迹般地模糊消失了，云彩的移动仿佛在空中漫步，明亮的星星留下神奇的圆圆星轨，用一支光笔可以在夜空里写字……

简介：目的构建Wilson病基因ATP7B的重组腺病毒载体.方法分别以BamHⅠ+SalⅠ双酶切pcDNA3.0/ATP7B和pDC315,将ATP7BcDNA目的基因片段和线性化的pDC315连接,定向克隆构建pDC315/ATP7B,以PCR和酶切的方法鉴定.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞构建Ad-ATP7B,PCR进行鉴定.结果经PCR和酶切鉴定证实pDC315/ATP7B构建成功.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad-ATP7B构建已完成.结论本实验成功构建了ATP7B外源目的基因序列完全正确的重组腺病毒载体Ad-ATP7B,为下一步采用ATP7B基因重组腺病毒载体对Wilson病进行基因治疗打下了基础.

简介：摘要目的研究两种支原体快速检测方法在病毒载体制品中的适用性和影响因素。方法采用基于PCR技术的两种支原体核酸扩增检测方法，对分别表达Ⅱ型单纯疱疹病毒抗原gD和ICP27的重组仙台病毒载体疫苗(SeV-dF/HSV-2 gD、SeV-dF/HSV-2 ICP27)收获液及纯化液进行支原体检测，探究其特异性和最低检测限，并对多个批次的收获液及纯化液进行测定。结果普通PCR法在对本制品病毒收获液检测时无明显PCR抑制现象，但对病毒纯化液检测时发生明显的PCR抑制，并且未能检出100 CFU/ml限度的口腔支原体和肺炎支原体。实时荧光定量PCR法在对本制品病毒收获液和纯化液的支原体检测中均无PCR抑制发生，且该方法对口腔支原体、肺炎支原体等多种支原体的检测灵敏度可达到10 CFU/ml，其中对口腔和肺炎支原体核酸拷贝数检测灵敏度可达到每毫升50基因组拷贝。结论实时荧光定量PCR法具有更高特异性和灵敏性，适用于作为质量内控方法快速检测病毒载体制品，及时发现支原体的污染，保证制品质量。

简介：目的构建GATA-3特异性短发夹状RNA（shRNA）逆转录病毒表达载体。方法设计、合成两对GATA-3编码基因的反向重复序列，中间插入9个碱基的短发夹，经退火形成互补双链，再克隆至逆转录病毒载体RNAi-RelypSIREN-RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶BamHI,EcoRI切开，电泳可显示相应条带，经测序其序列与设计的一致。结论成功构建GATA-3特异性shRNA逆转录病毒载体RetmQ／GATA-3／shRNA，为进一步进行肿瘤细胞GATA-3基因沉默的研究奠定了基础。

简介：目的为利用热休克蛋白70(heat-shockprotein,HSP70)防治严重烧伤后缺血缺氧性损伤的基因治疗提供可行的基因转染途径.方法利用微胶囊技术包裹含HSP70基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,检测其在人工胃、肠液中的融出率,并进行大鼠的口服转染,检测目的基因表达.结果用微胶囊技术可成功包裹腺病毒载体.制备的微胶囊在人工胃液中仅有少量崩解,而在肠液中则半数崩解.RT-PCR检测大鼠口服转染微胶囊后目的基因表达确切.结论利用微胶囊技术可成功包裹含HSP70基因的腺病毒载体,并保护其免受胃液损伤,在肠道中被释放吸收.

简介：摘要目的构建在人肝癌HepG2细胞内可稳定表达血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的逆转录病毒载体。方法采用PCR技术扩增VEGFR3片段，克隆至pBABE-puro质粒，构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3，经PCR、酶切、测序等验证后，体外与PIK包装质粒共同转染293FT细胞，获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒，感染人肝癌HepG2细胞，获得转入VEGFR3的HepG2细胞，通过QPCR和Westernblot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果①获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3；②QPCR和Westernblot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的稳定表达。结论成功构建了携带VEGFR3基因的人肝癌细胞重组逆转录病毒载体。

简介：摘要目的构建NR4A2真核细胞瞬时表达载体。方法设计带有酶切位点的NR4A2引物，采用PCR法从NR4A2基因载体中扩增目的基因，经限制性酶切后与目的载体连接，转化感受态细胞。挑取阳性克隆，分别采用PCR法和测序法进行验证。结果成功构建具有NR4A2表达序列的慢病毒质粒。

简介：戏曲进入电影、电视载体后,戏曲的写意、虚拟、形式美特征与舞台载体有关,戏曲是艺术的