简介:罗格列酮(Rosiglitazone),是一种人工合成的噻唑烷二酮类(Thiazoliainediones,TZD)降糖药,通过特异性地激活过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ),增加细胞葡萄糖转运子Glut-4的表达,使细胞对胰岛素的敏感性增强,加大对葡萄糖的摄列“。近几年,TZD药物被证实有抗肿瘤细胞生长的作用,曲格列酮(Troglitazone)、环格列酮(Ciglitazone))和匹格列酮(Pioglitazone)等TZD药物已经被作为抗肿瘤试剂广泛用于肠癌、胸部肿瘤、胰腺癌和前列腺癌的研究,并发现它们可以通过激活PPARγ,抑制某些肿瘤细胞的增殖。
简介:摘要目的探讨携带人抑瘤素M(OSM)重组腺病毒表达载体对A549人肺癌细胞生长的影响和抗肿瘤机制。方法用最佳感染复数的病毒感染A549细胞,用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测OSM在人肺癌细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A549细胞的形态学改变;噻唑蓝(MTT)法和FCM检测Ad-OSM对A549细胞的生长抑制和细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR法检测OSM基因的表达对A549细胞中的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、p53基因表达的影响。多组间均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用q检验。结果Ad-OSM组与Ad组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组比较,Ad-OSM对A549人肺癌细胞有明显生长抑制作用(-0.250±0.021,t=12.012,P<0.05;-0.220±0.016,t=13.470,P<0.05),Ad组和PBS对照组差异无统计学意义(2.333±2.097,t =1.113,P>0.05)。用流式细胞仪检测细胞凋亡,Ad-OSM能明显诱导A549细胞凋亡,其中凋亡率可达20.6%,与Ad(2.5%)组和PBS组比较差异有统计学意义(17.800±0.627,t=28.380,P<0.05;17.530±0.667,t=26.335,P<0.05)。RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A549细胞成功转录和表达;OSM基因表达对A549细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导人肺癌细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中bax、p53和下调bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论OSM基因可明显抑制A549人肺癌细胞生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变bax、bcl-2、p53基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。
简介:
简介:目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用.方法:采用RT-PCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量.结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响.CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达.
简介:目的探索黄腐酚对人非小细胞肺癌细胞株A549与H1650凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测黄腐酚对A549与H1650细胞增殖的影响;流式细胞术分析黄腐酚对两种细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测两种细胞被不同浓度黄腐酚干预后细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-xl、pro-caspase-3的表达。结果黄腐酚能有效抑制A549与H1650细胞的增殖,其抑制强度与浓度呈正相关,对H1650细胞有更好的抑制作用;两种细胞的凋亡率随黄腐酚浓度的增大而上升,5μmol·L-1诱发的凋亡率与同浓度顺铂无差异(P〉0.05);两种细胞中凋亡相关蛋白的表达与黄腐酚浓度相关。结论黄腐酚可能通过调控Bcl-xl、Bax、Caspase-3及其相关基因使非小细胞肺癌细胞发生凋亡。
简介:摘要目的探讨人表皮生长因子受体4(HER4)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达意义及其对NSCLC细胞生物学行为的影响。方法选取2015年1月至2017年1月长治市人民医院呼吸与危重症医学科收治的经手术切除并经病理学证实的84例NSCLC患者的肿瘤组织及癌旁正常组织,男55例,女29例,年龄(54.58±9.67)岁,年龄范围为33~75岁。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺癌组织和癌旁正常肺组织中HER4的表达,分析HER4与患者临床病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析HER4与NSCLC预后的关系。HER4-siRNA转染H522细胞系沉默HER4的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、侵袭小室(Transwell)法,流式细胞术检测细胞增殖、迁移和侵袭及凋亡情况。蛋白免疫印迹(Western blot)检测HER4和间质上皮转化(EMT)相关蛋白的表达。结果NSCLC组织中HER4 mRNA的表达水平(3.80±0.64)显著高于癌旁正常肺组织(2.07±0.57),NSCLC细胞系H522中HER4 mRNA的表达水平(1.45±0.12)也显著高于人正常肺上皮细胞系BEAS-2B(0.78±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。将NSCLC患者按照HER4表达水平的中位值分为高表达组和低表达组,两组肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步采用Kaplan-Maier法分析两组生存函数,结果显示低表达组总体生存期为(40.14±2.58)个月,优于高表达组的(30.45±2.58)个月,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达组5年生存率[38.1%(16/42)]高于高表达组[23.8%(10/42)],差异有统计学意义(P<0.05)。HER4-siRNA及阴性载体转染细胞后,RT-qPCR检测发现,HER4-siRNA组中HER4 mRNA的相对水平(0.52±0.04)低于空白组(1.00±0.01)和阴性组(0.96±0.06),Western blot检测显示,HER4-siRNA组中HER4蛋白表达水平(0.64±0.04)低于空白组(1.16±0.09)和阴性组(1.12±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。MTT试验结果显示,转染后,HER4-siRNA组H522细胞的增殖活性低于阴性组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell法检测结果显示,与空白组和阴性组相比,HER4-siRNA组中迁移和侵袭的细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,HER4-siRNA组上皮标志蛋白E-cadherin的表达水平显著高于空白组和阴性组,N-cadherin和Vimentin的表达水平则显著低于空白组和阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果显示,HER4-siRNA组中细胞凋亡率为(12.48±1.02)%,高于空白组(2.25±0.28)%和阴性组(2.69±0.35)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HER4可能是潜在的NSCLC预后和治疗的新的靶点。但关于HER4在NSCLC细胞的增殖、转移和凋亡中具体的作用机制,尚有待深入研究。
简介:目的:观察北沙参对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响并探究其机理。方法:体外培养人正常支气管细胞系16HBE和肺癌细胞系H460,制备北沙参提取液作用于16HBE和H460细胞。CCK-8法检测北沙参提取液对16HBE细胞增殖能力的影响,Transwell法和Matrigel法分别检测北沙参提取液对H460细胞迁移能力和侵袭能力的影响,荧光定量PCR检测北沙参提取液对H460细胞中TIMP2表达水平的影响,ELISA检测北沙参提取液对H460细胞分泌TIMP2蛋白水平的影响。结果:5mg/mL到15mg/mL的北沙参提取液对16HBE细胞不产生毒性作用,5mg/mL到15mg/mL的北沙参提取液显著抑制H460细胞的增殖能力和侵袭能力,上调H460细胞对TIMP2的表达与分泌。结论:北沙参可上调肺癌细胞对TIMP2的表达与分泌,从而抑制其迁移和侵袭活动,在肿瘤临床治疗中具有良好应用价值。
简介:摘要目的通过构建间充质干细胞(MSC)与乳腺癌细胞间相互作用的共培养模型,探讨MSC对乳腺癌细胞生长的影响。方法用含荧光基因第三代自身失活慢病毒载体感染人类脐带分离提取的MSC和乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,以单独培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7分别设立对照,2种乳腺癌细胞分别与MSC共培养,检测乳腺癌细胞在MSC作用下增生能力的改变,流式细胞术检测共培养后细胞表面标记物表达。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Dunnet-t检验。结果MSC在与乳腺癌细胞共培养过程中促进肿瘤细胞生长,第3天共培养组乳腺癌MDA-MB-231细胞数高于单独MDA-MB-231培养组[(5.50±0.71)×103个比(1.63±0.41)×103个],培养至第7天,两组间MDA-MB-231细胞数差异进一步增大[(81.25±7.40)×103个比(26.25±4.15)× 103个],差异具有统计学意义(P均< 0.001);共培养后MSC促进乳腺癌细胞表达干细胞特有标记物CD90,MCF-7从共培养第2天CD90表达率(1.38±0.30)﹪升高至第9天(92.45±2.04)﹪。在共培养中MSC围绕肿瘤细胞集落方式生长,在形态上变长,并发现一种新型混合细胞(hybrid融合细胞)同时表达绿色和红色荧光,且对化疗药物更敏感。结论MSC促进乳腺癌细胞的生长,伴随MSC形态学改变和hybrid融合细胞出现,乳腺癌细胞获得MSC特有CD90表达。
简介:摘要目的制备肺癌细胞与树突状细胞融合疫苗,观察其对荷瘤小鼠移植瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法用聚乙二醇法(polyethyleneglycol,PEG)将取自骨髓来源的DC细胞和射线灭活的Lewis肺癌细胞进行融合反应,免疫磁珠法筛选阳性融合细胞。进行融合疫苗体内致瘤性实验,建立肺癌荷瘤小鼠模型,进行荷瘤小鼠抗肿瘤免疫治疗实验。免疫组化SP法测定移植瘤细胞PCNA的表达,流式细胞仪PI染色法测定细胞周期分布,AV-PI双染检测细胞凋亡率。结果融合疫苗致小鼠移植瘤细胞PCNA表达增高(P<0.05),有S期阻滞作用(P<0.05),并有诱导小鼠移植瘤细胞凋亡的作用。结论肺癌细胞与树突状细胞融合疫苗体对荷瘤小鼠移植瘤有一定的抑瘤效应。
简介:摘要目的观察槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响,为寻找治疗卵巢癌的新药物提供实验依据。方法运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比卵巢癌细胞在槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响。结果加入50μmol/L槲皮素后,卵巢癌细胞的生长受到明显的抑制,且呈时间依赖性。结论槲皮素能够抑制卵巢癌细胞的生长。
简介:摘要目的探究S100A6对肺癌细胞株Calu-6增殖、迁移、凋亡等的生物学行为影响。方法实验性研究。构建S100A6过表达慢病毒载体,和空载体同时转染至Calu-6肺癌细胞株。转染成功后(RT-PCR、Western-blot确认S100A6过表达),使用MTT、Transwell和流式细胞术实验技术分别检测Calu-6/S100A6实验组(Calu-6/S100A6)、Calu-6/空载体对照组(Calu-6/neo)、Calu-6空细胞对照组(Calu-6)的细胞增殖能力、细胞迁移和侵袭能力、细胞凋亡和周期,比较3组差异。将3组细胞注入裸鼠皮下(15只),每周测定小鼠成瘤体积。结果Calu-6肺癌细胞株转染S100A6后与Calu-6/neo、Calu-6组比较,Calu-6/S100A6组的增殖、迁移和侵袭能力均呈减弱趋势,细胞凋亡能力增强,细胞周期G1期延长,S期缩短(P<0.05)。实验5周后测定Calu-6/S100A6组肿瘤体积明显小于Calu-6/neo和Calu-6组(P值均<0.05)。结论S100A6抑制Calu-6肺癌细胞的生长,同时减弱Calu-6细胞株的成瘤能力。在细胞水平上,S100A6有抑癌功能。
简介:摘要目的探讨stomatin蛋白表达对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时定量PCR检测人支气管肺上皮细胞(HBE)和人肺癌细胞(H520、A549、95D、H460、Glc-82、973和H1299)stomatin mRNA表达水平。采用免疫组织化学染色检测4张肺癌组织芯片(含259份人肺癌及其癌旁组织)stomatin蛋白表达情况。敲降A549细胞stomatin基因表达后,噻唑蓝比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中总蛋白激酶B(AKT)和丝氨酸473位点磷酸化AKT的表达水平。采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测敲降stomatin蛋白表达对A549细胞成瘤能力的影响,采用组织芯片染色检测肿瘤组织中stomatin蛋白、核增殖抗原(Ki67)及血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达情况。结果H520、A549、95D、H460、Glc-82、973、H1299和HBE细胞stomatin mRNA表达水平M(极差)分别为2.71(2.66)、3.55(3.16)、0.26(0.22)、2.08(1.98)、0.87(0.35)、1.72(2.53)、1.10(1.82)和0.01(0.02),H520、A549和H460细胞高于HBE细胞(P值均<0.05),95D、Glc-82、973、H1299与HBE细胞差异无统计学意义(P值均>0.05)。stomatin蛋白在人肺癌组织的表达阳性率为34.7%(90/259),高于正常组织[1.9%(5/259)](P<0.05)。stomatin表达阳性肺癌组织中,低表达组(67例)肿瘤大小M(IQR)为[41.22(2 761.50)]cm,小于高表达组[23例,57.98(1 333.50)cm](P<0.05)。敲降stomatin基因表达的A549细胞第4天的吸光度值为0.55±0.07,低于对照细胞(0.79±0.16)(P=0.012);早期凋亡细胞占比[M(IQR)]为8.83(53.00),高于对照细胞[4.17(25.00)](P=0.026);丝氨酸473位点磷酸化AKT蛋白表达水平为0.68±0.16,低于对照细胞(1.16±0.39)(P<0.05),AKT总蛋白表达水平M(IQR)为4.25(17.00),与对照细胞[4.75(19.00)]差异无统计学意义(P>0.05);将敲降stomatin基因表达的A549细胞接种裸鼠腋下43 d后,肿瘤体积为(37.93±3.12)mm3,小于对照组[(454.04±32.39)mm3](P<0.001),肿瘤组织stomatin、Ki67和CD31表达水平分别为1.78±0.69、5.19±3.84和10.77±1.67,均低于对照组(分别为17.52±8.76、54.14±41.02和19.72±6.97)(P值均<0.05)。结论stomatin可通过调控AKT信号通路促进肺癌细胞增殖并抑制细胞早期凋亡。
简介:摘要目的观察成纤维细胞生长因子5 (FGF5)对人胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响。方法利用高表达FGF5的人胰腺癌PANC-1细胞系(北京大学第一医院外科大肠癌实验室提供),通过短发卡RNA(shRNA)稳定转染技术,构建FGF5低表达细胞系PANC-1-FGF5-,并以未转染质粒和转染对照粒的PANC-1细胞作为对照。通过皮下注射各组细胞建立裸鼠皮下种植瘤模型;通过脾脏内注射各组细胞建立肝转移模型,6周后切取皮下种植瘤体并称重,切取肝转移标本,计数肝转移灶数目。单因素方差分析比较各组裸鼠皮下种植瘤质量和肝转移灶个数的差异,Spearman等级相关性分析各组裸鼠皮下种植瘤质量和肝转移灶个数与各组细胞FGF5表达水平之间的相关性。结果蛋白质印迹法(Western blot)法证实FGF5低表达及对照质粒细胞构建成功;PANC-1-FGF5-组皮下种植瘤质量[(0.42±0.19) g]明显低于Pan-1组[(1.35±0.45) g]和PANC-1-Vector组[(1.32±0.35) g],差异有统计学意义(F=18.506,P<0.01);PANC-1-FGF5-组肝转移灶数目[(7.50±4.11)个]明显少于PANC-1组[(26.25±9.78)个]和PANC-1-Vector组[(26.25±9.78)个],差异有统计学意义(F=12.971,P<0.01);种植瘤质量和肝转移灶数与FGF5的表达量成正相关(r=0.818、0.806,P<0.01)。结论FGF5在裸鼠体内能够促进胰腺癌细胞的生长和肝转移能力。