简介:摘要目的介绍一种简便易行的菌种保存方法。方法临床分离非苛养菌246株分别用纸片法和半固体琼脂法进行保存,并比较1m、12m、36m两种方法的菌种存活率。结果菌株经保存1m、12m和36m后,纸片法的平均存活率分别为100%、95.1%和88.2%,半固体琼脂法分别为98.0%、76.0%和42.7%。纸片法保存铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌36m后,菌株存活达100%,临床常见菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肺炎克雷伯菌保存36m后,菌株存活率均>88%。化脓性链球菌的保存效果不佳。结论纸片法适用于非苛养菌的保存,方法简便易行,不需特殊设备,值得推广应用。
简介:摘要在微生物实验室中,菌种的保存是一项不可缺少的重要工作。在日常工作中从样品中分离出的有价值菌株需要进行分析研究,诊断用品的制备,菌苗的生产,药物的抑菌试验等都需要保存一套比较完整的菌种。现在常用的菌种保存方法有培养基保存法、真空冷冻干燥法等,不论哪种方法均以保存时间长、菌种不变异,操作简便为最佳标准。由于工作的需要于2000年8月-2005年2月,经多次试验摸索出以棉棒为载体的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等棉棒菌种保存法,同时与冷冻真空干燥法进行了比较,通过不同保存时间对细菌存活率菌落形态、染色、生物反应的观察比较,证实棉棒保存法与真空冷冻干燥法结果相同令人满意,该方法简便,且易于掌握,适用于基层疾病预防控制中心的菌种保存工作,有实际推广应用价值。
简介:玻璃化法作为简单方便的超低温保存方法之一,目前已成功地应用于植物茎尖、胚性细胞、原生质体、悬浮细胞等多种单一组织或细胞培养体系,但尚未见对幼苗这种复合组织的保存报道.本文研究了拟南芥(Arabidopsisthaliana,Landsbergerecta)幼苗的玻璃化保存程序并发现了一些有价值的研究现象.幼苗来自萌发的种子,种子消毒后播种在MS培养基上,4℃处理48h后转入25℃,10h光周期,萌发不同天数为实验材料.玻璃化程序包括:1)预处理———用2M甘油+04M蔗糖在20℃处理20min;2)脱水处理———用玻璃液PVS2(30%w/v蔗糖+15%w/v乙二醇+15%w/v二甲基亚砜+含04M蔗糖的MS)0℃处理50min;3)冷冻融化———玻璃液及幼苗一起投入液氮(LN2)保存,20℃室温自然融化;4)置换———用MS+12M蔗糖20℃处理30min,成活力检查;幼苗转到MS培养基培养5天,观察再生长状况.10天后转到培养土中,在生长箱中长到结实.结果表明:1)使用完整的程序,冻融后成活率最高,为765%;玻璃液处理是成功的关键,省去此处理成活率为0;冻融是造成玻璃化保存成活率降低的主要因子;2)由萌发0~2天的种子形成的幼苗便使用该技术,冻存融化后成活率分别为88%,838%和765%,结实正常;3)
简介:摘要目的比较DX保存液与甘油保存液对人角膜基质透镜的保存效果。方法收集2019年2—5月于山东第一医科大学附属青岛眼科医院在飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中取出的中高度近视患者30例60眼的完整角膜基质透镜标本,采用随机数表法将标本分为正常对照组、DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组,每组10个标本。采用锥虫蓝染色法检测不同保存方法角膜基质透镜细胞死亡数;光学显微镜下观察角膜基质透镜形态结构的完整性;透射电子显微镜下观察保存的角膜基质透镜超微结构。结果DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组细胞死亡数分别为(53.1±14.2)、(50.8±9.8)、(70.4±13.6)、(172.8±31.7)和(182.8±14.2)个/视野,总体比较差异有统计学意义(F=16.37,P<0.05);DX保存液保存1 d组与DX保存液保存1周组角膜基质透镜死亡细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);甘油保存1 d组细胞死亡数明显少于甘油保存1周组和甘油保存2周组,甘油保存1周组死亡细胞数明显多于DX保存液保存1周组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组角膜基质透镜胶原纤维排列规则;DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织胶原纤维排列较整齐,细胞较完整,甘油保存1 d组角膜基质组织水肿,细胞核裸露,随着甘油保存时间的延长,组织内胶原纤维逐渐变疏松。透射电子显微镜下可见DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织紧密,胶原纤维致密,细胞核完整;甘油保存1周组细胞分布稀疏,细胞结构不完整,甘油保存2周组细胞分布明显稀疏,细胞结构破坏。结论人角膜基质透镜用DX保存液保存1周可有效保存角膜基质组织和维持细胞结构。DX保存液对角膜基质透镜的保存效果优于甘油保存液。