简介：背景:小肠类器官是体外研究肠道上皮最好的工具,应用前景广泛,然而目前国内尚无相关研究报道。目的:在国内建立并优化小肠类器官培养技术,为小肠上皮细胞的基础研究提供平台。方法:常规培养L-WRN细胞,收集含不同浓度胎牛血清(FBS)的条件培养基。处死6~8周龄C57BL/6小鼠,自末端回肠起取约15cm肠段,纵向剖开,EDTA法分离、收集隐窝上皮,以基质胶包埋多聚化后加入不同浓度梯度的L-WRN条件培养基,显微镜下动态观察出芽情况,待出芽达一定长度后,重新包埋传代培养。结果:与含20%FBS的L-WRN条件培养基相比,含10%FBS的条件培养基更有利于小肠类器官的体外培养。条件培养基浓度为10%、15%、20%、25%、30%均可促使小肠类器官形成,15%条件培养基的出芽率最高。结论:本研究在国内首次成功建立了小肠类器官培养技术,并发现15%L-WRN条件培养基(含10%FBS)更有利于小肠类器官出芽。

简介：目的采用机械分离和酶消化相结合的方法分离小肠上皮类器官单位(IOUs),并进行形态及功能鉴定,建立稳定的分离培养技术。方法采用机械法剪碎小肠组织,中性蛋白酶和胶原酶联合消化分离组织碎片,差速沉淀法获得IOUs,通过相差显微镜观察IOUs形态,组织学、免疫组化证实其增殖特性及上皮刷状缘完整性,原代二维培养观察IOUs体外增殖及细胞群体组成。结果分离的IOUs大部分形态完整,PAS染色显示连续的刷状缘,并可见杯状细胞,PCNA染色阳性并呈梯度改变,IOUs体外培养可见构成小肠的各胚层细胞。结论采用机械分离和酶消化相结合的方法可以得到形态完整、增殖活跃的IOUs,有望为组织工程小肠构建提供种子细胞。

简介：目的建立一种研究肠上皮细胞的体外模型—小肠类器官培养体系,探索其相关病理检测技术方法,为肠道相关疾病的体外研究提供便利平台。方法将小鼠肠上皮隐窝分离并培养成小肠类器官,体外模拟肠上皮的生长发育过程。通过制作石蜡切片,探索应用免疫组化技术以及基于基质胶中类器官三维水平免疫荧光技术对相应的增殖与分化信号进行检测。结果探索并建立了小肠类器官体外培养体系,应用石蜡切片免疫组化技术与三维水平免疫荧光技术能够准确检测小肠上皮结构的生长发育状态。结论小肠类器官体外培养体系的建立与免疫检测技术的应用,将逐渐使其成为人们研究肠道相关疾病最为有利的技术手段。

简介：摘要目的探讨外源性小肠类器官(intestinal organoid，IO)肠道内灌注对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)新生小鼠肠道损伤的影响及相关机制，为探索NEC新型防治方法及临床转化提供依据。方法取9日龄健康C57BL/6新生小鼠末端回肠组织体外培养IO，培养7 d后鉴定IO并将其重悬于磷酸盐缓冲溶液用于干预实验。选用5日龄C57BL/6新生小鼠，按照随机数字法随机分成4组：正常对照组(control组，仅母鼠母乳喂养，无其他干预措施)、实验对照组(control+IO组，母鼠母乳喂养，于生后第6天进行类器官干预)、NEC组(于生后第5至9天之间，诱导新生鼠NEC发生)、实验干预组(NEC+IO组，诱导NEC同时于生后第6天进行类器官干预)，每组5只小鼠。生后第9天收集各组新生小鼠末端回肠组织，分析比较各组小鼠肠道损伤程度，肠道炎症反应，肠道干细胞活性、肠上皮细胞增殖能力变化并进一步比较各组Wnt/β-catenin通路活性。计量资料多组间比较采用ANOVA检验，单因素方差分析后进一步两两比较使用LSD检验；计数资料多组比较采用Kruskal-Wallis非参数检验；生存分析采用Log-rank(Mantel-cox)检验。结果与control组相比，NEC组小鼠累积存活率显著降低(NEC组比control组：100.00%比42.42%，P<0.001)，肠道组织病理评分[NEC组比control组：3(2.5~3)比0(0~0.5)，P<0.01]与IL-6 mRNA表达水平[NEC组比control组：(4.52±0.82)比(1.01±0.23)，P<0.001]均明显升高，而Lgr5 mRNA表达水平[NEC组比control组：(0.02±0.01)比(1.03±0.40)，P<0.001]、Ki-67 mRNA表达水平[NEC组比control组：(0.18±0.06)比(1.00±0.15)，P<0.001]显著下降，单个隐窝内Ki-67+细胞个数[NEC组比control组：(3.17±2.04)比(9.17±1.47)，P<0.001]明显减少，β-catenin mRNA表达水平[NEC组比control组：(0.01±0.01)比(1.23±0.42)，P<0.05]及β-catenin蛋白活化水平(即非磷酸化β-catenin)[NEC组比control组：(0.14±0.04)比(0.92±0.41)，P<0.001]明显降低。而相较于NEC组，NEC+IO组小鼠累积存活率显著提高(NEC组比NEC+IO组：42.42%比69.84%，P<0.001)，NEC病理评分[NEC组比NEC+IO组：3(2.5~3)比0(0~1.5)，P<0.05]与IL-6 mRNA表达水平[NEC组比NEC+IO组：(4.52±0.82)比(1.04±0.18)，P<0.001]均显著降低，Ki-67 mRNA表达水平[NEC组比NEC+IO组：(0.18±0.06)比(0.37±0.10)，P<0.05]升高，单个隐窝内Ki-67+细胞个数明显增加[NEC组比NEC+IO组：(3.17±2.04)比(12.67±1.51)，P<0.001]。此外，肠道β-catenin mRNA表达水平[NEC组比NEC+IO组：(0.01±0.01)比(2.44±1.19)，P<0.001]及β-catenin蛋白活化水平[NEC组比NEC+IO组：(0.14±0.04)比(0.54±0.25)，P<0.05]均升高。结论外源性IO可以缓解NEC肠道损伤，抑制肠道炎症反应，提高肠道内细胞增殖水平，改善肠道干细胞活性，Wnt/ β-catenin信号通路可能参与介导了上述IO干预作用。

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简介：摘要类器官是使用三维培养方式模拟细胞的体内生长微环境，在体外构建的具有多种细胞成分的组织模型，在疾病研究、药物筛选、胚胎发育等领域展现出较大的应用潜力。乳腺类器官是类器官研究领域出现较早、较为成熟的模型。该文对乳腺类器官模型的发展、应用研究、存在问题进行了综述，并对应用前景进行展望。

简介：摘要骨缺损修复一直是再生医学研究领域中的热点和难题。近年来骨组织工程技术的飞速发展极大提升了骨缺损修复水平，但是骨再生研究仍然面临诸多挑战，如病理条件下骨再生困难、再生调控机制不清等，导致骨组织工程技术发展遇到瓶颈，制约了对骨再生修复的深入研究。骨类器官是一个全新概念，是一类特殊复杂的硬组织，可根据生物学基础理论，借助组织工程3D培养技术在体外构建，模拟体内骨组织的复杂生物学功能。骨类器官有助于阐明骨再生调控机制、筛选组织工程材料、促进骨再生修复，在骨再生研究中展现出广阔的应用前景。笔者就骨类器官的特点、构建策略及价值进行初步探讨，为骨缺损治疗提供新思路。

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简介：摘要胰岛移植是有效治疗1型糖尿病的手段，局限性在于供体缺乏。干细胞衍生的胰岛有望成为胰岛素依赖型糖尿病的一种治疗方法。类器官来源于干细胞分化，被证明在器官修复及再生医学领域有极大的发展潜力。体外诱导形成的人胰岛样类器官，经过封装移植有望使糖尿病患者减少对胰岛素治疗的依赖，具有广阔的应用前景。本文将对胰岛样类器官发展及在糖尿病治疗的应用研究进行介绍。

简介：摘要肺癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率均居恶性肿瘤首位。传统肿瘤模型的缺陷制约着肺癌的发生机制、药物研发和临床转化等研究。肿瘤类器官作为新一代的三维肿瘤模型，能够真实保留原始肿瘤的形态结构和肿瘤异质性，并具有培养时间短、增殖效率高、可长期保存等优势。近年来，包括肺癌在内的多种恶性肿瘤的类器官被成功构建，其在肿瘤相关的研究中表现出巨大应用价值，但仍存在创建成本较高和无法完全模拟肿瘤微环境的缺点。目前，借助肺癌类器官已实现临床前抗肿瘤药物筛选，极大地推动了肺癌个体化治疗的发展，并有望联合液体活检和基因编辑技术在肺癌的防治研究中取得更大的突破。本篇拟针对类器官在肺癌防治研究中的应用进行综述。

简介：摘要：肝脏是人体最重要的内脏器官之一，它在人体内承担着多种重要的生理功能，包括代谢调节、解毒排泄、胆汁合成和储存等。近年来，随着生物医学研究的进展，人们对肝脏类器官的研究越来越深入，并取得了一系列重要的研究成果。肝脏类器官研究的重点之一是肝脏组织工程。肝脏组织工程是利用生物材料和细胞等技术手段，研究和构建功能性肝脏组织的过程。该领域的研究成果对于解决肝脏移植和肝脏疾病治疗等问题具有重要意义。因此，本文在研究中采取文献综述的研究方法，针对目前肝脏类器官的研究进行情况进行综述，更好的为肝脏疾病的诊断和治疗提供了新的思路

简介：摘要乳腺癌是世界范围内女性发病率最高的恶性肿瘤，具有复杂的遗传与病理特征。早筛早诊、靶向药物与免疫治疗的应用使乳腺癌患者的生存率显著提高，但复发和转移仍然威胁着乳腺癌患者的生存，患者个体化治疗仍是临床诊疗难点。乳腺癌类器官运用三维培养技术模拟肿瘤微环境，在体外培养乳腺癌肿瘤细胞，形成与体内肿瘤类似的组织结构，具有操作简便、周期短和通量高等优势，逐渐被广泛应用于药物敏感性筛选、个体化用药和乳腺癌生物学研究等领域。本文将对乳腺癌类器官的发展过程、构建方法与应用作一综述，以期为相关领域的研究者和探索方向提供参考。

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简介：摘要类器官是利用干细胞的自我更新和自我组装性能，经体外三维培养形成的微小组织器官类似物。本文综述了介导血糖调控和糖尿病慢性血管并发症的组织类器官构建过程，及其在糖尿病领域中的应用进展。类器官技术在疾病建模、个体化医疗和再生医学等方面有助于进一步推进糖尿病领域的研究。

简介：摘要类器官是体外由有自我更新能力的干细胞在三维支架下形成的具有特异性的微型器官。随着该细胞培养系统的发展，近年来类器官培养已逐步应用于体外器官模型的建立、药物测试甚至是修复或取代受损器官的研究中，具有良好的发展前景，该综述旨在总结类器官在口腔医学中的最新研究成果，为类器官的发展提供口腔医学领域的理论依据并予以展望。

简介：摘要目的探究新生小鼠肠道类器官的发育成熟过程，为围产期胎儿/新生儿肠道上皮发育及相关疾病的研究提供新模型。方法取3日龄C57BL/6小鼠肠道组织，利用标准条件培养肠道类器官，传代培养至第5代。利用倒置相差显微镜观察并记录各代肠道类器官形态变化。利用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光技术检测各代肠道类器官中肠道干细胞及肠道上皮各类型分化细胞标志物的表达及组织细胞定位（选取的标志基因：肠道干细胞：Lgr5；胎儿期肠道祖细胞：Tpm2和Gja1；肠道上皮细胞：Villin；帕内特细胞：Lyz1；杯状细胞：Muc2；内分泌细胞：Chga；选取的各细胞标志蛋白：肠上皮细胞：绒毛蛋白；杯状细胞：黏蛋白2；内分泌细胞：嗜铬粒蛋白A；帕内特细胞：溶菌酶）。采用单因素方差分析和Bonferroni检验进行统计学分析。结果新生小鼠肠道类器官中存在不成熟的球状体和具有隐窝-绒毛结构的成熟型类器官这2种类型。原代培养物中以球状体为主要形态，占（96.61±1.36）%；从原代至传代第2代间，类器官形态变化表现为球状体比例明显下降［第2代占比下降至（8.93±1.50）%］，且面积缩小（F=12.88，P<0.001）；第2代至第5代类器官的形态以成熟类器官为主，占比从（91.07±1.50）%升至（95.56±2.14）%。肠道干细胞标志基因Lgr5的表达在从原代传代到第2代之间降低（F=76.75，P<0.001），第2代Lgr5表达为原代的0.40±0.06，在第2代之后上升。胎儿期肠道祖细胞标志基因Tpm2表达在传代中明显下降（原代1.00±0.11，第5代0.003±0.001，F=148.00，P<0.001）；Gja1的表达在原代（1.00±0.14）至第2代（0.06±0.04）间下降（F=197.10，P<0.001），在第2代后保持稳定低表达（F=2.20，P=0.13）。肠道上皮内各类型分化细胞（肠上皮细胞、杯状细胞、内分泌细胞和帕内特细胞）的标志基因表达在传代第2代之后呈现升高趋势（Villin：第2代0.46±0.11，第5代1.02±0.05；Muc2：第2代0.68±0.29，第5代8.79±0.61；Chga：第2代2.53±0.16，第5代4.32±0.45；Lyz1：第2代0.98±0.21，第5代3.81±0.36；P值均<0.05）。免疫荧光染色结果显示，在原代及第5代培养物中，肠上皮细胞标志蛋白绒毛蛋白均沿肠道类器官绒毛侧分布。杯状细胞标志蛋白黏蛋白2及内分泌细胞标志蛋白嗜铬粒蛋白A在原代中表达很低，而到第5代中染色明显。在原代培养物中帕内特细胞标志蛋白溶菌酶弥散性均匀分布在类器官细胞内，而在第5代中可见高荧光强度点状表达。结论新生小鼠肠道类器官的连续培养可模拟未成熟肠道上皮的发育成熟过程。原代至传代第2代类器官也许可作为胎儿至新生儿期肠道上皮发育的研究模型，传代第2~5代类器官也许可作为新生儿期肠道疾病研究的新模型。

简介：摘要目的探索卵巢上皮性癌（卵巢癌）类器官的建立方法及初步应用。方法收集2021年10月至2022年3月于南京医科大学第一附属医院行手术治疗的32例卵巢癌患者的新鲜癌组织标本，通过组织酶解、消化、基质凝胶包埋等流程建立卵巢癌类器官。采用HE染色与免疫荧光染色验证卵巢癌类器官的形态结构与分子标志物的表达，3D类器官细胞活性染色法检测卵巢癌类器官细胞的活性状态。在卵巢癌类器官培养液中分别加入不同浓度（5、10、20、40、80 μmol/L）的卡铂，计算卵巢癌类器官对卡铂的50%抑制浓度（IC50）。结果（1）32份卵巢癌组织标本中，18份在体外产生可稳定传代的类器官，体外稳定扩增时间均>3个月，最长者达9个月；14份可短期传代的类器官，连续扩增时间均<2个月。（2）HE染色显示，卵巢癌类器官的细胞核呈明显的异型性，且局部可形成微乳头状结构。免疫荧光染色显示，卵巢癌类器官表达与原代卵巢癌相似的分子标志物，如广谱细胞角蛋白（Pan-CK）、p53、配对盒基因8（PAX8）、Wilms瘤基因1（WT1）。（3）3D类器官细胞活性染色法检测显示，卵巢癌类器官内部及类器官的周围出现大量凋亡细胞。在体外可稳定扩增的18份类器官对卡铂的IC50为（29.5±15.8）μmol/L；其中，接受了新辅助化疗后生成的4份类器官对卡铂的IC50为（48.7±11.3）μmol/L，高于14份未接收新辅助化疗者［（24.0±12.1）μmol/L］，两者比较，差异有统计学意义（t=3.429，P=0.022）。结论卵巢癌类器官能够在体外模拟卵巢癌的特征，并且能够稳定传代，新辅助化疗后卵巢癌组织产生的类器官对卡铂具有更高的耐药性。

简介：摘要类器官培养技术是目前干细胞领域的研究热点，即在体外培养与体内器官高度相似的，具有立体结构与生理功能的器官样细胞群。目前，利用人源性多能干细胞培养人晶状体类器官，即晶状体小体的构建已经实现并在不断地演进，双凸透明、具备天然晶状体所有组分以及屈光性能的晶状体类器官作为一种可靠的人晶状体体外模型，在研究晶状体发育机制上优势显著，在此基础上建立的年龄相关性白内障和先天性白内障的体外疾病模型，更为白内障的病理机制研究、潜在药物筛选带来了极大的便利性与可靠性，在白内障基础研究乃至于临床转化上具有广阔的前景。

简介：摘要类器官模型在发育生理学研究、疾病模型构建、药物筛选中发挥着日趋重要的作用。然而传统的类器官培养方式操作繁复、标准化程度低、无法复现体内生理/病理微环境，导致获得的类器官产量低、均一性差、成熟度低，难以满足研究及应用需求。作为一种精确操控微量流体的新兴技术，微流控芯片既可对类器官培养的微环境因素(如生化因子浓度、流体剪切力、营养供应等)进行精确控制，也能够与微加工技术、传感技术等集成以构建器官特异性微环境并实现对类器官的连续监测，有望替代传统培养方式，使类器官在基础研究和生物医学应用中发挥更大的作用。本综述系统介绍了微流控芯片技术在不同来源的类器官的研究中的应用，并对其局限性和发展前景进行了探讨。