国内罕见沙门氏菌的鉴定及耐药情况分析

国内罕见沙门氏菌的鉴定及耐药情况分析

黄芳

广州市海珠区疾病预防控制中心 510288

摘要：目的 了解广州市海珠区罕见沙门氏菌的血清学分型及耐药现状。方法 结合API 20E系统生化反应、血清学分型及药敏试验对罕见沙门菌进行分析鉴定。结果18株罕见沙门氏菌鉴定出10个血清型，非A-F群有5株。18株沙门氏菌均对头孢噻肟、环丙沙星、氧氟沙星敏感，6株耐3种及3种以上抗生素。结论 18株罕见沙门氏菌从海珠区从业人员健康体检中发现，国内少见报道，不同血清型沙门氏菌分离株存在不同程度的抗生素耐药。

关键词 ：沙门氏菌；血清学分型；耐药；药敏试验

非伤寒沙门氏菌（NTS）是指伤寒、副伤寒除外的其他血清型的沙门氏菌，是一种人畜共患病原菌^[1]。近年来，与伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌相比，NTS的感染明显上升，据报道，我国细菌性肠胃炎的致病菌中，NTS仅次于副溶血性弧菌，位居致病菌的第二位^[2]。血清学分型是非伤寒沙门氏菌的传统分型方法，到目前为止已鉴定2500多种^[3]。作者从餐饮从业人员健康体检肛拭子中检测分离出18株罕见的沙门氏菌，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

标本来自广州市海珠区餐饮从业人员健康体检肛拭子。

1.2 试剂

沙门氏菌亚硒酸半胱氨酸盐增菌液（生产批号：1076011），沙门氏菌显色培养基为法国科玛嘉公司生产（生产批号：J0420Y）；BS琼脂（生产批号：1067362）、三糖铁琼脂（生产批号：1091421）均购自广东环凯微生物科技有限公司；沙门氏菌分类血清购自泰国生物制品有限公司(生产批号：4599）；沙门氏菌属诊断血清（60种）购自宁波天润生物药业股份有限公司(生产批号：20171101）；细菌鉴定生化管购自广东环凯微生物科技有限公司(生产批号：5107395）；API 20E肠道细菌鉴定试剂盒购自法国梅里埃公司(生产批号：1006934990）；12种抗生素药敏纸片(英国OXOID公司)：氨苄西林、头孢他啶、头孢噻肟、链霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、复方新诺明、甲氧苄啶、环丙沙星、氧氟沙星、奈定酸。实验所用试剂和培养基均在有效期内使用。

1.3 方法

按照WS271-2007《感染性腹泻诊断标准》对可疑沙门氏菌菌株进行增菌分离^[4]，参照国家标准GB4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对可疑沙门氏菌菌株进行生化鉴定，根据世界卫生组织国际沙门菌中心2007年第9版White-Kauffman血清分型标准^[3]，确定血清型别。

1.3.1分离培养 将采集好的肛拭子放入10ml亚硒酸半胱氨酸盐增菌液中，置37℃培养18-24小时。挑取增菌培养液接种于BS平板和沙门氏菌显色平板，37℃培养24小时，挑取单个可疑菌落，进行纯培养。

1.3.2 生化鉴定 将纯培养的细菌接种肠杆菌科细菌生化编码鉴定管，同时使用API 20E肠道细菌鉴定试剂盒进行系统生化鉴定。

1.3.3血清学分型 取可疑培养物与沙门氏菌诊断血清进行玻片凝集试验，并利用泰国血清进行血清学分型。

1.3.4抗生素药敏试验 采用WHO推荐的K-B纸片扩散法，选取抗生素敏感实验纸片12种，操作及结果判断参照美国临床实验室标准化协会（GLSI)）制定的标准，获得相应敏感（S）、中度敏感（I）和耐药（R）结果。大肠埃希菌（ATCC25922）作为药敏试验质控菌株确保结果的可靠性。

2 结果

2.1 初步生化反应

肛拭检材接种亚硒酸盐胱氨酸增菌液，37℃培养18～24小时，划线分离BS琼脂平板和沙门氏菌显色平板，37℃培养18～24小时后，在BS平板上菌落圆整、直径大小约1.5～2.0mm左右、黑色、有金属光泽、不粘。在沙门菌显色平板上菌落紫红色、中等大小、圆形、光滑湿润，不粘。

2.2沙门氏菌生化鉴定 挑取平板上可疑菌落转种双糖铁培养基，经37℃培养24小时，三糖管呈现葡萄糖产酸产气，乳糖不分解，底层产生H₂S。API 20E生化鉴定结果为沙门氏菌属。

2.3罕见沙门氏菌的血清型分布 18株沙门氏菌鉴定出7个O群，10种血清型，其中非A-F群有5株。见表1:

表1 罕见沙门氏菌的血清分型分布情况

2.4生化反应结果 对18株沙门氏菌进行API 20E生化鉴定，结果为沙门氏菌属。结果显示：赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、柠檬酸钠、硫化氢、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、阿拉伯糖试验阳性；半乳糖苷、精氨酸、尿素、吲哚、丙酮酸盐、明胶、蔗糖、苦杏仁苷试验阴性；肌醇、蜜二糖试验不定。生化反应见表2。

表2 .罕见沙门氏菌血清型生化反应结果

2.5 10种罕见沙门氏菌血清型药敏实验结果分析 18株沙门氏菌鉴定出10种血清型，同种血清型的菌株药敏实验结果一致，5株沙门氏菌对受试的12种抗生素敏感，18株对头孢噻肟、环丙沙星、氧氟沙星敏感，6株耐3种及3种以上抗生素。

表3 10种罕见沙门氏菌血清型药敏试验结果

3 讨论

非伤寒沙门氏菌（NTS）能够引起食物中毒、胃肠炎感染等，是威胁全球的公共卫生问题。近年来，我国城乡因婚、丧宴席或学校食堂卫生差等原因发生多起群体性非伤寒沙门氏菌食物中毒^[5]。目前，我国NST已分离鉴定300多种血清型，不断有新的血清型检出报道。血清型的正确鉴定对沙门氏菌病的食源性疾病鉴定及疫情控制具有重要意义。

本文采用了传统生化方法、API 20E肠道细菌鉴定试剂盒、血清学鉴定研究分析了18株罕见沙门氏菌的血清型分布，共分离出7个O群10种血清型。其中有5株为非A-F多价的沙门菌，与A-F多价诊断血清不凝集。因此，我们在实际检验工作中对这类型菌株应引起高度重视，对于基层实验室，可以划沙门氏菌显色平板和相应生化实验，以防漏检。由于沙门氏菌的菌体抗原（O）和鞭毛抗原（H）种类多而复杂，要准确判定是有一定难度的。鉴定菌株O抗原时用MH平板分离凝集，可获得较好效果。鉴定H抗原时，检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原或检出第2相H抗原而未检出第1相H抗原的，可接种普通琼脂斜面1到2代后再凝集，必要时还要做位相变异凝集实验。

非伤寒沙门氏菌（NTS）是最常见的食源性致病菌，严重威胁人的健康和生命安全。根据2007年美国疾控中心报道，美国曾发生了一起65人旺兹沃斯沙门氏菌暴发感染，这次食物中毒涉及到美国17个州。2009年我国四川某地区农村婚宴上发生一起肯塔基沙门氏菌食物中毒。这些罕见沙门氏菌血清型在我国虽然不常见，但是也会引起暴发感染，因此不容忽视。

药敏结果显示18株罕见沙门氏菌对链霉素、四环素、复方新诺明、甲氧苄啶、奈啶酸等呈较高水平耐药，这与国内很多研究一致。由于抗生素不合理使用现象日益普遍，促使细菌通过不同的耐药机制产生耐药。本实验结果还发现13株罕见沙门氏菌对奈啶酸的耐药性很高，奈啶酸的高耐药率性可能与我国在上世纪80年代批准奈啶酸广泛应用于畜牧养殖业有关。从药敏结果上看,绝大多数菌株对氨苄西林、头孢噻肟、环丙沙星、氧氟沙星敏感，所以三代头孢菌素和氟喹诺酮类药物仍是临床上治疗沙门氏菌感染的首选药物，这为本地区沙门氏菌感染的临床用药提供参考。其中值得注意的是不同血清型沙门菌对抗生素耐药存在明显差异，黄金海岸沙门氏菌、阿尔巴尼沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌耐药最严重，普遍存在多重耐药性，这与国内报道基本相似，因此加强对罕见沙门氏菌抗生素耐药性的研究，应充分考虑本地区致病菌的特异性耐药谱，提高合理用药的意识，对有效预防和控制由沙门氏菌引起的食源性疾病的发生具有重要的意义。

参考文献

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[2]毛雪丹，胡俊峰，刘秀梅.2003-2007年中国1060起细菌性食源性疾病流行病特征分析[J].中国食品卫生杂志.2010.22(3):224-228.

[3]朱超,许学斌.沙门菌属血清型诊断[M].上海:同济大学出版社,2009.

[4]感染性腹泻诊断标准.WS271-2007 中华人民共和国卫生行业标准[s].北京：人民卫生出版社，2007.

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