ESBLs显色培养基的临床运用评价

ESBLs显色培养基的临床运用评价

冯佼

冯佼

（四川省邻水县人民医院检验科四川广安638500）

【摘要】目的：超广谱β内酰胺酶（ESBLs）探讨显色培养基对患者标本中携带大肠埃希菌、肺炎克雷伯的快速筛选作用。方法：将患者的肛拭子标本接种chromIDESBL显色培养基，并对生长的细菌进行鉴定和酶抑制剂增强试验。结果：chromIDESBL显色培养基显紫红色的细菌为产ESBL的大肠埃希菌34株、显蓝绿色的细菌为KESC群，其中产ESBL肺炎克雷伯13株；ATB鉴定值均大于90%；chromIDESBL显色培养敏感率（94%）和特异性均（94%）较好，chromIDESBL显色培养基和酶抑制剂增强试验对筛选ESBLs菌株无统计学意义。结论：显色培养基能快速检测筛选ESBLs阳性的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌，对控制院内感染、指导临床合理使用抗菌药物有积极意义。

【关键词】显色培养基；大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；超广谱β内酰胺酶

【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）16-0042-02

TheclinicalapplicationevaluationofESBLschromogenicmediumFengJiao.ThePeople'sHospitalofLinshuiCounty,SichuanProvince,Guangan638500,China

【Abstract】ObjectiveOnpatientswithchromogenicmediumforspecimenswithe.coli,klebsiellapneumoniainrapidscreeningeffect.MethodsAnalswabsamplesfromavictimtovaccinatechromDESBLchromogenicmedium,andperformedthebacteriaidentificationandenzymeinhibitorsenhanceexperimentwascarriedout.ResultsChromIDESBLchromogenicmediumforESBLproductionshowpurplebacteria34strainsofe.coli,blue-greenbacteriainKESCgroup,andthemiddleESBLpneumoniaklebsiella13strains;ATBappraisalvaluesweregreaterthan90%.ConclusionsChromogenicmediumcanquicklydetectscreeningESBLspositivefore.coli,klebsiellapneumoniae,tocontrolthenosocomialinfectionandhaspositivesignificancetoguideclinicalrationaluseofantimicrobialagents.

【Keywords】Chromogenicmedium;E.coli.Klebsiellapneumonia;Theultrabroadspectrumbetalactamase

超广谱β—内酰胺酶(ESBL)主要由肠杆菌科细菌产生,尤以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为代表。产ESBLs菌不仅对第三代头孢菌素和氨曲南耐药,而且对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类交叉耐药，导致治疗困难，且易在医院内水平传播，引起暴发流行。ESBL携带者的检测对于医院内感染的预防和流行病学监测都十分重要。ChromIDESBL琼脂是用于筛选慢性携带病人或高危病人肠杆菌产ESBL的产色培养基。现对该培养基的临床应用评价报道如下。

1.材料和方法

1.1材料

1.1.1菌株来源2015年1月至2015年4月我院门诊及住院患者送检的肛拭子共125份。

1.1.2质控菌株ATCC700603和ATCC25922。

1.1.3仪器设备鉴定菌种所需的法国生物梅里埃ATB鉴定系统。

1.1.4纸片来源药敏纸片来自于杭州天和有限公司提供。

1.1.5MH培养基和ChromIDESBL琼脂均由法国生物梅里埃公司提供。MH培养基批号：20140925B;ChromIDESBL琼脂批号：1003457270.

1.2方法

1.2.1将肛拭子直接接种在ChromIDESBL琼脂上37°孵育24小时。

1.2.2菌种鉴定采用生物梅里埃ATB。

1.2.3ESBLs试验确证：在涂满待测菌的M-H平皿上分别贴上头孢噻肟和头孢他啶以及头孢噻肟＋克拉维酸、头孢他啶＋克拉维酸纸片，35℃孵育过夜，如果加酶抑制剂纸片周围的抑菌圈与不加酶抑制剂纸片的抑菌圈直径相差5mm以上，即为ESBLs确证试验为阳性。

1.2结果

125份肛拭子中有55份在ChromIDESBL显色培养上生长，70份未生长。在55份显色培养基上生长的细菌中蓝绿色的细菌17株，紫红色的细菌35株，棕色细菌2株，淡黄色细菌1株。经过ATB的鉴定，鉴定值均大于90%和ESBLs确证试验发现17株的绿色细菌中肺炎克雷伯15株，其中13株ESBLs阳性，2株ESBLs阴性；阴沟肠杆菌1株，ESBLs阳性，粘质沙雷菌1株，为ESBLs阴性。在35株紫红色细菌中34株为ESBLs阳性的大肠埃希菌，1株为泛菌属。2株棕色细菌均为铜绿假单胞菌，1株淡黄色细菌为鲍曼不动杆。

3.讨论

ESBLs是由质粒介导的能水解氧亚氨基β-内酰胺类抗生素，并可被β-内酰胺类抑制剂所抑制的一类β-内酰胺酶。ESBLs菌株具有多重耐药，常同时携带其他耐药基因，导致临床治疗失败。准确区分产ESBLs和非ESBLs菌株，不仅是可以指导临床用药，以免贻误病情和增加医疗的费用，而且有利于产ESBLs菌株的管理，控制其传播和防止爆发性流行，对于提高治疗效果和控制医院感染具有重要的意义的[1-3]。

ChromIDESBL琼脂于筛选慢性携带病人或高危病人肠杆菌科产ESBL的产色培养基。两种产色物质和一种天然底物可直接鉴定常见的ESBL肠杆菌科细菌。粉到紫红色菌落为大肠埃希菌，从本试验可以看出大肠埃希菌显色培养（esbl+）阳性比率为100%，肺炎克雷伯显色培养（esbl+）阳性比率为87%。

从表2我们可以看到两种方法对比，ChromIDESBL显色培养敏感率（94%）和特异性均（94%）较好，显色培养基和酶抑制剂增强试验对筛选ESBLs菌株无统计学意义，也存在一定的假阴性结果。绿色菌落为KESC群，即克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属，从表1可以看出确实如此，17绿色的细菌大多为KESC群细菌，发现该组绿色菌落中有3为ESBLs阴性菌株。因此显色培养基为绿色的菌落时，则需要进行生化试验才能鉴定到种，同时要进行双纸片法确认ESBLs。

多重耐药菌(multi-drugresistantbacteria,MDR)感染现在已经是遍布全球，不管是在社区或者是医院里可引起散发，交叉传播，甚至是爆发流行，对婴幼儿，免疫缺陷者或者老人的威胁是比较大的。因MDR感染应用常用的抗菌药物(多数β-氨基糖苷类，大环内酯类，内酰胺类，氟喹诺酮类，四环素类等)后的效果并不明显，因此已成为治疗上比较棘手的问题，并伴有较高的病死率。因此坚持多重耐药菌的持续监测对预防医院内感染十分重要。从该研究看到ESBLs显色培养基对大肠埃希菌和肺炎克雷伯的筛选以及与确证试验的符合是较好的，因此ESBLs显色培养基能快速筛选慢性携带病人或高危病人产ESBLs的肠杆菌科细菌，值得推广。

【参考文献】

[1]陈亚红，姚婉珍，刘振英等.近三年产超广谱β内酰胺酶菌株分布及药敏变迁[J].中国抗生素杂志、2003,28(12):726-729.

[2]周爱春.ESBLs显色培养基的临床运用评价[J].中国医药导报、2009,6(5):49-50

[3]崔岩，沈定霞，周贵民.超广谱β内酰胺酶产酸克雷伯菌的医院感染流行分析[J].中华医学检验杂志，2002,25:277-280.

[4]韩立中,杨海慧,祝艳萍.ChromIDESBL显色平板对产ESBLs肠杆菌科细菌筛选作用的评估[J].检验医学,2010,(25):118-120.

[5]倪语星,尚红.临床微生物学检验，2014,5:142