HPLC法测定吉祥草中β-胡萝卜素

HPLC法测定吉祥草中β-胡萝卜素

陈玲鲍家科徐洪熊慧林陈万里

陈玲鲍家科徐洪熊慧林陈万里（贵州省药品检验所贵州贵阳550004)

作者简介：陈玲（1959.5-），女，副主任药师。科学及研究方向：药物分析。

【摘要】目的:建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。方法：以丙酮-石油醚（1∶1v/v）的混合溶液浸提吉祥草中β-胡萝卜素。色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺（80∶10∶10∶0.05）；流速：1.0ml·min-1；柱温20℃；检测波长为450nm。进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察。结果：β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074～0.0666μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率（n=6）为99.33%，稳定性400分钟内RSD=1.94%。结论：该法专属性强，结果准确，重现性好，可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法。

【关键词】吉祥草;β-胡萝卜素;高效液相色谱法

【中图分类号】TS207【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2010）07-0279-02

吉祥草为百合科植物吉祥草Reineckiacarnea（Andr.）Kunth.的干燥全草。具有滋阴润肺，凉血止血的功效。主要用于肺燥咳喘，阴虚咳嗽[1]。据报道吉祥草中含有较多的β-胡萝卜素[2],β-胡萝卜素是胡萝卜素的主要组成部分，而大量研究表明胡萝卜素是维生素A的重要来源,具有抗氧化、抗癌、抗辐射、增强免疫力等生理和药用价值[3-4]。目前有关吉祥草中β-胡萝卜素定量研究还未见报道。本研究采用高效液相色谱法，测定吉祥草中β-胡萝卜素，为全面控制吉祥草药材质量提供依据。

1仪器与试药

紫外可见分光光度仪：岛津UV-2550型分光光度仪；高效液相色谱仪：岛津LC-2010ATH液相色谱仪，LC-solution色谱工作站。色谱柱为DiamonsilC18(200mm×4.60mm，5μm)；β-胡萝卜素对照品（100445-200701，含量30.9%）购自中国药品生物制品检定所；吉祥草药材产自贵州省各地，经贵州省药品检验所熊慧林主任药师鉴定为百合科植物吉祥草Reineckiacarne（Andr.）Kunth；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1含量测定［4-8］

2.1.1检测波长的选择经对β-胡萝卜素对照品溶液进行紫外扫描，发现在450nm处有最大吸收峰。因此选择450nm作为检测波长。

2.1.2对照品溶液的制备:精密称取β-胡萝卜素对照品适量，加丙酮制成每毫升约含4.0μg的溶液。

2.1.3供试品溶液的制备:取吉祥草粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，用丙酮-石油醚（30～60℃）（1∶1v/v）的混合溶液重复浸提至溶液无色，浸提液置抽风橱内自然挥干，残渣用丙酮定溶至10ml，经0.45μm的微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。

2.1.4色谱条件及含量测定:色谱柱为迪马C18(200mm×4.60mm，5μm)，柱温20℃；流动相：乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺（80∶10∶10∶0.05）；流速：1.0ml·min-1；检测波长为450nm。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，进行含量测定。

2.1.5线性关系考察:精密吸取上述β-胡萝卜素对照品溶液2，6，10，14，18μl注入高效液相色谱仪，依法测定，以峰面积为纵坐标，β-胡萝卜素浓度为横坐标，绘制标准曲线，线性回归方程：Y=12559750.00000x-3712.95000，R2=0.99995。结果表明，β-胡萝卜素在0.0074～0.0666μg范围内具有良好的线性关系,见图1。

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2.1.6精密度考察:取同一对照品，分别重复进样6次，对照品溶液中β-胡萝卜素RSD=1.55%（n=6）。

2.1.7重复性实验:取吉祥草6份，精密称定，按“样品含量测定”项下的方法操作，制成供试品溶液，测定β-胡萝卜素的平均含量为37.96mg/g，RSD为1.68%。（样品为紫云县产）。

2.1.8稳定性实验:将配制好的供试品溶液在室温下放置，分别于0，80，160，240，320，400分钟测定，结果样品溶液在400分钟内基本稳定，RSD=1.94%。（样品为紫云县产）。

2.1.9加样回收率实验:精密称取已知含量的吉祥草共6份，分别加入等量β-胡萝卜素对照品，照供试品溶液的制备方法制备，测定含量，β-胡萝卜素平均回收率为99.33%,RSD=1.23%，(n=6)。（样品为紫云县产）。

2.1.10吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定：按“2.1.3”项下方法,制备供试品溶液,测定吉祥草中β-胡萝卜素的含量,测定结果见表2。

表1β-胡萝卜素回收率实验结果

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3讨论

实验中采用β-胡萝卜素对照品溶液进行紫外扫描，发现450nm处有最大吸收峰，故采用450nm作为本实验的检测波长。

由于β-胡萝卜素对光、热、氧化酶的作用较为敏感，因此样品的处理采用避光、室温浸提，浸提液抽风橱内自然挥干，高效色谱柱温设定为20℃，以避免β-胡萝卜素的损失。

对提取溶剂进行考察，比较了丙酮-石油醚（30～60℃）（1∶1v/v）的混合溶液和丙酮-石油醚（30～60℃）（20∶80v/v）的混合溶液浸提效果，结果丙酮-石油醚（30～60℃）（1∶1v/v）的混合溶液浸提的β-胡萝卜素分离较好，且β-胡萝卜素的含量也较高，故选择丙酮-石油醚（30～60℃）（1∶1v/v）的混合溶液作提取溶剂。

对流动相的考察，比较乙睛∶甲醇（20∶80）[4]和乙睛∶甲醇∶乙酸乙酯∶三乙胺（80∶10∶10∶0.05）[7]的分离效果及出峰时间，[7]较[4]好，故选[7]作为流动相。

不同产地的吉祥草中β-胡萝卜素含量变化范围较大，其中以紫云县产的吉祥草中所含β-胡萝卜素的含量最高。本实验说明对各地所产吉祥草进行β-胡萝卜素含量测定，对药品生产企业在选择原料方面是具有指导意义的。

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图2β-胡萝卜素对照品（A）和吉祥草样品（B）HPLC图

参考文献

[1]鲍家科等.贵州省中药及民族药材质量标准原植（动）物彩色图鉴上册.贵州科技出版社.2009，150～151

[2]周欣刘海等.吉祥草化学成分研究.中国中药杂志.2008，33（23）2793～2796

[3]王新超杨亚军等.天然胡萝卜素开发利用状况和设想.《广西植物》2006，（3）：23

[4]吴光斌.反相高效液相色谱法法测定果蔬中β-胡萝卜素.食品工业科技，2005，（3）：166～168

[5]张坤生等.高效液相色谱法法测定红酵母细胞中的β-胡萝卜素.中国食品学报，2004，4（1）：52～54

[6]雷绍荣、欧阳华学.反相高效液相色谱法测定芦荟中β-胡萝卜素含量.西南农业学报，2005，18（6）：874～875

[7]吴鑫等.高效液相色谱法测定甘薯中β-胡萝卜素.中国卫生检验杂志，2006，16（9）：1056～1057

[8]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.2005：附录ⅥB.