简介:目的验证smallinterferenceRNA(siRNA)片段稳定转入肾细胞癌细胞中抑制其癌细胞生长,同时试图解释其原因。方法将合成好的RNAi慢病毒颗粒稳定转入目的细胞中并达到稳定传代后,以CCK-8试剂盒检测目的细胞的生长情况,以Real-timePCR检测目的细胞中p53基因及survivin基因的表达变化。结果CCK-8法测得ACHN细胞在MDR1被干扰以后的生长水平,干扰组细胞明显低于两对照组,且干扰组细胞的细胞活力出现了明显的下降趋势。Real-timePCR检测得p53基因和survivin基因的mRNA表达水平明显降低,而无意义重组载体组(NC组)则和亲本细胞无明显差异。结论MDR1沉默可使肾细胞癌ACHN细胞增殖减慢,生长抑制。同时沉默后细胞内的mtp53及survivin基因的表达均明显减少,MDR1介导的对肿瘤细胞生长的抑制作用至少部分是通过p53和survivin基因来实现的。
简介:目的探讨微小RNA(miRNA)-155对喉鳞状细胞癌(LSCC)Hep2细胞侵袭能力的影响及其机制。方法培养LSCCHep2细胞,分为miRNA-155组、miRNA-155NC组,分别转染miRNA-155抑制剂(miRNA-155inhibitor)及miRNA-155阴性对照(miRNA-155NC)O收集两组转染48h的LSCCHep2细胞,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miRNA-155的表达,CCK-8法检测细胞活力,Transwell小室检测细胞侵袭能力.Westernblot检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、钙黏蛋白(E-eadherin)、波形蛋白(virnentin)、磷脂酰肌醇-3-轻激酶(PI3K)蛋白、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT的表达变化?结果转染后的LSCCHep2细胞中,miRNA-155组中miRNA-155相对表达量0.44±0.04、光密度(0D)值0.38±0.04、细胞侵袭数目(39.4±4.3)个,均明显低于miRNA-155NC组的1.52±0.15,0.68±0.07J157.8±12.6)个,差异均有统计学意义(t=34.082,18.229、43.531,P值均<0.01)。miRNA-155组Hep2细胞PI3K/AKT信号通路中MMP-2、MMP-9、vimentin、PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量分别为0.38+0.03,0.25±0.02,0.29±0.02、0.28±0.03,0.99±0.05,0.24±0.02,均低于miRNA-155NC组的1.78±0.15J.56±0.16、1.34±0.12J.04±0.09J.17±0.08,0.83±0.08;而E-cadherin表达量为1.13±0.10,高于miRNA-155NC组的0.31±0.02:两组比较,差异均有统计学意义0=29.345,46.745,59.436,34.217J5.936,30.129,44.621,P值均<0.01)。结论下调LSCCHep2细胞中miRNA-155的表达,可降低Hep2细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与调控P13K/AKT信号通路相关蛋白的表达有关。
简介:摘要:胶质瘤是来源于中枢神经系统且最为常见上皮恶性肿瘤,手术切除及常规辅助放化疗等虽然一定程度上提高部分患者的生存期,但预后普遍依旧较差。近年来,从基因与分子水平研究胶质瘤发生发展与治疗已为医学的热点,其中长链非编码 RNA( Long non-coding RNA,LncRNA)能够以不同的方式参与调控胶质瘤的发生发展,经研究发现胶质瘤与正常脑组织 LncRNA表达存在明显差异,且胶质瘤可以进行上皮间质转化( Epitheliaai-mesenchymai transition,EMT)以促进肿瘤细胞增殖、迁移及恶性浸润,进一步分析发现 LncRNA参与调控了胶质瘤 EMT。本文通过查阅近年来的相关研究与文献报道,就 LncRNA与胶质瘤的发生、进展及与 EMT之间的联系开展分析研究,以期待为胶质瘤的治疗方法开辟新的道路。
简介:【摘要】 目的 通过检测长链非编码RNA MIR31HG在结直肠癌中的表达水平,观察其对结直肠癌细胞生物学功能的影响,探讨MIR31HG在结直肠癌中的表达和临床意义及生物学功能。方法 采用实时荧光定量PCR检测20例结直肠癌肿瘤组织和对应癌旁组织中MIR31HG的表达水平;通过Pubmed GEO数据库分析已发表的相关结直肠癌基因芯片中MIR31HG的表达情况;通过TCGA数据库下载与MIR31HG相关结直肠癌患者生存资料,采用Kaplan-Meier 法分析MIR31HG的表达对结直肠癌生存预后的影响,Log-rank法进行显著性检验。采用RNA干扰下调MIR31HG在结直肠癌细胞SW480和Lovo细胞中的表达,MTT检测结直肠癌细胞的增殖能力,Transwell实验检测结直肠癌细胞的迁移袭能力。结果 MIR31HG在结直肠癌组织中的相对表达量为(4.16 ± 0.3),显著高于癌旁组织(2.31 ± 0.22),差异具有统计学意义(P < 0.001)。GDS2947 (n = 32)芯片结果显示MIR31HG在结直肠癌组织中的相对表达量为(11.23 ± 1.05),显著高于癌旁组织(7.97 ± 0.78),差异具有统计学意义(P < 0.001)。GDS4379 (n = 62)和GDS4516 (n = 104)芯片结果显示,MIR31HG在结直肠癌组织中的相对表达量分别为(4.3 ± 0.12)和(4.45 ± 0.04)。生存分析显示MIR31HG高表达结直肠癌患者5年生存率显著低于MIR31HG低表达患者 (n = 440),风险比(HR) = 1.52; 95% 可信区间(CI): 1.02-2.25; P = 0.0387。qRT-PCR检测显示siRNA转染可显著下调MIR31HG在结直肠癌细胞SW480和Lovo细胞中的表达。MTT结果显示,实验组与对照组比差异有统计学意义(P = 0.0073,P = 0.0125)。Transwell结果显示,实验组与对照组比差异有统计学意义(P = 0.0003,P = 0.0008)。
简介:【摘要】甲状腺乳头癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的全球发病率在近年中快速增长,外科手术为其主要治疗手段,但其手术必要性及术式的选择目前仍颇具争议。淋巴结转移(lymph node metastasis,LNM)是临床医生对PTC患者进行外科决策的重要依据。但目前PTC术前LNM难以充分评估,缺失分子生物学手段。研究表明,微小RNA(MicroRNA)与PTC的发生、发展密切相关,可能成为PTC诊断的分子标志物或治疗靶点。但其与LNM的关系仍需进一步探索。本文对目前热点MicroRNA在PTC患者LNM中的作用及研究进展进行综述。
简介:目的T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术(CellularFACTT)检测人循环肿瘤细胞中hTERT表达。方法以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入r17RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时用酶联免疫方法检测hTERT及CEA作为比对。结果64例结直肠癌患者血清hTERT阳性率是45.3%(29/64),血清CEA阳性率是57.8%(37/64);CellularFACTT方法检测循环肿瘤细胞的hTERT检出率为81.3%(52/64)。其检测的灵敏度与酶联免疫检测方法有显著差异P〈0.01。结论T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较酶联免疫检测方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的诊断。
简介:目的观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221(miR-221)和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织(0.806±0.341,P<0.01);同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织(3.019±1.708比0.972±0.316,P<0.01).癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义(P<0.01).结论miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.
简介:目的利用核糖核酸(RNA)干扰的方法,确定蛋白激酶Ca小干扰RNA(PKCαsiRNA)的体内最适作用浓度.探讨PKCαsiRNA对增生性玻璃体视网膜病变fPVR)防治作用。方法选择5~6周龄的C57BL/6j小鼠36只,通过玻璃体内注射分散酶诱导做成PVR小鼠模型,随机分为六组,每组6只小鼠,在1周后,5个治疗组的小鼠接受2肛lPKCαsiRNA的玻璃体腔注射.眼内终浓度分别为50nmol/L、100nmol/L、150nmol/L、200nmol/L、300nmol/L,而对应的阴性对照组接受的是2μlsiRNA,比较各组的PVR发生率;4周后取小鼠眼球用聚乙二醇和聚乙烯醇的混合物(OCT)包埋制作病理切片,进行苏木精一伊红(HE)染色,观察视网膜脱离情况。结果阴性对照组的PVR发生率为100%,50nmol/L浓度组PVR发生率为100%,100nmol/L浓度组、150nmol/L浓度组、200nmol/L浓度组PVR发生率都为66.67%。300nmol/L浓度组的PVR发生率为50.00%。不同浓度组的PVR发生率有差异,差异均有统计学意义(X^2=5.44,P〈0.05);HE染色结果显示阴性对照组和50nmol/L浓度组视网膜全部发生脱离,100~300nmol/IJ浓度组部分视网膜脱落.眼球结构基本完好。结论浓度为100~300nmol/LPKCαsiRNA通过玻璃体腔注射PKCαsiRNA对增生性玻璃体视网膜病变有一定的抑制作用。
简介:【摘要】 目的 LncRNA网络中的调控功能失常可能是非IgA系膜增生性肾小球肾炎发展的一个可能机制。方法 选取黑龙江省农垦总医院的肾病患者(18-29 岁)进行肾活检,根据病理结果分为疾病组(非IgA系膜增生性肾小球肾炎)和对照组。进行RT-PCR检测非IgA系膜增生性肾小球肾炎中lncRNA-104822和HIF-1α的表达情况。结果 疾病组lncRNA-104822和HIF-1α的表达高于对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。结论 lncRNA-104822 和HIF-1α蛋白质编码基因在非IgA系膜增生性肾小球肾炎中显着差异表达。 lncRNA 网络中的调控功能失常可能是非IgA系膜增生性肾小球肾炎发展的一个可能机制。 我们的研究表明,一些lncRNA-104822和HIF-1α与非IgA系膜增生性肾小球肾炎密切相关,可能在该疾病中发挥重要作用。
简介:【目的】探寻非编码小RNA分子BSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中的作用。【方法】通过RT-PCR检测BSR1350在酸、营养缺乏、氧化应激等模拟巨噬细胞内环境的不同压力条件下的转录情况;采用融合PCR的方法构建BSR1350的缺失突变株,同时构建其回复株;比较布鲁菌野生株16M、BSR1350缺失突变株和过表达株在模拟巨噬细胞内环境条件下以及小鼠体内的生存能力。【结果】BSR1350位于羊布鲁菌16MI号染色体的反义链上,在模拟巨噬细胞内环境的应激条件下表达明显增加。BSR1350缺失后,布鲁菌抵抗高渗、氧化压力、热应激及酸性环境的能力明显下降,小鼠脾脏内的细菌载量显著下降,表明BSR1350与布鲁菌的胞内生存能力和毒力相关。【结论】非编码小RNABSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中起着重要作用。
简介:【摘要】目的:讨论研究长链非编码RNA LINC00675在肾透明细胞癌发展中的作用及分子机制。方法:将2020年2月到2020年10月期间邢台市人民医院泌尿外科行根治性肾切除标本100对纳入研究范围,采用长链非编码RNA芯片技术、原位杂交技术、qRT-PCR技术等先进的技术思想,观察肾透明细胞癌长链非编码RNA LINC00675表达水平下调与临床特征之间的关系。结果:100对长链非编码RNA LINC00675 MIAT在肾透明细胞癌表达明显高于癌旁组织(P<0.05),有统计学差异。结论:肾透明细胞癌的长链非编码RNA LINC00675表达水平会出现明显升高,进而影响病情发展,在治疗中,应当重视患者长链非编码RNA LINC00675表达水平的变化。
简介:【摘要】目的:讨论研究长链非编码RNA LINC00675在肾透明细胞癌发展中的作用及分子机制。方法:将2020年2月到2020年10月期间邢台市人民医院泌尿外科行根治性肾切除标本100对纳入研究范围,采用长链非编码RNA芯片技术、原位杂交技术、qRT-PCR技术等先进的技术思想,观察肾透明细胞癌长链非编码RNA LINC00675表达水平下调与临床特征之间的关系。结果:100对长链非编码RNA LINC00675 MIAT在肾透明细胞癌表达明显高于癌旁组织(P<0.05),有统计学差异。结论:肾透明细胞癌的长链非编码RNA LINC00675表达水平会出现明显升高,进而影响病情发展,在治疗中,应当重视患者长链非编码RNA LINC00675表达水平的变化。
简介:摘要 目的:本研究探讨长链非编码RNA(lncRNA)在去势抵抗性前列腺癌(CRPC)新型内分泌治疗及化疗耐药机制中的作用,以期为CRPC的临床治疗提供新的分子靶点。方法:选取2022年10月至2023年10月期间于我院接受治疗的CRPC患者作为研究对象,共纳入80例。通过RT-qPCR技术检测患者组织中5种关键lncRNA的表达水平,包括HOTAIR、MALAT1、H19、TUG1和GAS5。对患者接受新型内分泌治疗(NHT)和化疗后的临床资料进行分析。结果:HOTAIR、MALAT1和H19在CRPC组织中的表达水平显著高于正常前列腺组织(p<0.05)。在接受NHT治疗的患者中,HOTAIR和MALAT1高表达的患者治疗有效率显著低于低表达的患者(p<0.05)。在接受化疗的患者中,HOTAIR和MALAT1高表达的患者治疗有效率显著低于低表达的患者(p<0.05)。结论:HOTAIR、MALAT1和H19在CRPC新型内分泌治疗及化疗耐药机制中发挥重要作用。检测这些lncRNA的表达水平有助于预测CRPC患者对NHT和化疗的反应,为个体化治疗提供依据。
简介:摘要:目的 探讨 RNA 恒温扩增实时荧光检测技术( SAT-TB )与结核感染 T 细胞斑点实验( T-spot.TB )联 合检 测在结核性胸膜炎( TBP ) 快速 诊断中的 应用 价值。方法 选择 181 例 疑似结核性胸膜炎 患者的胸腔积液作为研究对象,其中明确诊断的结核性胸膜炎患者的胸腔积液标本 102 例 ( TBP 组) 和非结核性胸膜炎患者的胸腔积液标本 79 例(非 TBP 组) ,采用 SAT-TB 及 T-spot.TB 方法进行检测。以临床诊断为标准,采用 ROC 曲线分析比较两种方法单独及联合检测, 分析其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值 及 一致性( Kappa 值) 。结果 SAT-TB 、 T-spot.TB 、 SAT-TB+T-spot.TB 检测的敏感度分别为 26.47% 、 84.31% 和 87.25% ;特异度分别为 100.00% 、 74.68% 和 100.00% ;阳性预测值分别为 100.00% 、 81.13% 和 100.00% ;阴性预测值分别为 51.30% 、 78.67% 和 85.87% ;一致性( Kappa 值)分别为 0.239 、 0.593 和 0.857 ; ROC 曲线下面积 AUC 分别为 0.632 ( 95% CI : 0.589 ~ 0.675 )、 0.795 ( 95% CI : 0.735 ~ 0.855 )和 0.936 ( 95% CI : 0.904 ~ 0.969 )。诊断价值 SAT-TB+T-spot.TB 高于 SAT-TB 及 T-spot.TB (均 p <0.05 )。结论 SAT-TB 和 T-spot.TB 联合检测对 结核性胸膜炎 患者有较好的临床诊断价值。
简介:目的探讨RNA干扰靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)P85α蛋白表达对结直肠癌细胞周期与细胞凋亡的影响。方法设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体.分别稳定转染结直肠癌SW480细胞。采用Westernblot筛选出对P13KP85α蛋白抑制效率最高的shRNA干扰片段.然后通过PI标记法和AnnexinV—FITC标记法分别检测干扰后SW480细胞周期和细胞凋亡情况。结果转染shRNA/324后.SW480细胞P13KP85α蛋白降低最为显著.抑制率为90%。选择该干扰片段进行后续实验。干扰组与对照组SW480细胞的G1期细胞数量分别占(62.4±2.7)%和(51.2±3.5)%;S期细胞数量占(23.9±1.7)%和(34.1±3.4)%;氟尿嘧啶所诱导的细胞凋亡率为(11.1±3.7)%和(1.4±0.6)%;上述差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论P13KP85α蛋白表达下降可引起结直肠癌SW480细胞周期阻滞,细胞凋亡增加:PI3KP85α可能成为结直肠癌基因治疗的新靶点。