简介：目的：研究肝细胞X受体α（liverXreceptorα,LXRα）基因对HepG2肝细胞胆固醇代谢相关基因表达的调控作用。方法：将特异性LXRα小片段干扰RNA（siRNA）经脂质体Lipofectamine2000介导转染人HepG2肝细胞,同时行HepG2肝细胞LXRα的激动（T0901317）实验,采用实时定量PCR方法分别测定干扰和激动前后的LXRα以及胆固醇代谢相关基因ATP结合盒（ABC）G5、ABCG8、ABCA1mRNA的表达。结果：LXRαsiRNA干扰24h后,HepG2实验组LXRαmRNA相对表达量显著低于阴性对照组（P〈0.01）,LXRαmRNA表达抑制率为86.06%。实验组ABCG5、ABCG8和ABCA1mRNA表达水平均较阴性对照组有下降趋势（P〉0.05）。HepG2加入激动剂（T0901317）48h后,实验组ABCG8和ABCA1基因表达均显著升高（P〈0.05）,但ABCG5基因表达仅有升高趋势（P〉0.05）。结论：RNA干扰使HepG2肝细胞LXRα表达受抑制,继而有使靶基因ABCG5、ABCG8、ABCA1表达降低趋势;人工合成配体T0901317与LXRα结合,使其活性增加,上调了ABCG8、ABCA1和ABCG5mRNA的表达。提示LXRα可调控HepG2肝细胞的胆固醇代谢基因。

简介：目的观察血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）在分化型甲状腺癌（differentiatedthyroidcarcinoma，DTC）患者手术前后及复发时血清中的表达及其与血清甲状腺球蛋白（thyroglobulin，Tg）浓度之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测30例OTC（术后肺转移7例、局部复发23例）在术前、术后及复发时血清VEGF（serumVEGF，sVEGF）的水平及化学发光法检测血清Tg及TgA的浓度，并与30例正常对照组比较。结果肺转移组及局部复发组在手术前sVEGF比较差异无统计学意义（t=0．373，P〉0．05），与对照组比较差异有统计学意义（t值分别为8．597、14．140，P均〈0．05）；肺转移组及局部复发组在术后sVEGF明显降低，与术前比较差异有统计学意义（t值分别为5．977、11．500，P均〈0．05）；术后2组sVEGF与对照组比较差异均无统计学意义（t值分别为1．593、1．525，P均〉0．05）；肺转移组及局部复发组在复发前后sVEGF比较差异有统计学意义（t值分别7．387、12．160，P均〈0．05），复发后肺转移组sVEGF较局部复发组明显增高，差异亦有统计学意义（t=4．167，P〈0．05）。2组血清瞻浓度与sVEGF表达成直线正相关（r=0．786，P〈0．01）。结论sVEGF在DTC术前及术后复发患者血清中高表达，可作为评估DTC生物学行为的一项重要指标。

简介：目的探讨甲状腺乳头状癌（papillarythyroidcarcinoma，PTC）中抑癌基因PTEN蛋白和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达及临床意义，为PTC的临床个体化治疗与预后评估提供理论依据。方法2015年1月至2017年1月浙江衢化医院病理科收治并确诊的76例PTC患者。应用免疫组化EnVision两步法测定PTEN和CyclinD1蛋白的表达水平，分析其与明C临床病理学的特征的相关性。结果纳入患者中P1[EN阴性率为73．68％（56／76），与癌旁组织的19．74％（15，76）比较，差异有统计学意义（χ2=44．429，P〈0．05）；PTEN表达下调与病理分期、肿瘤淋巴结转移、性别相关（P〈0．05）。CyclinD1阳性率为76．32％（58／76），与癌旁组织13．16％（10／76）比较，差异有统计学意义（χ2=61．311，P〈0．05）；CyclinD1蛋白表达上调与病理分期、肿瘤淋巴结转移相关（P〈0．05）。结论PTEN蛋白表达下调和CyclinD1蛋白表达上调与PTC病理分期、肿瘤淋巴结转移密切相关；检测胛EN和CyclinD1有助于对PTC患者预后进行早期评估。

简介：目的评估乳腺癌患者Gli1表达的临床应用价值.方法免疫化学法检测乳腺癌、癌旁组织、转移淋巴结组织中Gli1蛋白表达.结果①Glil蛋白在复发转移性乳腺癌组织表达显著增加,在发生复发转移的患者乳腺癌组织中,93.3％为Gli1高表达,没有发生转移的癌组织标本中81.2％高表达;同时发现复发转移组原发癌间质Gli1过表达率为89.3％,而非复发转移组间质Gli1过表达率仅为13.4％,差异有统计学意义（P＜0.001）.②乳腺癌组织Gli1蛋白的表达与乳腺癌的早期复发转移密切相关,Gli1核过表达与无复发生存（relapse-freesurvival,RFS）呈明显相关（P=0.046）.在癌组织Gli1核高表达组乳癌复发率为17.8％,而Gli1低表达组乳癌复发率仅为6.2％（P=0.046）.癌间质Gli1高表达组乳癌复发率为31.2％,而Gli1低表达组乳腺癌复发率为11.1％（P＜0.001）.结论Gli1在乳腺癌原发癌、转移癌组织及癌间质中高表达与乳腺癌复发转移相关.

简介：基因芯片技术是高通量的差异基因表达研究手段。通过杂交后的生物信息学分析有助于全面了解复杂基因和信号转导通路在急性坏死性胰腺炎（ANP）中的作用。因此，利用全基因组表达谱方法分析ANP基因的变化较单个基因的研究具有理论上的优势。李磊等曾报道，腹腔注射雨蛙肽诱导的急性水肿性胰腺炎（AEP）基因表达谱的变化，但尚未见类似临床重症急性胰腺炎（SAP）的ANP模型的胰腺组织基因表达谱的报道。故本实验观察ANP大鼠胰腺组织基因表达谱的变化。

简介：目的检测胰腺癌及癌旁组织中COX-2、VEGF—C的表达与淋巴管密度（LVD），探讨它们之间的关系。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法检测40例胰腺癌及相应癌旁组织和12例远处正常胰腺组织中COX-2、VEGF-C的表达及LVD，分析它们之间的关系，以及与临床病理指标的关系。结果胰腺癌组织COX－2、VEGF—C表达阳性率分别为70．0％（28／40）和67．5％（27／40），显著高于癌旁组织的42．5％（17／40）和35．0％（14／40，P〈0．01），也显著高于正常胰腺的8．3％（1／12）和25．0％（3／12）。癌、癌旁及正常胰腺的LVD分别为4．75±2．77、15．20±4．70和1．67±1．15，以癌旁组织最高（P〈0．01）。癌组织COX．2表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关；VEGF．C的表达与淋巴结转移相关。癌旁组织LVD与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关，并与癌组织COX-2、VEGF-C表达存在一定相关性。结论胰腺癌新生淋巴管主要存在于癌旁，淋巴管的形成可能有COX-2及VEGF—C的参与。

简介：胰腺癌的发生、发展伴随着包括抑癌基因DPCA基因（编码的蛋白为Smad4）在内的许多基因改变，也伴随着肿瘤血管的不断生长。本实验应用免疫组化方法分别检测胰腺癌组织中的Smad4、VEGF的表达，并计数微血管密度（MVD），以了解三者的关系。

简介：目的探讨胰腺癌组蛋白去乙酰化酶1（histonedeacetylase1，HDAC1）表达的临床意义。方法收集30例胰腺癌和相应癌旁组织，应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测HDAC1的表达，并分析胰腺癌HDAC1表达与临床病理参数的关系。结果胰腺癌HDAC1mRNA表达指数为2．60（0．42—12．81），癌旁组织为1．02（0．19—3．58），两组表达有显著差异（P=0．001）。胰腺癌HDAC1蛋白表达阳性细胞率为（56±26）％，癌旁组织为（6±6）％，相差显著（P=0．000）。以阳性细胞率平均值56％为界，高表达（≥56％）18例，低表达（〈56％）12例。胰腺癌HDAC1高表达和肿瘤TNM分期、淋巴结转移相关。结论胰腺癌HDAC1高表达提示肿瘤可能已属晚期，预后不良。

简介：越来越多的研究表明，IKB激酶（inhibitkappaBkinase，IKK）的表达异常在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用。中药柴胡具有明显的抗肿瘤作用，但是其具体作用机制不清。因此，本研究观察柴胡主要药理成分——柴胡皂苷d（Saikosaponind，SSd）对人胰腺癌细胞IKK-β表达和凋亡的影响，为胰腺癌的治疗提供新思路。

简介：目的：评价白介素17E（IL-17E）对过敏性哮喘患者嗜酸粒细胞的作用。方法：以流式细胞检测的方法检测14例过敏性哮喘患者、15例过敏性非哮喘患者、14名无过敏正常人嗜酸粒细胞IL-17E及受体的表达,以酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆IL-17E的水平,并比较了不同组别间的差异。结果：过敏性哮喘患者血浆IL-17E水平[145（64~290）ng/L]显著高于无过敏正常人群[21（0~116）ng/L]（P=0.012）。血浆IL-17E水平与第1秒用力呼气容积（FEV_1）占预计值百分比（FEV_1%）呈显著负相关（r=-0.443,P=0.003）。嗜酸粒细胞表面IL-17E特异性受体IL-17RB的表达在过敏性哮喘患者中[43.08%（33.96%~59.98%）]显著高于过敏性非哮喘患者[11.98%（6.33%~27.11%）]（P=0.002）和无过敏正常人群[17.70%（10.97%~38.9%）]（P=0.01）,IL-17RA的表达也在过敏性哮喘患者中[97.94%（94.25%~98.74%）]显著高于过敏性非哮喘者[86.60%（27.48%~97.64%）]（P=0.036）和无过敏正常人群[93.24%（42.38%~97.36%）]（P=0.027）。嗜酸粒细胞表面IL-17RB的表达与IL-17RA的表达相关（r=0.809,P=0.001）。过敏性哮喘患者血浆IL-17E水平为145（64~290）ng/L,显著高于无过敏正常人群[21（0~116）ng/L]（P=0.012）,但与过敏性非哮喘者[80（42~156）ng/L]比较无显著差异（P=0.275）。结论：过敏性哮喘患者血浆IL-17E水平、嗜酸粒细胞表达其受体IL-17RA和IL-17RB增高,提示IL-17E在过敏性炎症中嗜酸粒细胞的活化中发挥作用。

简介：目的探讨Pin1和Ki67的表达与胃肠间质瘤（GIST）临床病理特征的关系。方法收集烟台毓璜顶医院2013年1月至2015年5月间手术切除的40例GIST标本．采用免疫组化技术检测Pin1和Ki67的表达。结果40例GIST标本中Pin1和Ki67的阳性率分别为80％（32／40）和32．5％（13／40）。Pin1的表达程度与GIST的危险度、肿瘤部位、肿瘤大小、核分裂象相关（P〈0．05）。Ki67的表达程度与GIST的危险度、肿瘤部位、肿瘤大小、核分裂象、肿瘤坏死相关（P〈0．05）。Pin1的表达与Ki67的表达呈正相关（r=0．371，P〈0．05）。结论Pin1、Ki67可作为评价GIST恶性程度的潜在指标。Pin1对于GIST可能是一个很有潜力的预后指标和治疗靶点。

简介：目的检测胰腺癌组织中甲基转移酶3B（DNMT3B）基因表达，分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。方法应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测42例胰腺癌组织及相应癌旁组织、10例正常胰腺组织中DNMT3BmRNA和蛋白表达。结果胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织DNMT3BmRNA表达量分别为9．4±5．9、1．02±0．71和0，相差非常显著（P〈0．05）；DNMT3B蛋白表达阳性率分别为83．3％、14．3％和10．0％，相差也非常显著（P〈0．01）。DNMT3BmRNA表达与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05或P〈0．01）；DNMT3B蛋白表达与肿瘤的部位、淋巴结转移有关（P〈0．01或P〈0．05）；DNMT3BmRNA和蛋白表达均与年龄、性别、神经浸润、肿瘤大小、血CEA和CA19—9浓度无关。结论胰腺癌DNMT3BmRNA和蛋白高表达提示胰腺癌已发生淋巴结转移，预后较差。

简介：利用逆转录聚合酶链式反应的方法于培养人脐静脉血管内皮细胞中检测到α、β/δ和γ四类过氧化体增殖物激活型受体(PPARs)mRNA水平的表达,并且显示PPARs激活剂一不饱和脂肪酸、前列腺素J2和非PPARs激活剂-饱和脂肪酸对三类PPARsmRNA水平的表达均无影响.

简介：目的应用小分子干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）干扰KAI1基因在人胰腺癌T3细胞系的表达，为基因治疗胰腺癌打下基础。方法针对KAI1基因CD82片段序列设计A、B、C、D4个siRNA靶序列，构建针对KAI1基因（CD82）含siRNA片段的慢病毒载体。以脂质体2000转染T3细胞，测定病毒滴度。以空载体、含不同靶序列siRNAd1载体的病毒感染T3细胞（MOI=5），采用实时PCR方法检测CD82mRNA的表达。结果正常对照组、空载体对照组、A靶序列组、B靶序列组、C靶序列组和D靶序列组CD82mRNA表达量分别为1．398±0．242、1．311±0．048、0．664±0．093、0．345±0．032、0．641±0．049和0．147±0．049，各靶序列组的表达量明显低于空载体对照组（P〈0．01）。结论府用RNAi可有效抑制r13细胞KAI1基因CD82片段的表达。

简介：目的构建人神经元正五聚蛋白2（NPTX2）真核表达载体，转染人胰腺癌细胞PANC1，建立稳定转染的细胞系。方法通过双酶切的方法获得人NPTX2全长cDNA，利用NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点将其插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋），经酶切和测序验证后，用脂质体转染法转染PANC1细胞，通过G418筛选，建立稳定转染的PANC1细胞，用实时定量PCR方法筛选NPTX2mRNA高表达克隆。结果成功构建了pcDNA3．1（＋）-NPTX2真核表达载体，并建立了稳定转染的PANC1细胞，成功表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染PANC1细胞系的建立为进一步研究NPTX2基因在胰腺癌细胞的作用奠定了良好的基础。

简介：目的观察过氧化物酶增殖物激活受体γ（peroxisomeproliferator—activatedreceptors，PPARγ）激动剂吡格列酮对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠PPARγmRNA表达的影响。方法54只SD大鼠按完全随机法分成假手术组、ANP组、吡格列酮组。采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管内注射建立ANP模型，于造模后3、6、12h检测血清淀粉酶含量，观察胰腺病理学改变，并采用RT—PCR法检测胰腺组织PPARγmRNA的表达。结果ANP组6h点的血清淀粉酶及胰腺组织病理学评分分别为（7171±1636）U／L和13．00±2．36，均较假手术组的（523±166）U／L和1．67±2．34显著增高（P〈0．01），而PPARγmRNA在两组中表达均较弱，无显著差异（0．18±0．05对0．22±0．03，P〉0．05）；吡格列酮组6h的血清淀粉酶水平、胰腺病理学评分分别为（4504±1901）U／L和9．00±0．89，均较ANP组明显下降（P〈0．05），PPARγ,mRNA表达较ANP组增强（0．56±0．05对0．18±0．05，P〈0．05）。结论吡格列酮对ANP大鼠的保护作用可能与上调PPARγ基因的表达密切相关。

简介：目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对胰腺癌转移、预后的影响。方法收集74例胰腺癌组织和6例正常胰腺组织、4例CP组织、6例癌旁正常胰腺组织，采用免疫组化方法检测VEGF的表达，分析VEGF表达与胰腺癌病理指标及患者预后的关系。结果胰腺癌组织VEGF表达率为71．6％（53／74），其他组织为12．5％（2／16），差异显著（P〈0．05）。肿瘤组织VEGF阳性表达与淋巴结转移、神经浸润明显相关（P〈0．05或P〈0．01）。Kaplan-Meier方法和log-rank检验显示，VEGF表达、淋巴结转移、神经浸润、肿瘤分期与患者预后相关（P〈0．05或P〈0．01）。多变量COX风险模型分析显示，神经浸润、淋巴结转移与患者预后有直接相关性，而VEGF表达不是直接相关因素。结论VEGF可以作为判断胰腺癌转移与预后的指标，有一定临床价值。

简介：目的了解Akt和磷酸化Akt1（p-Akt1）蛋白在胰腺癌组织中的表达情况,探讨其临床意义.方法应用免疫组织化学法检测74例胰腺癌组织、10例正常胰腺组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达,并分析其与临床病理学特征及预后的关系.结果Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为87.8%和83.8%,而正常胰腺组织均阴性表达,相差非常显著（P〈0.05）.癌组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达呈正相关性（r=0.274,P=0.018）.Akt和p-Akt1蛋白表达与年龄、性别、肿瘤生长部位、肿瘤大小、病理学分级、淋巴结转移、临床分期及神经浸润均无显著相关性（P〉0.05）,但p-Akt1蛋白高表达与病理学T分期及TNM分期相关（P=0.002）.Akt和p-Akt1蛋白高表达者的中位生存期分别为（16.0±5.7）个月和（23.0±5.5）个月,明显高于低表达者的（9.3±0.2）个月和（11.1±1.8）个月（P分别为0.007和0.004）.结论胰腺癌组织中p-Akt1蛋白表达的程度与良性预后有关,检测胰腺癌中p-Akt1蛋白的表达具有一定的临床意义.

简介：目的构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体（aproliferation—inducingligand，APRIL）基因的shRNA慢病毒表达载体。方法应用基因工程技术，筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列，与pGCL—GFP载体连接，构建慢病毒表达载体LV—shAPRIL；将连接产物转化到DH5a感受态细胞，经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定。再用LV—shAPRIL、pHelper1．0、pHdper2．0共转染293T细胞，包装产生慢病毒颗粒。重组慢病毒感染CFPAC1细胞，实时定量PCR和Westernblotting检测CFPAC1细胞APRILmRNA和蛋白的表达。结果PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致，经包装产生的病毒滴度为5×10^7Tu／ml。构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周，APRILmRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73％、70％和71％；APRIL蛋白表达量分别下降了66％、63％和62％（P〈0．05）。而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异（P〉0．05）。结论成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV—shAPRIL。

简介：疼痛是CP最常见且治疗颇棘手的症状，发病机制未明。近年来研究发现，神经源性炎症在CP疼痛中发挥重要作用：CP时神经纤维数目增多，直径增大，神经束膜受损，多种细胞凶了、冲经肽、神经生长因子表达增加，致敏感觉神经传导通路，介导疼痛的形成和维持^[1]。