简介:摘要目的研究两种支原体快速检测方法在病毒载体制品中的适用性和影响因素。方法采用基于PCR技术的两种支原体核酸扩增检测方法,对分别表达Ⅱ型单纯疱疹病毒抗原gD和ICP27的重组仙台病毒载体疫苗(SeV-dF/HSV-2 gD、SeV-dF/HSV-2 ICP27)收获液及纯化液进行支原体检测,探究其特异性和最低检测限,并对多个批次的收获液及纯化液进行测定。结果普通PCR法在对本制品病毒收获液检测时无明显PCR抑制现象,但对病毒纯化液检测时发生明显的PCR抑制,并且未能检出100 CFU/ml限度的口腔支原体和肺炎支原体。实时荧光定量PCR法在对本制品病毒收获液和纯化液的支原体检测中均无PCR抑制发生,且该方法对口腔支原体、肺炎支原体等多种支原体的检测灵敏度可达到10 CFU/ml,其中对口腔和肺炎支原体核酸拷贝数检测灵敏度可达到每毫升50基因组拷贝。结论实时荧光定量PCR法具有更高特异性和灵敏性,适用于作为质量内控方法快速检测病毒载体制品,及时发现支原体的污染,保证制品质量。
简介:摘要目的制备pH敏感脂质体,避免溶酶体对单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A,MPLA)的降解,提高MPLA的利用率。方法以DOPE、CHEMS为载体材料,采用薄膜分散法制备pH敏感脂质体。应用动态光散射仪测定脂质体的粒径及Zeta电位,透射电镜观察不同pH值条件下pH敏感脂质体的外观形态,应用流式细胞术评价THP-1、DC2.4细胞对脂质体的吞噬效果,激光共聚焦显微镜下观察脂质体与溶酶体的共定位情况。以乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)为模式抗原,配伍MPLA pH敏感脂质体免疫BALB/c小鼠,ELISA定量检测血清乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)水平,ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数(spot forming cells, SFCs)。结果制备的pH敏感脂质体的平均粒径为(90.90±1.13) nm,多分散指数(polydispersity index, PDI)为0.076±0.013,Zeta电位为(-27.900±0.666) mV,随着溶液的pH值减小粒径明显增大,呈现不规则形态,具备显著的pH敏感性。THP-1细胞吞噬pH敏感荧光脂质体的吞噬率为10.40%,DC2.4细胞的吞噬率为12.40%,吞噬荧光脂质体的吞噬率分别为1.09%和0.28%。激光共聚焦显微镜观察到pH敏感荧光脂质体被THP-1细胞吞噬后,存在于细胞质中,而荧光脂质体存在于溶酶体中,MPLA pH敏感脂质体与MPLA脂质体比较可以显著提高小鼠细胞免疫应答水平,MPLA pH敏感脂质体组的IFN-γ和IL-2 SFCs水平均显著高于MPLA脂质体组(P<0.01)和无佐剂组(P<0.001)。结论pH敏感脂质体递送系统可以提高MPLA的利用率,使MPLA更好地发挥佐剂作用。
简介:摘要目的原核表达人腺病毒(HAdV)7型DNA结合蛋白(DBP),制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗体效价;使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体,表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%,间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000,Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性,间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%(19/38)和63.2%(24/38)。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体,获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。
简介:本文用隔室模型分别来描述药物在体外和体内的过程,并建立了药物在体内,外的动力学方程。通过求算方程中的体内,外溶出速度参数Rin和Rout来评价药物的体内外相关性,采用模型药物盐酸曲马多的体内外数据,根据建立的动力学方程,用自编程序计算出0,25,100rpm条件下的体外溶出参数Rout的值分别为9.03±2.03×10^-5mL·mg^-2/3·min^-1,1.63±0.90×10^-4mL·mg^-2/3·min^-1,1.80±0.65×10^-4mL·mg^-2/3·min^-1,体内溶出参数Rin的值为6.27±0.52×10^-5mL·mg^-2/3·min^-1。结果表明,在上述三个不同转数的情况下,体外溶出参数Rout比体内溶出参数Rin稍大。据此,可以通过整体外溶出条件进而更精确地模拟体内溶出情况。
简介:目的在利用正交试验进行脂质体的处方筛选时,采用新的统计方法对试验得到的数据进行分析。方法选择粒径、zeta电位、包封率和物理稳定性作为正交设计的评价指标。运用直观分析、方差分析和逐步多元回归分析三种方法对实验结果进行处理,并通过直观分析和逐步多元回归分析获得最佳制备方案,采用实验比较确证。结果针对四个不同的评价指标,分别采用两种方法直观分析和逐步多元回归优化,得到的处方各不相同。平行进行两组验证试验,结果表明逐步多元回归与传统方法相比具有一定的优势。结论逐步多元回归能够弥补直观分析和方差分析因不连续取点造成的一些不足并能在已有试验的基础上,得到影响因素的交互作用结果,可以在一定程度上减小试验的工作量。
简介:摘要目的探讨放射介入病区通过品管圈工具的应用,制定出提高患者介入术后穿刺肢体制动依从性最为相关的改进护理措施和标准流程,并组织实施,最终使介入术后患者穿刺肢体制动依从性提高。方法2016年9月成立品管圈活动小组,将2016年10月符合调查条件的20例介入术后患者,设为品管圈改善前期;将2017年1月符合调查条件的20例介入术后患者,设为品管圈改善后的改善期,并与品管圈改善前期比较。结果实施品管圈活动后,患者介入术后穿刺肢体自行活动由改善前期的平均13.2次/人降至改善后的平均8.9次/人,目标达标率97.7%,进步率32.57%。结论应用品管圈护理模式能提高患者介入术后穿刺肢体制动依从性,对患者术后护理、住院满意度加强了提高,促进护理质量的持续改进。
简介:摘要目的讨论下颌局部义齿唇侧加强体制作防止基托断裂,用来治疗缺失义齿的修复,并对所有病例进行总结分析,并提出采用加强体制作在预防义齿基托断裂治疗中的合理性和可行性。方法采用回顾和跟踪方式对临床中86例义齿基本断裂,采用加强体制作进行治疗和预防。结果2005年8月我们对86例义齿基托断裂患者采用加强体制作,重点在唇侧加固,克服了过去由于修复义齿后患者经常出现基托断裂现象,避免了患者反复治牙和修复而带来的痛苦和苦恼。本组86例基托断裂患者,男患者54例,女患者32例,年龄在23-63岁,平均45.5岁,在治疗中仅有3例在修复后3年断裂,成功率96.5%。结论下颌局部义齿唇侧采用加强体制作,预防缺义齿基托断裂,是目前在预防基托断裂最好的方法。它具备了简单易操作、取材方便、搞戴方便、稳固耐用、舒适持久、无痛苦,无毒副作用,费用低深受缺失义齿患者的接受。
简介:摘要目的了解盐业体制改革3年后,贵州省市场食盐销售情况及盐碘含量。方法2020年8 - 10月,在贵州省9个市(州),每个市(州)选择2个县(市、区),每个县(市、区)选择1个城区和1个乡镇,在城区抽取1家大型超市和1个农贸市场,乡镇抽取1家小型超市或便利店,查看销售食盐的品种、产地、包装上碘含量标识,并采集不同品牌食盐同时送省、县级疾病预防控制中心盐碘实验室测定其碘含量并进行分析。结果共调查18家大型超市和18个农贸市场、18个乡镇小超市或便利店,采集23个品牌、3大种类、产地来自11个省份的食盐70份。其中包装上碘含量标识为21 ~ 39 mg/kg的有56份,省级检测其碘含量范围为19.23 ~ 37.41 mg/kg(其中有2份低于21.0 mg/kg),中位数为25.75 mg/kg;包装上标识两种碘含量(18 ~ 33、21 ~ 39 mg/kg)的有12份,省级检测盐碘范围为23.52 ~ 32.90 mg/kg,中位数为26.55 mg/kg;1份标识为18 ~ 33 mg/kg,省级检测碘含量为25.20 mg/kg;1份标识为未加碘食盐,其碘含量未检出。根据实际检测值,有68份销售食盐的碘含量在包装标识范围内,占总份数的97.14%。以省级检测结果为标准,省、县级实验室检测结果相对偏差绝对值范围为0 ~ 27.45%,平均偏差为7.65%,符合率为91.43%(66/70)。结论盐业体制改革3年后,贵州省市场销售食盐跨省经营多,品种齐全,97%以上的抽检样在贵州省执行的食盐碘含量标准范围内。
简介:摘要目的制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白的广谱抗体FHA3,并对其进行鉴定。方法依据单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)序列信息,PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列,连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ,构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合,且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性,在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞,在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。