简介：摘要目的体外研究mTOR抑制剂依维莫司（Everolimus，RAD001）对人前列腺癌PC-3细胞株增殖的改变，并探讨其可能的作用机制。方法体外采用细胞培养技术培养人前列腺癌PC-3细胞株，MTT法检测依维莫司1nmol/L对PC-3细胞株增殖的变化；流式细胞分析技术（FCM）检测维莫司对PC-3细胞株细胞周期的变化；Westernblot检测依维莫司干预PC-3细胞株后，p-4E-BP1和p-P70-S6K表达情况的改变。采用SPSS13.0统计软件对实验所得数据分析，P＜0.05有统计学差异。结果MTT结果显示，依维莫司可抑制PC-3细胞株的增殖，且随着药物干预时间的延长，抑制率逐步增大（P<0.01）；FCM结果显示，随着药物干预时间的延长，G0/G1期的细胞百分比逐步升高，S、G2/M期的细胞百分比逐步降低，使绝大部分PC-3细胞被中断在细胞周期的G0/G1期（P＜0.01）；Westernblot结果显示，随着药物干预时间的延长，p-4E-BP1和p-P70-S6K的表达逐步被抑制（P<0.01）。结论mTOR抑制剂依维莫司能够抑制人前列腺癌PC-3细胞株的增殖，其机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号传导通路中的mTOR被抑制，继而抑制了其下游的翻译抑制因子eIF-4E结合蛋白1（4E-BP1）和核糖体蛋白P70-S6K的磷酸化有关。

简介：目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL）能够诱导人前列腺癌细胞株PC-3细胞凋亡而不损伤正常细胞。部分PC-3细胞能够对TRAIL产生抵抗作用,本研究对其发生发展的分子机制进行进一步探讨和阐述。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组（仅加培养基）和实验组（不同浓度滴度的TRAIL处理）,作用时间24-72小时。MTT法检测细胞抑制率,筛选出抵抗TRAIL治疗的PC-3细胞,Q-PCR检测Fas相关死亡域样白介素1B转换酶抑制蛋白（FLICEinhibitoryprotein,FLIP）、死亡受体4（deathreceptor,DR4）、DR5、Fas相关死亡域（Fas-associateddeathdomain,FADD）和caspase-8基因表达情况。结果TRAIL对PC-3细胞具有一定增殖抑制作用,细胞平均存活率随着TRAIL作用时间延长而减少;同时与TRAIL浓度有关,在200ng/ml的TRAIL时,对PC-3细胞的增殖抑制作用较强。Q-PCR检测结果显示TRAIL作用24小时的PC-3细胞较对照组的FLIP、DR4、DR5、FADD和caspase-8基因的表达降低;随着TRAIL作用时间延长至72小时,DR4、DR5、FADD和caspase-8基因的表达下降,而FLIP表达上升。结论体外实验TRAIL对于PC-3治疗具有一定效果,和TRAIL浓度作用时间有关,在TRAIL作用一定时间内,随着作用时间延长,细胞增殖抑制作用越强。TRAIL对PC-3抑制作用与药物浓度有一定关系,在200ng/ml时对PC-3细胞抑制生长率最强。PC3-TR的DR4、DR5、FADD和caspase-8及FLIP在TRAIL短时间治疗内表达下降,而在长时间治疗时DR4、DR5、FADD和caspase-8表达下降,FLIP表达上升。

简介：目的观察鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株的影响。方法：体外培养人前列腺癌PC-3细胞，加入0μg/ml、2．5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的鞣花酸作用于PC-3细胞，分别作用12小时、24小时和48小时后，应用MTr法测定各浓度组鞣花酸对PC-3细胞的生长抑制作用。应用流式细胞仪检测鞣花酸作用48小时后，PC-3细胞的周期时相变化及凋亡情况。应用免疫细胞化学检测10μg/ml鞣花酸作用24小时后，实验组与对照组细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果：鞣花酸明显抑制PC-3细胞的生长，抑制效应呈时间依赖型和浓度依赖型，与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。应用流式细胞仪检测结果显示，鞣花酸可将PC-3细胞阻滞于G1／S期，并诱导PC-3细胞凋亡。免疫细胞化学结果显示实验组Ctmpase-3蛋白表达明显升高。结论：鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。

简介：目的：研究鱿鱼墨多肽酸法提取工艺及不同浓度鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：以料液比、加酸量、酸解时间和酸解温度为因素．以酸解液的氨基氮含量为指标．通过正交试验确定提取鱿鱼墨多肽的酸解条件。采用CCK-8法检测其对DU-145和PC-3的生长抑制作用。采用AnnexinV—FITC／PI双标记流式细胞术检测和A0厄B双染法，观察鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡情况。结果：酸法提取鱿鱼墨多肽最佳组合为0．02mol／L盐酸、酸提料液比1：1、酸解时间2h、酸解温度35℃：鱿鱼墨多肽对DU-145和PC-3细胞有增殖抑制作用，能诱导DU-145和PC-3细胞凋亡。结论：鱿鱼墨多肽能抑制DU-145和PC-3细胞增殖，并诱导其细胞凋亡。

简介：摘要目的检测前列腺癌细胞株PC3中hTERT/PSA基因转录水平和蛋白表达水平。方法分三组采用荧光定量PCR及蛋白免疫印迹(Westernblot)方法检测正常前列腺组织及前列腺癌PC3细胞中基因和蛋白表达。结果荧光定量PCR及Wseternbolt检测前列腺癌PC3细胞较正常前列腺组织表达升高明显。结论hTERT/PSA在在人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3中表达升高，在靶向调控中起重要作用。

简介：目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）的小片段发夹状RNA（shRNA）表达质粒，研究shRNA表达质粒沉默GnT-V基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-V基因的小于扰RNA（siRNA）靶序列，构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞，通过G418筛选，建立稳定表达GnT-V基因的细胞株，采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-VmRNA和蛋白的表达，并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-VshRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建了GnT-VshRNA表达质粒，且该质粒明显下调GnT-V的表达；PC-3细胞GnT-V／1079的tuRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76．5％和67．0％，对PC3细胞呈明显抑制效应；CcK-8增殖实验显示，与对照组相比，PC-3GnT-V／1079的增殖受到明显抑制（P〈0．01），以48h为著；流式细胞仪检测结果表明，PC-3GnT-V／1079的凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论shRNAGnT-V能显著降低GnT-V基因的表达水平，从而有效抑制PC-3细胞增殖。并促进细胞凋亡，该GnT-V的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。

简介：目的建立肝癌耐药细胞株，并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株，并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌于细胞相关细胞学特性进行检测，用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数；单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、“球囊”细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似，呈上皮样生长方式，但其中梭状细胞略多，耐药倍数为292倍；生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞，且倍增时间增加；耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、“球囊”细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株，但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。

简介：摘要目的流行病学调查认为Omega-3多不饱和脂肪酸（Omega-3 PUFA）与大肠癌的发病率呈负相关，但具体机制仍不明确。本文研究Omega-3 PUFA抑制大肠癌转移的差异基因并通过实时PCR验证。方法采用MTT法检测Omega-3 PUFA对大肠癌细胞株活力的影响，确定最佳浓度及时间，采用Illumina公司开发的人全基因组表达谱芯片，检测差异基因，运用Real-time PCR验证候选差异基因。结果Omega-3 PUFA抑制HCT116细胞的活力作用，以30 µg/ml及48 h时段最明显，OD值为0.42，抑制率为53.78%；Omega-3 PUFA抑制SW480细胞的活力作用，以30 µg/ml及48 h时段最明显，OD值为0.29，抑制率为71.01%。从实验组和对照组2株大肠癌细胞中交集出61个共同差异基因，结合文献，与转移有关基因只有COL11A2（下调基因），下调倍数为4～5倍。Real-time PCR验证候选差异基因与基因芯片结果一致。结论Omega-3 PUFA抑制大肠癌的转移，与COL11A2基因有关联。

简介：目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的XAF1基因诱导胰腺癌细胞BxPC3凋亡及其可能的作用机制。方法将前期构建的重组腺病毒Ad5／F35-XAF1感染胰腺癌细胞BxPC3。采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹检测法检测感染前后BxPC3细胞XAFlmRNA和蛋白表达的变化；运用Annexin—V／PI和TUNEL法检测细胞的凋亡率；免疫蛋白印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Caspase-8和Bcl-2蛋白的表达。结果Ad5／F35-XAF1感染后，BxPC3细胞的XAFlmRNA和蛋白表达明显增高，与空白组和Ad5／F35-Null对照组比较，差异显著（P〈0．05）；两种方法检测的细胞凋亡率分别为（19．90±3．09）％、（9．29±2．13）％，较A（15／F35-Null组的（6，72±0．76）％、（2．73±0．51）％和空白组的（7．22±1．53）％、（1．56±0．47）％均有显著差异（P〈0．01）；Caspase-3、PARP、Caspase-8蛋白表达显著增强，Bcl-2表达降低。结论Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞BxPC-3能明显诱导细胞的凋亡，其机制可能是激活死亡受体途径和线粒体途径。

简介：目的对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的$180进行了克隆培养，根据克隆细胞的腹水生长特性，从中选出8株克隆，对不同克隆$180细胞的特性进行研究。方法免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布，流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量，扫描电镜观察克隆细胞表面结构，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果其中3株克隆从uJ见腹水之日起，腹水即为血性；1株微显血性；4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构，各具特点，有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量，分别为8．5，9．3，7．9，8．5，8．6，8．3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同，一旦与某抗体反应阳性，则阳性细胞比率均在97％以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞s1H10及S2D9的电泳图谱，S1HIO克隆细胞有33条带，S2D9克隆细胞有30条带。结论8株克隆细胞各具特点。

简介：摘要目的探究微小RNA(miRNA，miR)-143通过调控Kras的表达影响前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移的机制。方法选用购自美国典型培养物保藏中心细胞株PC-3，保持在补充有10%胎牛血清(Hyclone)的F-12培养基(Hyclone)中。细胞在5%CO2和37 ℃的湿润环境下生长。根据实验需求对细胞进行实验分组，随机分为PC-3转染组、PC-3对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒对细胞活力进行测定。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞中miR-143与Kras mRNA表达；通过蛋白质印迹反应检测各组细胞因子CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达情况。组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果RT-qPCR分析各组miR-143 mRA和Kras mRNA表达为：miR-143 mRNA PC-3对照组(1.06±0.02)较PC-3转染组(3.17±0.23)降低；Kras mRNA PC-3对照组(2.75±0.11)较PC-3转染组(1.23±0.03)升高，差异有统计学意义(t＝5.167，P<0.05)。蛋白印迹检测发现CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达PC-3对照组(2.67±0.11、3.18±0.23、2.84±0.26)较PC-3转染组(1.15±0.03、1.26±0.14、1.18±0.15)升高，差异有统计学意义(t＝4.862，P<0.05)。细胞活力检测发现PC-3对照组(1.62±0.14)较PC-3转染组(0.58±0.02)细胞活力值升高，差异有统计学意义(t＝4.154，P<0.05)。结论miR-143可通过抑制Kras的基因表达来控制前列腺PC-3的增殖及迁移状况，miR-143的高表达可有效抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。

简介：摘要目的探讨姜黄素对前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤的作用机制。方法通过裸鼠皮下接种前列腺癌PC-3细胞建立人前列腺癌雄激素非依赖性裸鼠移植瘤模型，成瘤后随机分为2组，每组6只。姜黄素组腹腔注射姜黄素50mg/kg，每天1次，共4w；对照组腹腔注射等体积的含6%(体积分数)聚乙二醇和含6%(体积分数)无水乙醇的水溶液。取肿瘤称重，并对瘤组织进行组织病理学检查，免疫组化及westernblotting检测FASN、Bax蛋白的表达变化。结果姜黄素可明显抑制前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤生长，姜黄素使肿瘤组织中脂肪酸合成酶FASN的表达水平降低，而使Bax的表达水平升高。结论姜黄素可能通过下调FASN及上调Bax的表达抑制前列腺癌PC-3移植瘤的生长。

简介：目的研究选择性环氧合酶（cyclooxygenase，COX）-2抑制剂尼美舒利和非COX抑制剂扑热息痛，对人卵巢癌细胞系SKOV3生长作用的影响。方法利用免疫组化法检测SKOV3细胞系中COX-2表达，以及两种药物对Ki-67在SKOV3细胞中表达的影响；透射电镜观察两种药物作用后，细胞形态变化及凋亡情况；流式细胞术检测两种药物作用后，对SKOV3细胞周期的影响。结果COX-2在SKOV3细胞中表达呈阳性，尼美舒利作用后的SKOV3细胞中，可发现Ki-67表达明显减少，扑热息痛对Ki-67表达无影响；透射电镜观察到细胞中凋亡小体的形成；流式细胞术发现，尼美舒利使SKOV3细胞停滞在G0／G1期，扑热息痛对细胞周期改变无影响。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利，可以作为卵巢癌的预防及治疗应用于临床。

简介：目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1，应用RT-PCR、Real-timePCR、Westemblot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞GnT-VmRNA和蛋白质表达的水平。结果检测显示3株胃癌细胞（BGC823、SGC7901、MKN45）均表达CmT-VmRNA，其中BGC823、SGC7901呈高表达，MKN45则低表达GnT-V（P〈0．05）。各细胞相对正常对照组GnT-V的相对表达倍数分别为18．25，13．36，9．25。Westernblot结果显示3株胃癌细胞均不同程度的GnT-V蛋白表达，而正常对照组不表达GnT-V蛋白。结论胃癌细胞不同程度表达GnT-V，各细胞中以BGC823表达量最高，SGC7901表达量居中，MKN45呈低表达，提示GnT-V可能对于胃癌的发生发展有一定的影响。

简介：目的:建立高转移肝癌细胞株，研究其肿瘤干细胞生物学特征,为靶向人肝癌干细胞治疗提供有价值的细胞模型。方法:肝癌细胞系Bel7402接种裸鼠皮下，成瘤后，取小鼠肺部转移灶，通过机械分离法，获取肺部肝转移细胞，体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠，获得稳定肺转移肝癌细胞株Bel7402-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定Be17402-V13中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术分析亲本Bel7402和Bel7402-V13中肿瘤干细胞标志物ESA的表达情况，分选Bel7402和Bel7402-V13中ESA+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移Bel7402-V13细胞株,Bel7402-V13细胞无血清悬浮培养7d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。与Bel7402中ESA+细胞相比，流式分析显示干细胞标志物[3人比例高转移丑<；17402-V13显著提高5.67倍（17.6±0.4￥33.1±1.5)。3(；17402-V13中ESA+细胞具有更强的自我更新能力[成球率:（94.8±7.5)%vs(52.3±6.9)%，P<0.01]，侵袭能力提高1.51倍（397.7±79.4v262.0±40.1，P<0.01)，耐药能力也显著增强（IC5。：0.286v0.196，P<0.01)，ESA+细胞Bel7402-V13在裸鼠皮下接种2xl02个细胞3月即可致瘤（3/6)，而接种2xl02个ESA+细胞Bel7402细胞3月才能致瘤（1/6)。结论:获得高转移肝癌细胞株Be17402-V13，伴随ESA+细胞增加，其体内外功能显著增强，为肝癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。

简介：目的观察茶多酚对人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)杀伤肿瘤细胞活性的影响和诱导人胃癌细胞株(SGC-7901)凋亡和死亡的作用.方法在体外用不同浓度的茶多酚与人CIK细胞和SGC-7901细胞株共同作用,然后测定人CIK细胞杀瘤活性和对肿瘤细胞的作用.用不同浓度的茶多酚分别与培养的SGC-7901细胞株作用1～8小时后,弃含有茶多酚的培养液再继续培养24小时,然后测定其死亡和凋亡数,用CIK细胞作对照组.结果茶多酚浓度400mg·L-1,作用CIK细胞4小时后能明显增强CIK细胞的杀伤肿瘤细胞活性,与未诱导组和其它浓度组相比P＜0.01;CIK细胞对经茶多酚处理后的SGC-7901细胞株杀伤活性也明显高于对照组P＜0.01.各种浓度的茶多酚分别与CIK和SGC-7901细胞作用1～8小时,弃诱导液再继续培养24小时后,均能诱导其死亡和凋亡,在茶多酚浓度400mg·L-1、诱导时间4小时时最明显;同一浓度的茶多酚诱导SGC-7901死亡和凋亡率明显高于CIK细胞对照组.结论茶多酚在一定浓度时能明显提高CIK细胞对肿瘤的杀伤活性;经茶多酚处理的SGC-7901细胞株更易被CIK细胞杀伤.用一定的方式在一定浓度和时间内茶多酚能诱导SGC-7901死亡和凋亡,有效浓度内对人CIK细胞无细胞毒性.

简介：摘要目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-20a对前列腺癌细胞间通讯连接(GJIC)、侵袭和转移能力的影响及其机制。方法构建CAFs来源近红外荧光蛋白(IRFPs)标记外泌体，以不同浓度(0、10、100、200 mg/L)与PC-3细胞共培养。蛋白质印迹法检测PC-3细胞中CX43蛋白的相对表达水平；荧光漂白恢复技术测定PC-3细胞间缝隙连接功能；Transwell小室侵袭和迁移实验检测PC-3侵袭能力。构建高表达和低表达miR-20a的CAFs，分别与PC-3细胞共培养，检测缝隙链接蛋白43(Connexin 43, CX43)表达、细胞缝隙连接功能、细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证PC-3细胞中miR-20a与CX43基因是否直接结合。用Student’t检验分析组间差异。结果PC-3细胞的CX43表达水平及细胞缝隙连接功能均随外泌体浓度增加而降低(0.715±0.058、0.544±0.039、0.313±0.028和0.196±0.020，F＝19.031，P<0.05)，差异有统计学意义。Transwell小室检测结果表明，CAFs来源外泌体促进PC-3细胞迁移[各组每视野穿膜细胞数分别为(176.0±9.2)、(485.0±12.8)、(159.5±9.7)和(198.0±10.5)个，F＝11.475，P<0.01]和侵袭[各组每视野穿膜细胞数分别为(150.0±8.4)、(443.0±21.7)、(182.0±11.2)和(153.5.0±10.1)个，F＝16.306，P<0.01]，差异有统计学意义；增强细胞缝隙连接能抑制此效应(F＝14.052，P<0.01；F＝14.804，P<0.01)。高表达miR-20a组的PC-3细胞的CX43表达水平(0.126±0.062比0.834±0.103，t＝9.430，P<0.05)、荧光恢复率[(25.02±7.85)%比(46.65±6.98)%，t＝5.782，P<0.05]均显著低于低表达miR-20a组，但细胞的迁移[(502.5±18.6)个比(128.5.0±9.4)个，t＝9.120，P<0.05]和侵袭能力(458.0±16.8比194.5±9.2，t＝6.286，P<0.05)均显著高于表达miR-20a组，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验结果显示，野生型CX43的PC-3细胞中，转染miR-20a的细胞荧光活性显著低于miR-NC组(0.46±0.08比0.99±0.14，t＝10.208，P<0.05)，差异有统计学意义；而突变型CX43的PC-3细胞中，miR-20a组与miR-NC组细胞荧光活性差异无统计学意义(0.94±0.06比0.97±0.08，t＝0.142，P>0.05)。结论CAFs来源外泌体miR-20a通过直接作用CX43基因，下调PC-3细胞CX43的表达，从而显著降低细胞间通讯连接功能，增强前列腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力。

简介：目的研究三元复合因子Net转染人胰腺癌细胞株BxPC后的表达状态及对原癌基因c—fos表达的影响。方法采用脂质体2000将重组人pEGFP—Net质粒和空质粒pEGFP转染人胰腺癌BxPC3细胞株，建立稳定高表达Net的细胞系。应用MTT、流式细胞仪等方法检测胰腺癌细胞的增殖，应用实时定量PCR和Westernblotting检测Net及c—fosmRNA和蛋白的表达。结果BxPC3细胞低表达Net，转染pEGFP-Net后稳定高表达Net，并抑制c-fos的表达。转染pEGFP—Net的细胞生长缓慢，转染后第3、5、7天的抑制率分别为38．8％、55．3％、56．9％，显著高于空质粒转染组的5．1％、12．4％、8．6％（P〈0．05）；G0／G1期细胞占（61．8±5．7）％，显著高于空质粒转染组的（45．1±3．4）％。结论三元复合因子Net能抑制人胰腺癌BxPC3细胞的增殖，其机制可能与抑制c—fos表达有关。

简介：目的探讨PTEN—P13K／AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的调控作用及其机制。方法构建PTEN真核表达载体，转染至胃癌细胞株MKN28中（转染组）；同样方法转染空载体和等量的PBS分别作为阴性对照组和空白对照组，检测对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及对P13K、AKT、Caspase-3、Caspase-9的影响。MTT检测细胞生长曲线，TUNEL染色法检测细胞凋亡，Westernblot检测蛋白的表达。P13K抑制剂LY294002处理未转染PTEN的胃癌细胞株MKN28（处理组）；对照组加入等量的PBS，抑制P13K活性后检测细胞凋亡蛋白及凋亡相关蛋白的表达。组间比较采用t检验，时间依赖性检验采用相关分析方法。结果成功构建PTEN真核表达质粒并转染至胃癌细胞株MKN28中，获得稳定过表达PTEN的细胞模型。MTT检测发现转染组胃癌细胞株MKN28生长明显受到抑制，且呈时间依赖性（r=0．938，P〈0．05）。转染组平均凋亡率达到27．86％±4．78％，明显高于阴性对照组的0．01％±0．01％（t=9．527，P〈0．05）。转染PTEN后，转染组P13K蛋白表达量为0．25±0．03，明显低于空白对照组的0．93±0．16及阴性对照组的0．96±0．15（t=7．235，8．883，尸〈0．05）。转染组活化的AKT（P．AKT）蛋白表达量为0．214-0．03，明显低于空白对照组的0．93±0．13及阴性对照组的0．91±0．12（t=9．347，9．802，P〈0．05）。而转染组凋亡相关蛋白Caspase-3及Caspase-9表达量分别为0．86±0．11和0．87±0．12，明显高于阴性对照组的0．16±0．03和0．18±0．04及空白对照组的0．15±0．02和0．16±0．03（t=10．634，10．999，9．448，9．942，P〈0．05）。抑制P13K活性后，处理组细胞凋亡率为28．60％±4．50％，明显高于对照组的0．12％±0．06％（t=10．961，P〈0．05）。Westernblot检测发现处理组P13K和P—AKT的蛋白表达量分别为0．18±0．02和0．11±0．叭，明显低于对�

简介：摘要目的探讨棕榈酸（PA）是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。方法将小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞分为正常对照组、PA组（1.0 mmol/L）、PA+凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK）组（5 μmol/L）、PA+铁死亡抑制剂（Fer-1）组（5 μmol/L）、PA+坏死抑制剂（Nec-1）组（5 μmol/L），每组设置3个平行组。采用CCK8法检测细胞存活率，电镜观察细胞超微结构改变，FerroOrange试剂盒检测细胞内Fe2+水平，丙二醛（MDA）试剂盒检测MDA水平，流式法检测活性氧（ROS）水平，实时荧光定量PCR法检测凋亡基因半胱氨酸蛋白酶3（caspase3）、坏死基因受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3（RIPK3）、铁死亡相关基因长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、花生四烯酸-15-脂加氧酶（ALOX15）、前列腺素内过氧化物合酶2（Ptgs2）、铁蛋白重链（FTH）、铁蛋白轻链（FTL）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的mRNA表达水平，Western blotting法检测活化型caspase3（cleaved caspase3）、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白表达水平。两组间比较采用t检验。结果与PA组相比，PA+Z-VAD-FMK组、PA+Fer-1组和PA+Nec-1组MIN6的存活率均更高（P<0.01）。PA组MIN6细胞电镜下可见凋亡、坏死、及铁死亡相关的形态学特征。与对照组相比，PA组MIN6细胞内Fe2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更高；caspase3、RIPK3、ACSL4、Ptgs2、ALOX15的mRNA相对表达量均更高，FTH和GPX4的mRNA相对表达量均更低；cleaved caspase3、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更高（均P<0.01）。与PA组相比，PA+Fer-1组Fe2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更低；ACSL4、Ptgs2、ALOX15的mRNA相对表达量均更低，FTH和GPX4的mRNA相对表达量均更高；ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更低（均P<0.01）。结论PA可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。