简介：摘要目的探究猪带绦虫（Ts）14-3-3.3蛋白作为囊虫病疫苗候选分子的潜力。方法选取60只昆明小鼠，体重为18 ~ 22 g，按体重采用随机数字表法分为3组，分别为生理盐水对照组（对照组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗组（疫苗组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗 +佐剂组（疫苗 +佐剂组），每组20只。采用多点皮下注射法，在0周首次免疫后进行2次加强免疫，共免疫3次，每次接种间隔2周。3组在首次免疫后0、2、4、6、8周分别剖杀4只小鼠，摘眼球取血和无菌取脾，分别用于分离血清和制备脾淋巴细胞悬液[处理因素：原液、抗原刺激、刀豆蛋白A（ConA）刺激]。采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清特异性抗体免疫球蛋白（Ig）G、IgG2a、IgG1及IgE水平；采用CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平；采用双抗夹心ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-12、IL-13、IL-10水平。结果疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周IgG、IgG2a、IgG1水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（P均 < 0.05）。组间相同处理因素下，免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平比较，差异均有统计学意义（P均 < 0.05）；疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（P均 < 0.05）。组内不同处理因素下，抗原刺激、ConA刺激时免疫0 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于原液，且ConA刺激时免疫0 ~ 8周上述指标均高于抗原刺激（P均 < 0.05）。结论Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。

简介：

简介：摘要目的探讨组蛋白乙酰转移酶MYST2在胰腺癌细胞的蛋白质表达水平及其对诊断胰腺癌的价值。方法收集2017年12月1日至2020年6月30日于北京协和医院行手术切除并经病理学确诊的54例胰腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织(距离手术切缘>5 cm)。对人胰腺癌细胞系ASPC1和BXPC3进行敲低处理(ASPC1敲低组和BXPC3敲低组)，对CFPAC1和SW1990进行过表达处理(CFPAC1过表达组和SW1990过表达组)，未经处理的为ASPC1、BXPC3、CFPAC1和SW1990空载对照组。采用蛋白质印迹法分别检测不同病理分化程度患者的胰腺癌细胞，人正常胰腺导管上皮细胞系HPDE和人胰腺癌细胞系ASPC1、BXPC3、CFPAC1、SW1990，以及敲低组、过表达组和空载对照组的MYST2蛋白质水平。采用实时无标记动态细胞分析技术，Transwell迁移、侵袭实验和平板集落形成实验比较敲低组、过表达组与空载对照组细胞的增殖活性，迁移、侵袭和集落形成能力。对54例患者的胰腺癌及其癌旁组织进行MYST2免疫组织化学评分，并绘制受试者操作特征曲线分析MYST2不同表达水平对诊断胰腺癌的价值。统计学方法采用独立样本t检验和方差分析。结果54例胰腺癌患者病理切片中，高分化13例，中分化24例，低分化15例，未分化2例，胰腺癌细胞MYST2蛋白质表达水平分别为3.12±1.67、2.87±1.59、2.12±1.03、1.08±0.34，差异有统计学意义(F＝1.241, P<0.05)。4种胰腺癌细胞系ASPC1、BXPC3、CFPAC1、SW1990的MYST2表达水平均高于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE(1.41±0.47、1.40±0.93、1.13±0.62、1.71±0.46比0.82±0.25)，差异均有统计学意义(t＝1.625、1.577、1.319、1.832，P均<0.05)。BXPC3敲低组MYST2水平低于BXPC3空载对照组(0.39±0.12比0.75±0.34)，ASPC1敲低组低于ASPC1空载对照组(0.43±0.22比0.82±0.48)，CFPAC1过表达组高于CFPAC1空载对照组(1.38±0.45比0.82±0.37)，SW1990过表达组高于SW1990空载对照组(1.34±0.65比0.51±0.22)，差异均有统计学意义(t＝1.414、1.378、1.319、1.934，P均<0.05)。ASPC1敲低组细胞增殖较ASPC1空载对照组缓慢，80 h增殖峰值低于空载对照组(1.02±0.77比4.31±2.45)；BXPC3敲低组细胞增殖较BXPC3空载对照组缓慢，80 h增殖峰值低于空载对照组(0.91±0.24比2.84±0.53)；SW1990过表达组胰腺癌细胞增殖较SW1990空载对照组快，80 h增殖峰值高于空载对照组(3.10±0.67比1.04±0.17)；CFPAC1过表达组胰腺癌细胞增殖较CFPAC1空载对照组快，80 h增殖峰值高于空载对照组( 5.45±1.13比1.01±0.29)，差异均有统计学意义(t＝1.427、1.316、1.292、1.501，P均<0.05)。在迁移能力检测中，ASPC1敲低组穿过Transwell小室的细胞少于ASPC1空载对照组(34.08±17.62比118.76±5.31)，BXPC3敲低组少于BXPC3空载对照组(18.62±9.64比57.90±12.67)；SW1990过表达组多于SW1990空载对照组(134.84±24.65比37.82±6.73)，CFPAC1过表达组多于CFPAC1空载对照组(65.79±27.46比11.68±5.13)，差异均有统计学意义(t＝1.475、1.322、1.437、1.219，P均<0.05)。在侵袭能力检测中，ASPC1敲低组穿过Transwell小室的细胞少于ASPC1空载对照组(9.79±5.75比45.76±12.71)，BXPC3敲低组少于BXPC3空载对照组(23.46±11.13比84.92±17.65)，SW1990过表达组多于SW1990空载对照组(156.42±34.50比42.13±22.17)，CFPAC1过表达组多于CFPAC1空载对照组(112.64±47.82比39.09±17.23)，差异均有统计学意义(t＝1.324、1.635、1.423、1.119，P均<0.05)。在集落形成数量方面，ASPC1敲低组少于ASPC1空载对照组(13.15±6.42比86.79±35.17)，BXPC3敲低组少于BXPC3空载对照组(14.93±9.30比52.93±15.76)；SW1990过表达组多于SW1990空载对照组(129.10±57.31比62.42±37.43)，CFPAC1过表达组多于CFPAC1空载对照组(157.98±66.45比74.35±34.69)，差异均有统计学意义(t＝1.148、1.290、1.274、1.462，P均<0.05)。胰腺癌组织MYST2评分高于癌旁胰腺组织[(3.04±2.23)分比(1.32±0.70)分]，差异有统计学意义(t＝3.479，P<0.05)。当MYST免疫组织化学总评分为3分时，曲线下面积最大(0.888，95%可信区间0.827～0.948)，约登指数为0.56。结论MYST2与胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力有关，其高表达可促进胰腺癌发展。

简介：摘要结直肠癌是发生于结肠或直肠的恶性肿瘤，发病率较高。为了提高结直肠癌的预后，需要进一步阐明结直肠癌的发病机制。表观遗传能够直接影响结直肠癌的进展和转移，而组蛋白甲基化是一种重要的组蛋白修饰手段，能够调控下游基因的转录过程。大量研究结果证实组蛋白甲基化对结直肠癌的进展产生影响，相关组蛋白甲基化及去甲基化的抑制剂可作为潜在的结直肠癌治疗药物发挥作用。对结直肠癌及其相关甲基化调控进行综述，总结组蛋白甲基化修饰的类型及其调控，论证组蛋白甲基转移酶与去甲基化酶参与结直肠癌进展调控方式，并总结组蛋白甲基化抑制剂对于治疗结直肠癌的潜在意义，探究相关抑制剂作为结直肠癌治疗药物的可能性。

简介：摘要目的表达和纯化重组人Ⅲ型胶原蛋白（rhCol），并评价其性能。方法构建重组基因工程菌pET30a（+）-1880/pACYCDuet-hy726/BL21（DE3），稳定共表达rhCol和脯氨酰羟化酶。通过大肠杆菌高密度发酵与盐析和柱层析蛋白纯化技术制备并纯化rhCol。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定rhCol的纯度，全自动蛋白质多肽测序仪测定rhCol的N端氨基酸序列，紫外分光光度法测定rhCol中的羟脯氨酸含量，噻唑蓝法评价rhCol的细胞相容性。结果高密度发酵最终菌体湿重约200 g/L，表达量约3 g/L，通过亲和层析获得的rhCol的纯度大于95%。rhCol的羟脯氨酸含量为11.44%，其水溶性及细胞相容性良好。结论本研究制备的rhCol可作为一种优良的生物材料广泛用于皮肤护理及生物医药等领域。

简介：摘要脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发恶性肿瘤。近年来随着表观遗传学的深入研究发现，HOX转录反义RNA(HOTAIR)和组蛋白乙酰化在脑胶质瘤的发生和发展中发挥着关键作用，有望成为脑胶质瘤的治疗靶点。组蛋白乙酰化转移酶和组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过调控组蛋白的乙酰化程度，调控基因转录，在恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。本文针对HOTAIR和组蛋白乙酰化在脑胶质瘤中的研究进展进行综述。

简介：摘要脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发恶性肿瘤。近年来随着表观遗传学的深入研究发现，HOX转录反义RNA(HOTAIR)和组蛋白乙酰化在脑胶质瘤的发生和发展中发挥着关键作用，有望成为脑胶质瘤的治疗靶点。组蛋白乙酰化转移酶和组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过调控组蛋白的乙酰化程度，调控基因转录，在恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。本文针对HOTAIR和组蛋白乙酰化在脑胶质瘤中的研究进展进行综述。

简介：摘要目的探讨组蛋白乙酰转移酶P300在肝癌中的表达及其临床意义。方法收集2013年1月至2017年12月四川绵阳四0四医院普外科收治的100例肝细胞癌患者的手术标本，检测肝癌组织中P300、CD90、甲胎蛋白(AFP)、Ki-67、CD34的表达。同时收集保存于医院实验室的42例肝脏血管瘤标本、56例有中重度肝硬化背景的肝组织标本，检测组织中P300的阳性表达率。分析P300表达与肝癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果P300在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中的阳性表达率逐渐升高，分别为11.9%(5/42)、32.1%(18/56)、57.0%(57/100)，差异具有统计学意义(χ2＝27.192，P<0.001)。肿瘤分级(χ2＝9.337，P＝0.009)、T分期(χ2＝8.794，P＝0.032)、临床TNM分期(χ2＝6.121，P＝0.013)、AFP(χ2＝11.040，P＝0.001)、CD90(χ2＝9.903，P＝0.002)、CD34(χ2＝4.066，P＝0.044)对P300表达有明显影响。Spearman等级相关分析显示，P300的异常表达与AFP(r＝0.335，P＝0.001)、CD90(r＝0.328，P＝0.002)、CD34(r＝0.264，P＝0.047)的表达均呈正相关，但与Ki-67的表达无明显相关性(P>0.05)。生存分析发现，P300阳性表达患者的5年生存率为17.6%，阴性表达患者为62.5%，差异有统计学意义(χ2＝10.596，P<0.001)。Cox多因素分析显示，P300阳性表达(RR＝2.554，95%CI为1.261～4.502，P＝0.009)、CD90阳性表达(RR＝3.574，95%CI为1.021～11.980，P＝0.030)和TNM Ⅱ～Ⅳ期(RR＝0.332，95%CI为0.105～0.596，P＝0.002)是肝癌患者预后不良的独立危险因素。结论P300阳性表达与肝癌的发生密切相关，可作为判断肝癌患者预后不良的独立性因素。

简介：摘要组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)是Ⅱa类去乙酰化酶的一员，特异性分布于骨骼肌、心肌、神经系统、血管系统、骨、软骨及肝脏等组织中，不仅可去乙酰化组蛋白，使染色质凝集，抑制基因转录，还可与多种非组蛋白结合，调节靶蛋白转录活性，在细胞增殖、分化、凋亡、代谢等过程中均发挥了重要作用。近年来研究结果显示HDAC4是调节软骨细胞肥大分化的重要因子，其不仅在软骨生长发育过程中发挥重要作用，与骨关节炎发病过程也密切相关，因此本文对HDAC4调节软骨细胞肥大分化机制的相关研究进行综述的同时，也对其发挥功能的结构基础、调节机制进行了深入分析，这不仅有助于深入了解软骨生长发育过程，也将为骨关节炎的治疗提供新方向。

简介：摘要放射治疗是目前临床上最常用的治疗癌症的手段之一，但其仍存在辐射剂量高、正常组织不良反应大，以及肿瘤细胞的放疗耐受等缺点。因此，寻求安全有效的放疗增敏剂以提高肿瘤细胞对辐射的敏感性一直是放疗研究的热点。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors，HDACIs)是一类表观遗传学修饰剂，除了其固有的抗癌特性外，还能调节肿瘤细胞对电离辐射和紫外线辐射敏感性。本文在查阅文献基础上，重点阐述了HDACIs增强肿瘤细胞辐射敏感性的不同分子机制以及对肿瘤细胞的选择性杀伤作用。

简介：摘要目的探讨组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）2和HDAC 4活性变化对小鼠肺纤维化（PF）的影响。方法博来霉素单次气管给药诱导C57BL/6J雄性小鼠发生PF，建立PF模型。实验动物分3组：博来霉素组（B组，16只）予博来霉素A2生理盐水溶液2.5 μl/g、盐水组（C组，16只）给予生理盐水溶液2.5 μl/g体重和无手术组（N组，16只）。给药后7、14、21 d随机处死、取材。比色法检测肺组织细胞HDAC2、HDAC4活性。HE染色进行肺泡炎、Masson染色肺纤维化评分。对数据进行方差分析、相关性分析，用二元变量相关进行数据间相关性分析。结果整体小鼠肺组织HDAC2活性，B组显著高于N组（2.00±0.40比1.00±0.23，P<0.05）、C组（2.00±0.40比1.48±0.33，P<0.05），给药后14、21 d B组均显著高于N组（2.40±0.28比1.00±0.23，P<0.01，2.23±0.41比1.00±0.23，P<0.01）、C组（2.40±0.28比1.39±0.23，P<0.05，2.23±0.41比1.35±0.42，P<0.05），B组与C组HDAC2活性变化趋势不同。整体小鼠肺组织HDAC4活性，B组与N组、C组差异无统计学意义。气管给药后14 d，B组、C组HDAC4活性均显著高于N组（1.18±0.36比1.00±0.12，P<0.01，1.09±0.33比1.00±0.12，P<0.01），B组与C组HDAC4活性变化趋势大致相同。相关性分析：小鼠肺组织HDAC2活性与肺泡炎（r=0.428，P<0.01）、肺纤维化（r=0.508，P<0.01）病理评分均呈正相关。小鼠肺组织HDAC4活性与肺泡炎（r=0.355，P<0.05）、肺纤维化（r=0.457，P<0.01）病理评分均呈正相关。二元线性回归：HDAC2活性对小鼠PF病变过程作用强于HDAC4活性。结论小鼠发生肺纤维化时，HDAC2和4活性均显著升高，HDAC2活性升高迅速、持久，HDAC4活性波动显著、升高短暂，HDAC2活性变化对肺泡炎、纤维化作用均强于HDAC4。

简介：摘要目的观察组蛋白去甲基化酶JMJD2D在人胃癌细胞系AGS中表达下调后对细胞生物学功能的影响。方法采用小发夹状RNA(small hairoin RNA，shRNA)技术干扰AGS细胞中JMJD2D表达，通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测JMJD2D沉默效果，同时设置对照组；利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测JMJD2D对AGS细胞增殖能力的影响；利用划痕实验Transwell侵袭实验检测JMJD2D对AGS细胞迁移能力的影响；利用流式细胞技术检测JMJD2D对AGS细胞周期和凋亡的影响。组间比较采用单因素方差分析，进一步比较行配对t检验。结果通过shRNA技术成功下调AGS细胞中JMJD2D表达，细胞增殖实验结果显示，在培养24、48、72 h后，JMJD2D shRNA组细胞的增殖水平(0.311±0.012、0.475±0.038、0.813±0.043)明显低于对照组(0.385±0.013、0.558±0.042、0.917±0.035)，差异均有统计学意义(t＝3.960、5.370、7.830，P<0.01)；划痕实验结果表明，划痕24 h后，JMJD2D shRNA组细胞的相对倍数(0.53±0.09)明显低于对照组(0.99±0.03)，差异有统计学意义(t＝4.940，P<0.01)；Transwell迁移实验结果表明，JMJD2D shRNA组迁移到膜下的细胞数[(155.0±10.6)个]明显低于对照组[(312.0±18.3)个]，差异有统计学意义(t＝7.530，P<0.01)；细胞周期检测结果显示，JMJD2D shRNA组细胞阻滞于G1期(t＝4.290，P<0.05)；细胞凋亡试验显示，抑制JMJD2D表达可明显增加AGS细胞凋亡(JMJD2D shRNA组细胞凋亡率18.5%，对照组3.1%)，差异有统计学意义(t＝9.270，P<0.01)。结论下调JMJD2D表达可明显抑制AGS细胞增殖及迁移能力，促进细胞凋亡，提示JMJD2D在胃癌细胞中起着癌基因作用。

简介：摘要融合蛋白(fusion protein，FP)技术是为获得大量标准FP而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法，利用此项技术，可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。FP类药物是利用基因工程技术将不同的基因或基因片段融合在一起，经表达后可以得到由不同的功能蛋白拼合在一起而形成的新型多结构域的人工蛋白。FP技术可以优化蛋白性能甚至产生新功能，是一种极具潜在应用价值与理论意义的方法。文章从FP的构建、表达、纯化、作用、应用及FP类药物等多方面做一综述。

简介：摘要目的观察含有Jumonji结构域的蛋白质2D(JMJD2D)在胃癌组织的表达并探讨其临床意义。方法收集2013年1月至2014年12月期间来自中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)手术治疗并经病理诊断证实的133例胃腺癌标本。采用免疫组织化学法检测133例胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中JMJD2D的表达，应用SPSS-22统计软件分析其临床意义及与预后的关系，采用比例风险回归模型(proportional hazards model，Cox模型)多因素回归分析JMJD2D蛋白表达及其他病理参数对胃癌患者预后的预测价值。结果胃癌组织中JMJD2D的高表达率为75.9%(101/133)，显著高于癌旁正常胃组织(高表达率2.3%，3/133，χ2＝64.821，P<0.01)，差异有统计学意义。肿瘤组织中JMJD2D高表达与患者幽门螺杆菌感染状态(χ2＝22.163，P<0.01)、肿瘤分化程度(χ2＝7.022，P<0.05)、浸润深度(χ2＝5.061，P<0.05)、淋巴结转移状态(χ2＝14.123，P<0.01)、临床TNM分期(χ2＝23.194，P<0.01)显著相关，而与患者性别、肿瘤诊断时年龄、肿瘤部位和大小无相关(χ2＝0.072、1.451、2.562、1.383，P值均>0.05)。普兰-迈耶(Kaplan-Meier)生存分析显示，JMJD2D高表达的胃癌患者与正常/低表达患者中位生存时间分别为34个月和65个月，两者差异有统计学意义(P<0.05)。比例风险回归模型(proportional hazards model，Cox模型)多因素回归分析表明JMJD2D高表达是胃癌患者独立预后因素[危险比(HR)＝2.38，P<0.01]。结论JMJD2D在胃癌组织中高表达，且与胃癌进展及患者预后显著相关。

简介：摘要目的探讨组蛋白去乙酰化酶11(HDAC11)抗乙肝病毒(HBV)的体内效果和毒性。方法选取4~6周龄雄性C57BL/6 (H-2b)小鼠，通过尾静脉高压水注射法建立HBV体内复制模型。采用随机数表法分组方式分为5组：正常对照组，仅给予磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理；模型组，仅注射HBV复制质粒；HDAC11低、中、高剂量组，在注射HBV复制质粒的同时分别给予2.5、5.0、10.0 μg/只小鼠剂量的HDAC11过表达质粒。于注射后第1、4、7、10、14天采集小鼠眼眶静脉血，通过化学发光微粒子免疫检测法分析血清中乙肝表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)的水平；通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分析血清中HBV脱氧核糖核酸(DNA)的水平；通过免疫组织化学染色分析肝组织中核心抗原(HBcAg)的表达水平。采用Student t检验或Mann-Whitney U检验进行统计学分析。结果给药后第1天，HDAC11低、中、高剂量组的HBsAg水平均显著低于模型组[(165.99±50.35)比(238.69±31.99) IU/ml，t＝3.498，P<0.01]，[(89.92±34.55)比(238.69±31.99) IU/ml，t＝8.937，P<0.01]，[(26.56±19.45)比(238.69±31.99) IU/ml，t＝16.027，P<0.01]。给药后第4天，HDAC11中、高剂量组的HBsAg水平仍显著低于模型组[(164.86±67.99)比(242.78±20.42) IU/ml，t＝3.104，P<0.01]，[(70.78±44.76)比(242.78±20.42) IU/ml，t＝9.889，P<0.01]。给药后第1天，HDAC11中、高剂量组的HBeAg水平均显著低于模型组[(4.43±1.62)比(12.05±5.90)，t＝3.523，P<0.01]，[(1.91±1.11)比(12.05±5.90)，t＝4.778，P<0.01]。给药后第4天，HDAC11低、中、高剂量组的HBV DNA水平显著低于模型组[(4.64±2.60)×103比(3.11±1.63)×104 IU/ml，t＝3.197，P<0.05]，[(2.08±1.27)×103比(3.11±1.63)×104 IU/ml，t＝3.541，P<0.05]，[(3.41±2.30)×103比(3.11±1.63)×104 IU/ml，t＝3.354，P<0.05]。肝组织中的HBcAg水平显著降低。给药组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平及动物体重等与对照组无明显差异。结论HDAC11在体内具有显著的抗HBV复制的效果，且毒性较低。

简介：摘要果蝇Zeste基因增强子人类同源物EZH2是多梳抑制复合物2的催化亚基之一，具有组蛋白甲基转移酶的作用，通过甲基化组蛋白3第27位赖氨酸参与对目的基因的负性表观遗传调控。既往研究表明，EZH2在头颈恶性肿瘤组织中高表达，且与肿瘤发生发展、侵袭转移和预后不良密切相关，因此EZH2有望成为治疗头颈恶性肿瘤新的分子靶点。本文就EZH2的结构与功能，EZH2在头颈恶性肿瘤的作用机制做一综述。

简介：摘要目的探讨组蛋白脱乙酰酶6（HDAC6）抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞（HSF）增殖及运动性的影响及其可能的分子机制。方法采用实验研究方法。取对数生长期HSF，按随机数字表法分为阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组。阴性对照组加入含终体积分数0.1%二甲基亚砜的DMEM培养液（以下简称完全培养液），其余3组分别加入含相应终物质的量浓度Tubastatin A的完全培养液。常规培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测细胞增殖活力；在活细胞工作站下观察细胞3 h内运动范围，计算细胞曲线运动速度；采用蛋白质印迹法检测胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达量，并计算p-ERK1/2与ERK1/2比值，以此表示ERK1/2活性。CCK-8法行细胞增殖活力检测样本数为6，其余实验样本数为3。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果培养24 h后，CCK-8法和EdU染色显示，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力均显著下降（P<0.01）。培养24 h后，CCK-8法显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（P<0.05）；EdU染色显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（P<0.05或P<0.01）。观察3 h内，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞运动范围较阴性对照组明显缩小。观察3 h内，阴性对照组细胞曲线运动速度为（0.780±0.028）μm/min，明显快于1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的（0.594±0.023）、（0.469±0.028）、（0.391±0.021）μm/min（P<0.01）；1 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组（P<0.01）；5 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于10 μmol/L Tubastatin A组（P<0.05）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P<0.01）；与1 μmol/L Tubastatin A组比，5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P<0.01）；与5 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P<0.05）。结论HDAC6抑制剂Tubastatin A可能通过抑制ERK1/2活性，从而抑制HSF增殖及运动。

简介：摘要目的初步了解重组人tau441 (P301S)蛋白体外聚集、抗原性及免疫原性等生物学性质。方法原核表达带His标签的tau441 (P301S)重组质粒，镍亲和层析纯化重组蛋白，BCA测定蛋白浓度，SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色确定蛋白的纯度；采用Western blot (WB)和负染透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)鉴定；间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测所得蛋白的抗原性；以重组蛋白免疫小鼠，检测免疫血清特异性抗体滴度来分析其免疫原性。结果所得重组人tau441 (P301S)纯度为70%，WB显示在相对分子质量(Mr.×103)64和更高相对分子质量处有特异性条带。TEM显示，tau441 (P301S)呈絮状团块聚集，团状面积显著大于tau441野生型蛋白(t＝6.439, P＝0.003)；4 ℃孵育9 d后，tau441 (P301S)形成明显的纤维状结构。间接ELISA结果显示，tau441 (P301S)能被tau单抗HT7(1∶80 000)识别；小鼠免疫血清tau特异性抗体滴度达到1∶128 000，且WB显示，免疫后血清识别阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)转基因小鼠脑裂解抽提物。结论重组人tau441 (P301S)蛋白具有体外聚集性增强的特性但其抗原性和免疫原性未改变。

简介：摘要目的通过检测血清抗体滴度和杀菌抗体检测(SBA)评价重组H因子结合蛋白(factor H binding protein，fHBP)的免疫原性。方法选择并合成fHBP序列，连接至pET43.1a质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，表达两个亚家族的重组fHBP蛋白，fHBPA和fHBPB，经过纯化后免疫家兔和小鼠，通过ELISA和SBA试验检测免疫抗血清效价和B群脑膜炎球菌流行菌株的杀菌滴度。结果fHBP免疫兔血清效价均大于2.0×106，免疫小鼠血清效价高于1.0×106。69株流行株SBA试验中fHBP免疫兔血清对41株A亚家族和20株B亚家族均有大于1∶128杀菌滴度，亚家族靶菌之间没有交叉保护作用。fHBPA小鼠血清对A亚家族流行株Nm210902、Nm211009、Nm450522平均滴度为1∶1 024、1∶608、1∶861，对Nm510703、Nm311304、Nm431002流行株的滴度为1∶234、1∶861、1∶430；fHBPB小鼠血清对B亚家族流行株Nm311302、Nm311113和Nm321114的杀菌滴度分别是1∶2 896、1∶1 878和1∶430。而fHBPA和fHBPB混合蛋白质免疫鼠血清Nm210902、Nm510703和Nm311302平均滴度分别1∶876、1∶274、1∶1858，对3株靶菌均存在有效杀菌。结论fHBP免疫抗血清效价均在1.0×106水平以上，对61株B群流行株的杀菌滴度大于1∶128，对69株B群脑膜炎球菌流行株有94.2%的保护效果。

简介：摘要目的探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径（AALP）在百草枯（PQ）诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用。方法以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）作为多巴胺能神经元的体外模型，将细胞分为对照组和PQ染毒组（不同浓度PQ处理）。用不同浓度PQ （0、25、50、100、200和400 μmol/L）处理细胞24 h，100 μmol/L PQ处理细胞不同时间（0、12、24、36、48、60和72 h），CCK-8法检测细胞增殖活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞HDAC6、α-突触核蛋白（α-syn）、动力蛋白中链（Dynein IC1/2）、微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬相关蛋白（Beclin1）、泛素结合蛋白（p62）和溶酶体相关膜蛋白-1（Lamp-1）的表达水平；免疫荧光双标法观察细胞HDAC6、α-syn、Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1及γ-微管蛋白（γ-tubulin）在细胞中的表达及定位。结果PQ呈剂量和时间依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖活性（R=-0.950、-0.960，P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6、α-syn、p62蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P<0.05），而自噬标志蛋白（LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ）、Dynein IC1/2、Beclin1、Lamp-1表达水平降低（P<0.05）；与对照组比较，PQ染毒组HDAC6与α-syn荧光信号增强，蛋白表达水平增高，而Dynein IC1/2、LC3、Lamp-1荧光信号减少，蛋白表达水平降低（P<0.05）；PQ染毒诱导上述蛋白表达位置也发生变化，细胞质中的HDAC6由弥散状逐渐向细胞核聚集；α-syn、Dynein IC1/2、γ-tubulin、LC3、Lamp-1也逐渐由细胞质向细胞核聚集，并与HDAC6在细胞核共定位于核周区域。结论PQ可能通过诱导HDAC6介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径障碍引起α-syn异常聚集。