简介：摘要：在我国进入21世纪快速发展过程中，为保证无细胞蛋白表达体系的合理运用，提升制药水平，分析了生物制药工程中无细胞蛋白表达体系的运用优势，即:简化蛋白表达体系，稳定蛋白质表达体系，降低制药成本。介绍了无细胞蛋白表达体系的分类，分析其在生物制药工程中的具体应用。可以引入非天然氨基酸，重组蛋白药物生产，实现蛋白的高通量表达，简化制药流程。

简介：摘要：随着生物技术产业的兴起，已开发出多种形式的肽，蛋白质，抗体，酶，工程融合蛋白和结合物形式的生物制药产品，用于治疗糖尿病，炎症和代谢性疾病以及各种癌症和神经系统疾病。与传统的小分子药物相比，蛋白质治疗剂的优势包括更高的活性，较低的毒性和靶向效应以及可预测的作用机制。往往疗效显著、不良反应小、安全性高，这些有利的性质使蛋白质治疗剂能够实现更高的临床试验成功率。尽管这些生物制剂在临床上有很多优势，但是这些生物制剂存在稳定性差、易被酶解、生物半衰期短等问题，故在存储，制剂和给药方面存在着一些问题，阻碍其在更广泛的在药物释放领域的应用。

简介：摘要：过去的蛋白质表达系统在制药过程中虽然也有出色的表现，但这一技术存在生理局限性。例如，在蛋白质表达过程中，降解需要花费很长的时间，同时对下游产品的处理也有很高的要求。结果是，导致生物药物价格上涨的原因是长期没有对其进行技术改进。但是，无细胞蛋白在应用过程中并没有水溶性和半衰期的缺陷，无疑更有利于制药工业的发展。

简介：摘要随着技术的日益成熟，无细胞蛋白表达体系以其成本低、操作简单的特点，受到了业界的一致好评。尤其是在生物制药领域，能够有效的在体外合成蛋白质，较传统蛋白表达相比更加省时省力。基于此，笔者在文章中首先简要说明了无细胞蛋白表达的两种常见形式；其次，介绍了近几年在该项技术上所取得的重大突破；最后，提出了若干无细胞蛋白表达的应用措施，以供参考。

简介：摘要：无细胞蛋白表达系统作为一种在体外合成的蛋白质表达方式，具有效率高、速度快的优点，操作简单。该方法在生物学理解中发挥了重要作用，具有广泛的应用价值。无细胞蛋白表达系统已成为蛋白质药物生产的热点。在筛选高通量药物的过程中，为解决这一问题提供了一种新的途径。同时，许多人在生物制药领域取得了良好的成绩，有关科研人员继续为促进生物医药事业的发展和进步而努力，生物制药工程中无细胞蛋白表达体系显示出了很好的发展潜力。笔者对生物制药工程中无细胞蛋白表达体系的运用进行了研究，提出了以下观点，仅供参考。

简介：

简介：在动物细胞培养过程中，血清的存在能满足细胞的生长繁殖需求，但实际生产中血清提取工艺复杂，成本高昂，给大规模生产带来困难，不利于商业化开发。常见细胞源疫苗血清残留对疫苗免疫效果有很大的影响，而无血清培养基避免了血清所带来的血源性污染等问题，其成分和含量明确，制备流程简易，提高了实验的稳定性和准确性，有利于获得高质量的生物产品，与天然培养基等传统的培养基相比有着许多优势。随着生物科学的发展，细胞无血清培养技术的创新和应用已成为生物工程重点研究课题。我们简要综述了无血清驯化细胞的发展历程、应用，及无血清培养基的组成成分、优缺点等内容，以期对未来细胞培养技术的发展进程提供助力。

简介：我们知道，对蛋白质在细胞中的特异定位，可以增进我们对该蛋白质以及与该蛋白互作的其他蛋白功能的了解，确定蛋白质位置的一个方法是。在其上加一特异抗体。即对其贴上标签，然后加入能同此抗体特异结合的探针，最后用显微镜确定此探针在细胞中的位置。

简介：摘要目的探究不同浓度尿酸刺激对成纤维细胞骨桥蛋白(OPN)表达及细胞增殖、凋亡、胶原蛋白分泌的作用。方法培养原代人心脏成纤维细胞(HCF)；按照不同尿酸刺激浓度对HCF进行分组：尿酸0、5、10和15 mg/dl组；刺激48 h后进行以下实验：定量聚合酶链反应(qPCR)检测OPN、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Coll-1的mRNA表达情况；Western blot检测OPN、α-SMA、Coll-1的蛋白表达量；细胞生长活力检测试剂盒检测成纤维细胞活力；CCK-8试剂盒检测细胞增殖毒性；Trans-well实验检测细胞迁移能力；不同浓度尿酸刺激72 h后，碘化丙啶染色试剂盒检测细胞凋亡。结果经48 h不同浓度尿酸处理后，qPCR和Western blot显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的心脏成纤维细胞中OPN、α-SMA和Coll-1表达较尿酸0 mg/dl组均有上调趋势，以尿酸10 mg/dl组升高最显著(均为P<0.001)；细胞生长活力检测显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的心脏成纤维细胞的生长增殖活力较尿酸0 mg/dl组显著增加(P<0.001、P<0.001和P＝0.013)，细胞增殖活力趋势也呈倒U型曲线关系；CCK-8检测显示，尿酸5和10 mg/dl组的细胞增殖毒性较尿酸0 mg/dl组明显提升(P＝0.020、0.004)；Trans-well实验表明，尿酸5、10和15 mg/dl组的细胞迁移能力增强；不同浓度尿酸刺激72 h后碘化丙啶染色检测显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的细胞凋亡减轻，以尿酸10 mg/dl组最明显。结论尿酸可上调心脏成纤维细胞中OPN的表达，促使成纤维细胞增殖活化，增加胶原蛋白分泌。

简介：摘要真核细胞的纤毛和鞭毛，包括原纤毛和运动纤毛，几乎分布在所有细胞的表面，是很保守的细胞结构。装配和维护这种广泛的细胞结构纤毛需要一种重要的转运蛋白，-细胞纤毛内转运蛋白(Intraflagellartransport,ift)。细胞纤毛内转运蛋白具有正向转运和逆向转运功能。最近研究发现，如果细胞纤毛内转

简介：

简介：

简介：摘要目的观察三基序蛋白29(TRIM29)、三基序蛋白59(TRIM59)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移能力的影响。方法以RNA干扰(RNAi)技术由病毒介导法构建稳定表达TRIM29以及TRIM59短发卡RNA(shRNA)的NSCLC细胞株。以实时荧光定量(Real-time PCR)法检测小干扰RNA(siRNA)干扰后的TRIM29以及TRIM59基因表达情况，采用细胞迁移(Transwell)小室法检测siRNA干扰后NSCLC细胞株的迁移能力，通过蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC细胞中的人类直系同源物(Twist1)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。采用t检验。相关性分析采用皮尔逊(Pearson)法进行评价。结果TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组穿过基质膜的迁移细胞数均低于空白组、对照组，且联合处理组穿过基质膜的迁移细胞数低于TRIM29处理组、TRIM59处理组，差异有统计学意义(P<0.05)。TRIM29处理组、联合处理组TRIM29 mRNA相对表达量低于空白组和对照组，而TRIM59处理组、联合处理TRIM59 mRNA相对表达量低于空白组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组Twist1蛋白相对表达量均低于空白组、对照组，且联合处理组Twist1蛋白相对表达量低于TRIM29处理组、TRIM59处理组；TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组E-cadherin蛋白相对表达量均高于空白组、对照组，且联合处理组Twist1蛋白相对表达量高于TRIM29处理组、TRIM59处理组，差异均有统计学意义(P<0.05)。经皮尔逊(Pearson)相关性分析可得，TRIM29、TRIM59 mRNA相对表达量和Twist1蛋白相对表达量均呈正相关，而与E-cadherin蛋白相对表达量呈负相关，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TRIM29、TRIM59对NSCLC迁移能力具有积极促进作用，其主要作用可能和调控Twist1、E-cadherin蛋白表达有关。

简介：摘要目的分析无肝硬化甲胎蛋白阴性的肝细胞癌和肝脏局灶性结节增生(FNH)的临床和MRI特征及鉴别诊断。方法回顾性分析2017年3月至2020年11月于复旦大学附属中山医院及南通市中医院行肝脏手术的105例无肝硬化甲胎蛋白阴性的肝细胞癌患者资料，其中男性95例，女性10例，年龄(60.2±9.9)岁，病灶109个。收集同时段肝脏FNH的88例患者资料，其中男性36例，女性52例，年龄(32.8±9.5)岁，病灶99个。比较两组年龄、乙型病毒性肝炎(乙肝)病史、T1加权成像(T1WI)、T2加权成像(T2WI)、弥散加权成像(DWI)、表观扩散系数(ADC)、强化模式、病灶形状、病灶边界、包膜等。结果无肝硬化甲胎蛋白阴性的肝细胞癌患者年龄和乙肝病史比例高于肝脏FNH患者，差异有统计学意义(均P<0.05)。肝细胞癌病灶类圆形、边界清楚、有包膜比例高于肝脏FNH病灶，差异有统计学意义(均P<0.05)。肝细胞癌病灶的T1WI、T2WI、强化模式、DWI、ADC图等与肝脏FNH病灶比较，差异有统计学意义(均P<0.05)。年龄>45.5岁、乙肝病史、病灶边界清楚、"快进快出"的强化模式、有包膜诊断无肝硬化甲胎蛋白阴性的肝细胞癌受试者工作特征曲线下面积分别为0.97(95%CI：0.95~0.99)、0.79(95%CI：0.72~0.85)、0.78(95%CI：0.72~0.85)、0.94(95%CI：0.90~0.97)、0.99(95%CI：0.98~1.00)。结论有包膜、病灶边界清楚及"快进快出"的强化模式有助于无肝硬化甲胎蛋白阴性的肝细胞癌与肝脏FNH的鉴别。

简介：德国科学家最近研究发现，一种特定的蛋白质可以打破肿瘤的“坚硬堡垒”，诱使肿瘤细胞“自杀”，从而达到有效治疗癌症的目的。

简介：目的通过对梅毒螺旋体（treponemapallidum,TP）脂肽激活巨噬细胞产生细胞因子以及脂肽所诱导的免疫耐受对信号通路的影响进行研究,为进一步完善TP感染人体的免疫学过程,解释TP感染人体后引起的血清固定现象提供理论依据。方法不同浓度的TP脂肽刺激经PMA诱导THP-1细胞转化的巨噬细胞,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其分泌细胞因子的水平,并通过阻断CD14受体后,检测巨噬细胞对合成脂肽的反应能力以及合成脂肽耐受刺激后诱导巨噬细胞产生免疫耐受的能力。采用Westernblot法检测细胞内的信号转导分子。结果3种合成脂肽诱导巨噬细胞分泌白细胞介素（IL）-β及IL-8的能力随着脂肽浓度升高而递增。CD14受体阻断后,IL-1β及IL-8分泌水平均明显减少。合成脂肽经耐受后刺激的IL-1β及IL-8分泌水平明显低于直接刺激的细胞因子的水平。合成脂肽在耐受刺激下,其巨噬细胞内的信号转导分子toll样受体2（tolllikereceptor2,TLR2）和核转录因子kappaB（NF-κB）P65的蛋白表达显著减少。结论3种合成脂肽均能诱导巨噬细胞产生IL-1β及IL-8。合成脂肽通过激活巨噬细胞膜表面CD14受体分子,活化下游信号通路,从而诱导细胞因子产生。合成脂肽能够诱导巨噬细胞模型产生免疫耐受,其可能机制为通过TLR2激活下游NF-κB信号通路,减少炎性细胞因子产生。

简介：摘要目的观察慢性心衰患者中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域蛋白-3（TIM-3）的表达及其对T细胞的调控作用。方法收集2018年1至10月在郑州大学第一附属医院心血管内科住院治疗的慢性心衰患者86例（心衰组）和在郑州大学第一附属医院接受查体的健康对照32名（健康对照组），分离外周血单个核细胞，流式细胞术检测CD4+T细胞和CD8+T细胞中TIM-3的表达。分选CD4+ T细胞和CD8+T细胞，使用抗TIM-3抗体刺激培养。酶联免疫吸附试验检测CD4+T细胞培养上清中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-4、IL-10、IL-35、IL-17、IL-22水平和CD8+T细胞培养上清中肿瘤坏死因子（TNF-α）和IFN-γ水平，实时定量PCR法检测CD4+T细胞中转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3、RORγt和CD8+T细胞中穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量。组间比较采用t检验或配对t检验进行。结果心衰组TIM-3+CD4+T细胞比例高于健康对照组（3.47%±1.06%比0.92%±0.27%，P<0.001），心衰组TIM-3+CD8+T细胞比例亦高于健康对照组（6.12%±1.91%比1.77%±0.63%，P<0.001）。慢性心衰患者存在CD4+T细胞和CD8+T细胞功能不全，表现为心衰组CD4+T细胞分泌IFN-γ、IL-17和IL-22水平低于健康对照组，分泌IL-10和IL-35水平高于健康对照组（均P<0.05）。心衰组CD4+T细胞中T-bet和RORγt mRNA相对表达量低于健康对照组（均P<0.01），FoxP3 mRNA相对表达量高于健康对照组（1.93±0.88比0.97±0.28，P=0.031）。心衰组CD8+T细胞分泌TNF-α和IFN-γ水平低于健康对照组（均P<0.05），穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦低于健康对照组（均P<0.05）。抗TIM-3抗体刺激慢性心衰患者纯化的CD4+T细胞，分泌IFN-γ、IL-17和IL-22水平高于无抗TIM-3抗体刺激（均P<0.05），分泌IL-35水平则低于无抗TIM-3抗体刺激[（61±13）ng/ml比（72±17）ng/ml，P=0.029]。抗TIM-3抗体刺激后CD4+T细胞中T-bet和RORγt mRNA相对表达量高于无TIM-3抗体刺激（均P<0.05）。抗TIM-3抗体刺激慢性心衰患者纯化的CD8+T细胞后，分泌TNF-α和IFN-γ水平高于无抗TIM-3抗体刺激（均P<0.01），穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦高于无抗TIM-3抗体刺激（均P<0.05）。结论慢性心衰患者中T细胞表面TIM-3升高表达，TIM-3可能参与了慢性心衰患者T细胞功能不全的调控。

简介：摘要目的为了明确成年男性无精症的发生与PIWI蛋白的关系。方法收集2014年6月份至2015年4月份于浙江大学医学院附属第二医院妇产科就诊的11例为非阻塞性无精子症患者和11例为阻塞性无精症患者的睾丸活检标本。用免疫组化的方法显示两组患者生精细胞中的PIWI1蛋白浓度差异。结果阻塞性无精子症患者睾丸组织中PIWI1蛋白的表达明显高于非阻塞性无精子症患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论人类男性无精症的发生与PIWI/piRNA路径有关，提示PIWI/piRNA路径可能在正常精子发育的过程中起重要的保护作用。

简介：摘要目的阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea and hypopnea syndrome, OSAHS)是一种睡眠疾病，对体内代谢有多方面的影响，生物标志物研究成为热点和方向。但是很多蛋白表达本身存在昼夜变化，本研究拟对早晚采样时间点蛋白差异变化进行探索性研究。方法研究对象是经整夜睡眠监测确定为非OSAHS的无鼾成年男性28例。采集整夜睡眠监测前后的早晚唾液样本。每份唾液样本中都加入内参蛋白(牛胎球蛋白和酿酒酵母乙醇脱氢酶)，同步进行平行反应监测(parallel reaction monitoring，PRM)，通过靶向蛋白质组学方法定量分析98种与OSAHS相关的唾液蛋白。结果唾液蛋白的个体差异较大，总计平均变异系数为95.9%，其95%置信区间为(84.7%，107.2%)。以差异倍数>2倍且P<0.05的标准筛选早晚差异表达蛋白，得到早晨表达上调蛋白有13个，未见下调蛋白，表达无差异蛋白72个。无表达差异蛋白主要为细胞骨架蛋白及相关结合蛋白、氧化应激相关蛋白、免疫炎症相关蛋白和代谢相关蛋白等。表达差异蛋白功能涉及方面较广，包括机体免疫、血管生成、物质与能量代谢、神经发育和钙离子结合等。结论本研究发现部分唾液蛋白存在早晚明显差异，提示无鼾正常男性部分唾液蛋白的昼夜节律性变化。研究OSAHS患者生物标志物时，应考虑部分唾液蛋白固有的昼夜节律特性，规定时间段采样，并推荐早晚都进行采样。

简介：摘要目的利用流式细胞技术建立一种检测胰岛β细胞去分化状态的方法。方法实验研究。常规培养胰岛Min6（小鼠β细胞系）、αTC1-6（小鼠α细胞系）、HepG2（人肝癌细胞）和F9细胞（小鼠畸胎瘤细胞）。白细胞介素1β（IL-1β）合并肿瘤坏死因子α（TNFα）或棕榈酸（PA）过夜处理Min6细胞制备β细胞去分化模型。细胞染色采用抗-嗜铬粒蛋白A（ChgA）、抗-胰岛素（Ins）、抗-胰高血糖素（Gcg）、抗-SRY盒转录因子9（Sox9）和抗-八聚体结合转录因子4（Oct4）抗体进行，流式细胞技术鉴定细胞蛋白表达情况。统计学方法采用独立样本t检验。结果流式细胞实验结果显示Min6细胞高度表达Ins和ChgA，αTC1-6细胞高度表达Gcg，HepG2细胞高度表达Sox9，F9细胞高度表达Oct4，阳性率在90%左右。炎性因子（IL-1β+TNFα）处理Min6细胞导致Ins染色阳性细胞数量明显降低（92.775%±1.702%比97.125%±0.246%，P=0.045），Sox9染色阳性细胞增加（41.675%±0.390%比25.875%±3.348%，P=0.003），但ChgA和Oct4染色无明显变化（P值均>0.05）。PA处理Min6细胞后，Gcg染色阳性细胞数量上升（54.500%±3.597%比41.160%±3.007%，P=0.022）。实时荧光定量PCR检测mRNA结果与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论利用流式细胞技术可检测各去分化模型中不同标志蛋白的表达情况，为判断胰岛β细胞的去分化状态提供了新的手段。