简介:1985年Cetus公司的Mullis发明的聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是现代分子生物学研究中的一项非常重要的技术,它可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列的拷贝,从而很容易地对目的基因进行分析、鉴定以及其它操作。这一技术现已广泛应用于生物学的各研究领域。PCR的定量实质是核酸的体外扩增,当人们利用技术扩增出大量的特异DNA序列后,还必须对这些PCR产物进行定性或定量检测,特别是临床检验中,定量分析PCR产物可以为临床诊断、疗效观察等提供更为准确的信息。另外,在研究基因的表达调控研究中,经常利用RT-PCR定量检测某一特定的转录mRNA,因此,建立灵敏、准确、重复性好的PCR产物定量检测法是目前PCR及其相关技术研究的特点,电是定量PCR技术的基础。本文将对这一技术近年来的研究进展状况作一简要综述。
简介:摘要:本文旨在介绍荧光定量PCR技术,并详细说明了其使用前的准备工作、操作流程和注意事项,为广大动物实验爱好者提供参考。
简介:摘要:本文旨在介绍荧光定量PCR技术,并详细说明了其使用前的准备工作、操作流程和注意事项,为广大动物实验爱好者提供参考。
简介:【摘要】:实时荧光定量 PCR 技术是普通聚合酶链式反应技术基础上演变起来,一种灵敏度较高的核算定量技术。与常规 PCR 相比,它的不同之处在于其根据 PCR 产物中莹光信号的强度定量 , 不仅提高了反应的特异性和自动化程度,而且有效解决 PCR 污染等问题,实现了检测质量的飞跃 . 当前已经被广泛应用于医学诊断和环境监测多种领域的研究,本文对实时荧光定量 PCR 的原理,分类以及应用做一系统性综述。
简介:目的应用PCR检验技术在口岸进行鼠疫检测,以提高鼠疫诊断的准确性和灵敏度,建立适合于口岸鼠疫检测的快速诊断方法,提高鼠疫检测水平.方法首先,根据口岸地区样品的特点确定相应PCR检测方法,然后对样品进行PCR检测、鼠疫细菌学检验和反向间接血球凝集试验.结果形成了一套适合于口岸地区鼠疫PCR检测的方法,灵敏度为7cfu的鼠疫菌.PCR反应体系中以dUTP代替DTTp,加入UDG酶防止产物污染,对特异性和敏感性无影响.对在口岸地区采集的鼠类标本111份、进口旱獭皮张500份进行了PCR检测,并分别进行鼠疫细菌学、反向间接血球凝集试验.PCR检测出3份阳性鼠类标本,与鼠疫细菌学检验结果一致:对进口旱獭皮张的PCR检测和反向间接血球凝集试验均为阴性.结论经实验研究建立了一套完整的鼠疫PCR检测方法,本方法特异性和敏感性强、操作简便、快捷、成本较低,适合在口岸地区推广应用.
简介:摘要目的比较PCRHBV-DNA和ELISAHBsAg两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况,从而确定本次研究的试验方法。方法现场采集内窥镜各关键部位(镜身、孔道、活检钳)的样品207份,平均分成两份,按各自所用试剂盒的要求分别进行试验,比较两种试验的阳性检出率、一致性等试验评价指标。结果PCRHBV-DNA阳检率为27.54%、ELISAHBsAg阳检率为2.42%,经χ2检验,χ2=4.63P=0.031、一致性检验,kappa=0.089,P=0.008,由此说明两种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中有显著性差异。结论PCRHBV-DNA对与内窥镜中痕量的HBV的检测试验方法优于ELISAHBsAg方法,在本次调查研究中应该采用PCRHBV-DNA的检测方法。