简介：目的建立-种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合，以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节，采用3种不同的方法进行富集洗脱，通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果；DNA提取环节，采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增，定量检测DNA拷贝数，比较各方法的DNA提取效率；并采用最优的方法组合，对模拟水样进行膜过滤和DNA提取，考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤＋漩涡混合器＋玻璃棒刮擦洗脱方法（C法），洗脱效率能达到75％-93％；TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度（10^0-10^-5），r2分别为0．998和0．999，然而，TritonX—100法更省时，更简便，经济性更好。采用该最优的方法组合，其全过程的回收率为79．7％～104．0％且灵敏度达到1cfu／ml。结论c法＋Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。

简介：目的菌株YT-1107是一株从污染食物中分离得到的非脱羧勒克菌,对其进行生理生化特性研究及16SrRNA序列分析确定其归属。方法根据流行病学调查及临床表现,选择疑似病原菌,用ATB微生物自动鉴定系统对采集的样品进行病原菌分离与鉴定。对菌株的16SrRNA基因测序结果进行同源性分析,采用MEGA4.0软件的Neighbor-Joining方法构建系统发育树。结果对该菌株生理生化特征的研究及16SrRNA序列分析表明,该菌株是革兰阴性菌,属于Enterobacterasburiae。结论通过16SrRNA基因序列的同源性比对,系统进化树的构建,初步认定菌株YT-1107与EnterobacterasburiaeLF7a为同一物种。