简介：菰是一种稻族野生资源,水生或沼生,在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源,同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系,以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化,确定了在20μLISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为：3.0mmolMg^2＋（10×Buffer）,0.5mmoldNTPs、1.0μmol引物浓度、0.24U/μLTaq聚合酶、1.5ng/μLDNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性,为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。

简介：近年来,随着抗生素、免疫抑制剂和激素等的广泛应用,真菌感染有不断上升的趋势,真菌已成为医院感染的常见病原菌之一。由于不同病原菌对抗真菌药物的敏感性不同,能否准确诊断病原菌直接影响药物的选择。及时准确地检测真菌感染以及确定菌种,在临床治疗中尤为重要。该文对真菌感染检测方法的研究进展作一综述。

简介：以结缕草属植物DNA为模板，应用正交设计法对简单重复序列（simplesequencerepeats，SSR）反应体系中的各个主要影响因子进行了优化筛选，并通过比较不同浓度的模板DNA对聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）的影响，确立了适合结缕草属植物SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明，10μl的SSR反应体系中各组分的最适浓度分别为：10×PCR缓冲液，Mg^2＋2．5mmol／L，dNTP200μmol／L，左右引物分别为0．6μmol／L，TaqDNA聚合酶0．5U，模板DNA的用量在30～90ng均可。利用该优化体系，通过30对SSR引物对包含结缕草属植物4个种的10份材料进行了种质鉴定，结果发现Xgwm系列SSR引物可以有效地用于结缕草属植物不同种源间的鉴定及遗传多样性研究。其中有3对引物Xgwm459-6A、Xgwml49-4B和Xgwml35-1A因具有特异性条带或条带的缺失可以很明显地将大穗结缕草Z010与其他材料区分开来，在抗寒性和青绿期两极端类型材料的研究中发现，引物Xgwm484．2D和Xgwm44-7D均在抗寒性弱的部分材料和青绿期长的部分材料中扩增出一条抗寒性强和青绿期短的材料中没有的特异带，且两对引物中具有特异带的材料具有较高的一致性，初步认为这两标记可能与结缕草属植物的抗寒性或青绿期相关。

简介：以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素，包括Mg^2＋、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等，建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系：在20μl反应体系中，模板DNA为50ng，Mg^2＋浓度为2．0mmol／L，dNTP浓度为0．2mmol／L，引物浓度为0．75μmol／L，Taq酶用量为1U。适宜的扩增程序为94℃5min；94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，51℃lmin，72℃1min，30个循环；72℃7min。对体系的验证结果表明本研究建立的莴苣SRAP体系重复性好、分辨率高、多态性丰富，在莴苣属蔬菜种盾资源评价、分子标记辅助选择言种等骞方面躲有专耍作用。

简介：在国家现代农业产业技术体系建设专项资金支持下，“十一五”期间，国家食用豆产业技术体系以产销量较大的绿豆、小豆、芸豆、蚕豆、豌豆等为主要突破口，针对产业发展中存在的品种混杂退化严重产量低而不稳、栽培管理粗放种植技术落后、

简介：大白菜是重要的蔬菜作物,准确鉴定大白菜品种对于大白菜种质资源管理、新品种测试、种子质量检测等具有重要意义。本研究从已定位到大白菜10个连锁群的205个SSR标记中,筛选出30个在连锁群上分布均匀、PCR扩增稳定、带型简单的标记,用于大白菜品种DNA指纹鉴定。对入选的引物用4种荧光染料进行了标记,利用基于毛细管电泳荧光检测的DNA分析仪对SSR扩增产物进行检测。通过比较分析2种不同型号的3台DNA分析仪的扩增片段检测数据,明确了不同DNA分析仪的检测数据间一般存在明显的系统误差。系统误差的大小取决于引物,一般在1～4bp之间。使用扩增产物的片段长度对各SSR位点的不同等位变异进行命名。通过使用一组参照品种,消除了不同批次、不同DNA分析仪型号间的系统误差,保证了检测数据的可重复性和可再现性。在此基础上,对184份大白菜品种进行了DNA分子数据采集。

简介：目的分析粪便中检出念珠菌孢子或假菌丝的临床意义。方法检测白求恩国际和平医院2008年4月住院患者送检的粪便标本，用科玛嘉显色培养基鉴定念珠菌菌种，并记录患者粪便常规及临床资料。结果其间共检测1011份粪便，有86份（8．51％）有真菌生长；其中念珠菌阳性76份（7．52％）。60岁以上老年人阳性者33份（占43．42％）。基础疾病以肿瘤，心、脑血管疾病三者为著（占31．58％）。有21例患者（27．63％）粪便性状有异常，以糊状便为主。结论粪便中检出芽生孢子和（或）假菌丝对诊断念珠菌性胃肠道感染有重要价值，尤其要关注抗生素应用患者。

简介：实时荧光定量PCR是目前基因表达量差异分析的首选方法之一。虽然其操作简单,但如何保证其定量结果的可信度一直是个难题,特别是针对只有20多个碱基的miRNA的定量分析。本研究以水稻miR408在不同组织中的表达差异为实例,系统地优化和阐述了有关荧光定量的新标准及要求。结果表明,引物的浓度对于荧光定量PCR体系的优化至关重要。

简介：目的探讨（1,3）-β-D-葡聚糖检测和半乳甘露聚糖抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的价值。方法回顾性研究北京大学第一医院2008年1月~2010年7月临床疑诊侵袭性真菌病的住院患者。根据诊断标准确定是否诊断侵袭性真菌病。分析非培养诊断方法血清半乳甘露聚糖（GM试验）和血浆（1,3）-β-D-葡聚糖（G试验）的敏感度和特异度,以及二者联合应用后诊断的敏感度和特异度。结果GM试验灵敏度为70%,特异度为84%;G试验灵敏度为50%,特异度为92%。GM试验和G试验二者联合试验时,其灵敏度和特异度分别为93%和78%。结论GM试验和G试验均对侵袭性真菌病具有诊断价值,二者联合应用使其应用价值进一步提高。

简介：采用GUS基因瞬时表达检测方法，通过正交试验以AS浓度、侵染菌液OD值、侵染时间、共培养时间和恢复培养时间5个因素在4个水平上进行分析，优化了农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系，并在此基础上进行了抗逆基因GmPK的遗传转化。结果表明，采用共培养培养基中添加100μmol／LAs、侵染菌液OD600值0．9、侵染15h、共培养5d和恢复培养3d的转化条件最佳，GUS阳性率达74．59％，经PCR及RT—PCR进一步验证获得了转基因阳性植株。利用优化的最佳条件进行抗逆基因GmPK的转化，炼苗移栽成活的再生植株经PCR及PCR—Southernblotting验证，初步证明外源基因已经整合至大豆基因组，转化率为0．6％。

简介：目的建立基于TaqMan探针技术的皮炎外瓶霉荧光定量PCR检测方法.方法通过对皮炎外瓶霉ITS区域基因组序列（GenBank：JN675373.1）进行分析,设计合成特异性引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR反应条件.以临床标本中分离的皮炎外瓶霉为阳性菌株,及其他种类真菌和细菌作为阴性对照菌株,从特异性、敏感性及重复性方面对该方法检测效果进行评价.结果该研究设计的引物和探针能扩增皮炎外瓶霉特异性序列.临床分离得到的皮炎外瓶霉在反应中有明显扩增曲线,而甄氏外瓶霉、棘状外瓶霉、烟曲霉、白色念珠菌、新生隐球菌、马内菲青霉等20株菌在CT值≤38范围内均未有扩增;利用基因重组构建的标准品完成了标准曲线的绘制,在1.0×103～1.0×107拷贝数（Cp）内具有良好的线性关系（R2=1.000）,最低可检出量为10Cp/μL.结论成功建立了荧光定量PCR检测皮炎外瓶霉方法,该法特异度强、敏感度高、重复性好,将有助于临床皮炎外瓶霉感染的早期诊断和针对性治疗.

简介：念珠菌是常见的一种条件致病菌,可在皮肤、黏膜等部位与宿主共存.当正常寄居部位的微生态环境失调或机体免疫机能低下时,易侵入体液及器官,引起念珠菌病.近年来,侵袭性真菌感染的发病率及死亡率呈明显上升的趋势,最新的流行病学调查结果[1]显示,美国念珠菌病医院感染率为0.28‰～0.96‰,欧洲为0.2‰～0.38‰.拉丁美洲念珠菌院感率为1.2‰～5.5‰,若伴长期的中性粒细胞缺乏或发热,医院感染率可升至7％[1].

简介：为探索近红外光谱技术在大豆氨基酸测试中的应用,寻找一种快速的检测方法,以167份大豆[Glycinemax（L.）Merr.]种子为材料,采用傅里叶变换近红外光谱技术（FT-NIRS）对经高效液相色谱法（HPLC）分析的18种氨基酸含量进行模拟。结果显示：天冬氨酸（R2CV=0.85）、谷氨酸（R2CV=0.86）、丝氨酸（R2CV=0.82）、甘氨酸（R2CV=0.89）、酪氨酸（R2CV=0.83）、苯丙氨酸（R2CV=0.78）、异亮氨酸（R2CV=0.86）和色氨酸（R2CV=0.81）及15种氨基酸总和（R2CV=0.82）可利用FT-NIRS准确预测;苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和胱氨酸检测模型有一定的参考价值,可用来进行相对含量的估测;而对组氨酸、赖氨酸、脯氨酸和蛋氨酸的预测不准确。本研究进一步证明,利用FT-NIRS技术预测大豆主要氨基酸组分是稳定可行的。

简介：白念珠菌是人体常见的机会致病性真菌,可存在于正常人口腔、上呼吸道、肠道及阴道,易在义齿、人工插管如尿道插管、气管插管等植入性设备表面定植并进一步形成生物膜。生物膜的形成可保护菌体免受药物的杀伤和免疫系统的攻击。黏附是生物膜成膜的关键,也是白念珠菌致病的关键步骤[1]。本实验拟通过结晶紫法与XTT法观察中药厚朴对白念珠菌黏附的影响,并对两种检测方法进行评价。

简介：近年来，国内许多研究者将研究重点转移到中药抗真菌作用机制方面。硝矾洗剂，具有清热解毒、杀虫、燥湿止痒之功效，用于治疗浅部真菌病。本实验应用NCCLSM27-A液基试管法，并在此基础上进行改良，检测硝矾洗剂及其组方对常见致病性真菌的敏感性。

简介：目的评价PCR结合反向斑点杂交法检测福尔马林固定、石蜡包埋组织中曲霉感染的可行性。方法选取39例病理证实曲霉感染的患者活检标本（21例为鼻窦感染标本、18例为尸检标本），以1对真菌特有的28SrRNA保守序列结构作为真菌通用引物，以临床常见的4个曲霉菌种：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉的种特异性序列为种特异性探针，与扩增产物进行反向斑点杂交。结果尸检标本阳性率为55．6％（10／18），鼻窦标本阳性率为76．2％（16／21），特异性均为100％。在这些曲霉所致的系统性感染中，烟曲霉是主要的致病真菌。结论该方法能对临床无法培养的石蜡组织块进行回顾性病原学研究，并可以鉴定常见的曲霉菌种，有良好的特异性和敏感性，适用于临床曲霉感染的检测。

简介：目的探讨血液细菌感染对血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测结果的影响。方法排除影响G试验结果的干扰因素后,选取符合入组条件的血培养细菌阳性及血培养阴性患者各40例,采集血清进行G试验检测。结果40例血培养细菌阳性标本中革兰阳性菌22例,革兰阴性菌18例,其中只有1例大肠埃希菌的G试验结果为阳性,4例在灰区,其余为阴性。40例血培养阴性标本3例G试验结果在灰区,其余为阴性。血培养细菌阳性组与血培养阴性组G试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论血液细菌感染对G试验检测干扰较小。

简介：目的建立检测常见丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP和多重PCR方法。方法建立以PCR技术为基础的限制片段长度多态性（RFLP）方法,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌的ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌的特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板的扩增情况,并测定该体系的特异性和敏感性。结果用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌,多重PCR能够根据扩增片段的不同鉴别菌种,在合适的反应条件下,对单模板、双模板和三模板均能扩增出目的片段。结论PCR-RFLP和多重PCR技术能够快速鉴定丝状真菌感染病原菌,有临床应用的良好前景。

简介：目的对吉林省扶余县35例儿童孢子丝菌病进行临床分析并对部分菌株进行基因测定,了解该地区孢子丝菌病的致病菌菌株基因是否发生变异而致致病力增强及发病率增高。方法收集2011年1月1日~4月30日来自扶余县就诊于我科并确诊为孢子丝菌病的患儿35例,进行临床分析;从中选取8株菌,对其核糖体保守区及内转录间隔区（ITS）、非转录间隔区（NTS）区进行基因测定,了解基因水平上的异同。结果8株孢子丝菌菌株中5株NTS区可见较大范围的碱基缺失。结论吉林省扶余县孢子丝菌菌株可能由于NTS区碱基较大范围缺失而致致病力增强,导致该地区短时间内发病率增高。

简介：目的探讨（1,3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）在侵袭性真菌病诊断中的价值。方法回顾性研究重庆医科大学附属第一医院2014年1~6月间临床G试验的住院患者结果,分析G试验诊断真菌感染的敏感性、特异性、符合率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数等能力指标。结果真菌感染组G试验检测值228.4±250.1pg/mL,非真菌感染组G试验检测值32.6±13.6pg/mL,两组间有显著统计学差异（P〈0.001）;G试验对真菌感染的敏感性、特异性、符合率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为83%、92%、88%、89%、87%、0.75。结论G试验是真菌感染的重要早期实验室指标之一,对其合理应用可有效提高真菌感染的诊治水平,特别是阴性结果对排除真菌感染的意义更大。