HBeAg定性检测和定量检测结果的一致性研究

HBeAg定性检测和定量检测结果的一致性研究

韩 敏1陈颖通讯作者

联勤保障部队第962医院检验科 黑龙江 哈尔滨 150001

[摘 要]：研究外周血HBeAg定量检测和定性检测结果之间的一致性，表明HBeAg定量是目前临床上评价HBV复制和肝脏损伤程度的灵敏、稳定、可靠的指标，在慢性乙型肝炎的诊断和治疗中有一定价值。

[关键词]：肝炎e抗原，乙型；  酶联免疫吸附测定；电化学发光免疫分祈法

HBeAg是乙型肝炎病毒(HBV)感染肝细胞后表达的一种分泌性蛋白，作为一种常用HBV血清标志物(HBV-M),主要用于反映HBV复制的情况。临床实验室检测HBeAg普遍采用的是ELISA定性方法，其检测结果在临床诊断和疗效评价中也得到普遍认可。目前可定量检测HBeAg水平的各种自动化免疫分析仪已在部分临床实验室投入应用。尽管定量检测HBeAg具有更高灵敏度，但是不同方法学造成检测结果的不一致也给临床实验室及临床诊断带来极大干扰。本研究旨在对HBeAg的两种检测方法的检测结果进行比较，科学评价HBeAg定性与定量检测结果之间的一致性[1]。

1. 检测方法  

HBV M定性检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供。HBeAg定量采用美国Abbott公司的AXSYM全自动免疫分析系统和微粒子捕捉免疫发光分析(MEIA)试剂盒检测，检测线性范围0～6700 PEIU/mL,>0.28 PEIU/mL为阳性。HBV DNA定量检测采用荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)法，试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供，灵敏度为10²IU/ml。

   2.检验效果分析

2.1慢性乙型肝炎是HBV感染常见的状态之一，感染者的临床表现为无症状的携带状态、慢性肝炎、肝硬化及肝癌。ELISA是传统的HBV感染诊断方法，主要从机体的免疫状态检测HBV M,传统认为大三阳是急性乙型肝炎的慢性活动期，传染性强；而小三阳和HBsAg(+)/抗HBc(+)是恢复期，传染性较弱。近年来，随着免疫和分子生物学的发展，定量检测血清HBeAg和HBV DNA的技术越来越多，渐渐突显出传统ELISA检测乙型肝炎病毒标志物的缺陷和不足。本研究结果显示，检测血清HBeAg,MEIA定量法灵敏度明显高于ELISA定性检测，由于MEIA定量检测HBeAg的线性范围大，还可精确到小数点后，特别有利于动态评估HBV复制[2]。

2.2 HBV是乙型肝炎的病原体，与肝炎后肝硬化和原发性肝细胞癌密切相关。据统计，中国约有1.2亿人为HBV携带者，占全球感染人数的1/3。HBV感染的相关疾病成为威胁中国人群健康的重要因素。

2.3 HBeAg是HBV感染人体肝细胞后表达的一种分泌性蛋白，由PreC基因编码，是HBV复制明显和强传染性的可靠标志“。当前临床实验室检测HBeAg的方法主要是ELISA定性检测，其检测结果也得到临床医师的普遍认可45。近年来，以ECLIA为基础的HBV-M的定量检测在临床实验室得到推广，具有较好的灵敏度，并能定量反映外周血HBV-M水平，但是定性和定量检测结果之间由于方法学的差异存在一定矛盾。本研究采用ECLIA定量检测和ELISA定性检测外周血HBeAg,探讨两种方法检测结果的一致性，以期对检测结果的差异作出科学诠释[3]。

2.4本研究以HBV感染者为研究对象，对HBeAg定量结果作ROC曲线，得出曲线下面积为0.952,表明HBeAg定量检测具有较高的诊断价值。现行HBeAg定量检测所采用的检出阈值为1IU/mL,研究显示，以1IU/mL作为ELISA定性检测HBeAg的检出阈值，Se=0.99、Sp=0.49、J=0.48、K=0.47;即当HBeAg定量<1iu>时，ELISA定性为阴性的可能性为99%,当HBeAg定量>1IU/mL时，ELISA定性为阳性的可能性不足50%,定性和定量两种方法检测结果一致性仅为0.47,造成同步检测HBeAg定性和定量时大量患者的检测结果出现不一致的现象，给临床诊断和治疗监测造成极大干扰[4]。

2.5通过统计分析，HBeAg定量结果63.61U/mL可作为ELISA定性检测的检出阈值。当HBeAg<63.6 IU/mL时，ELISA定性为阴性的可能性为85%(Se=0.85),当HBeAg>63.6IU/mL时，ELISA定性为阳性的可能性为95%(Sp=0.95),两者具有较高的准确度及一致性(J=0.80,K=0.80)。

2.6研究还发现提高检出阈值，定性试验的灵敏度有所下降，特异度无明显变化，检测结果的准确度和一致性均有所降低。本研究以104.4IU/mL设定为ELISA定性检测检出阈值，统计分析得出定性试验Se=0.81,Sp=0.95,J=0.76,K=0.76

[5]。

综上所述，可以说明MEIA法HBeAg定量和FQ-PCR对HBV DNA水平的检测是目前临床上评价HBV复制和肝脏损伤程度的敏感、稳定且可靠的指标，联合ELISA检测HBVM及对肝功能的检验等，可以为慢性乙型肝炎的临床诊断、HBV前C区变异的初筛、抗病毒疗效的预测及评估、肝炎的复发和预后提供有价值的参考。

参考文献：

[1]冉景锐.乙肝五项指标定量与定性检测结果的差异和临床意义 [J] . . 临床检验杂志(电子版) . 2018,第001期

[2]欧阳慧贞 .建立和评价乙肝DNA定量检测结果与乙肝两对半及肝酶检测结果的交互校验的自动审核系统 [A] .  2018

[3]展虎蒙 . 血标本乙肝五项指标定量与定性检测结果探析 [J] . 中国保健营养 . 2013,第001期

[4]覃彦平 ,柯柳华 ,蒋义生 . HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清HBsAg与HBV-DNA的相关性及其与HBeAg、ALT水平的关系 [J] . 广西医学 . 2016,第001期

[5]傅维佳 ,李成忠 .核苷(酸)类药物长期治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清HBsAg、HBeAg和HBVDNA动态变化及应答相关性 [J] .  肝脏 . 2018,第002期