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摘要:目的 研究自制复合物辅助保护胃粘膜功能。方法 以大鼠为研究对象,按照《保健食品功能检验与评价方法( 2023 年版)》的规定进行辅助保护胃粘膜动物功能实验。结果 与模型对照组比较,中、高剂量组胃粘膜损伤大体观察评分和病理组织学检查评分均显著降低(P<0.05,P<0.01),对大鼠体重无影响(P>0.05),说明受试复合物对胃粘膜损伤有明显改善作用,判定其具有辅助保护胃粘膜功能。结论 由保健食品原料白及提取物、白术提取物、茯苓提取物、三七提取物、人参提取物制得的复合物具有辅助保护胃粘膜的保健功能。
关键词:保健食品原料 复合物 辅助保护胃粘膜 大鼠
白及提取物由白及制得,白及苦、甘、涩,微寒,归肺、肝、胃经,具有收敛止血、消肿生肌之功效。白术提取物由白术制得,白术苦、甘,温,归脾、胃经,具有健脾益气、燥湿利水的功效。茯苓提取物由茯苓制得,茯苓甘、淡、平,归心、肺、脾、肾经,具有利水渗湿、健脾的作用。三七提取物由三七制得,三七甘、微苦,温,归肝、胃经,具有散瘀止血,消肿定痛之功效。人参提取物由人参提取制得,人参甘、微苦,微温,归脾、肺、心、肾经,具有大补元气、复脉固脱、生津养血的作用,用于脾虚食少,气血亏虚,久病虚羸,起到增强机体防御修复机能的作用。复合物配方中原料配伍应用具有益气健脾、生肌止血之效,既能促进修补受损胃粘膜,消肿止痛、散瘀生肌,又能补气和中、健脾安胃,增强胃粘膜防御修复能力,具有辅助保护胃粘膜的保健功能。现代药理学研究表明,白及、三七、人参等配伍应用对酒精造成的大鼠胃粘膜损伤具有保护作用[1]。由白术、茯苓、人参等制得的茯苓饮确有抑制胃酸分泌、保护胃粘膜屏障的作用[2]。
1材料与方法
1.1样品
受试复合物是由保健食品原料白及提取物、白术提取物、茯苓提取物、三七提取物、人参提取物制得。提取物每日成人推荐服用量分别为0.6、0.3、0.3、0.25、0.25g。
1.2动物材料
实验动物为Wistar 健康大鼠,体重在 180g至220 g之间,单一雄性,广东省医学实验动物中心 提供,所有实验动物均饲养于屏障级动物房,控制温度20~22℃,控制相对湿度50%~70%,每日12小时照明与黑暗交替,大鼠均自由摄食、饮水,先进行适应性喂养,在1 周后进行试验。
1.3方法
参照《保健食品功能检验与评价方法(2023年版)》“十八、 辅助保护胃粘膜”功能实验对辅助保护胃粘膜功能进行评价。将大鼠按体重随机分为空白对照组、模型对照组、受试物低、中、高剂量组(0.14g/kg·bw、0.28g/kg·bw、0.85g/kg·bw),每组10 只,共5组。低、中、高剂量分别相当于人体推荐量的5、10、30 倍。每日按 10 mL/kg体重灌胃相应浓度受试物,空白对照组、模型对照组同法灌胃给予等量蒸馏水,每天一次,连续 30 天,除空白对照组外,所有试验组动物在30天后均给予1.0mL/只的无水乙醇,造急性胃粘膜损伤无水乙醇模型。按照法规规定方法进行急性无水乙醇损伤大体观察、组织病理学观察,并进行评分。具体评分标准见表1-2。
表 1急性无水乙醇损伤大体观察评分标准
损伤程度 | 1 分 | 2 分 | 3 分 | 4 分 |
出血点 | 1 个 | - | - | - |
出血带长度 | 1-5mm | 6-10mm | 10-15mm | >15mm |
出血带宽度 | 1-2mm | >2mm | - | - |
总积分 = 出血点分值+长度分值+(宽度分值×2)
观察指标:各实验组胃粘膜损伤程度以损伤发生率(%)、 损伤积分指数和损伤抑制率(%)表示。 损伤发生率(%)=某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100%;损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量;损伤抑制率(%)= (A-B)/A×100%(A、B分别为模型组与试验组的损伤积分)。
组织病理学观察及评分:大体检查完毕,将每只动物胃粘膜损伤最严重的部位切下,固定于10%甲醛溶液,常规制片,HE 染色,镜下观察。注意选择胃粘膜正横切面,包括粘膜全层的区域观察。评分方法:以充血、 出血、 粘膜细胞变性坏死在整个粘膜上皮层的累及程度分为5级。 充血权重为1,出血权重为2,上皮细胞变性坏死权重为3。
表2急性胃粘膜损伤组织病理学检查评分标准
病变 | 1 分 | 2 分 | 3 分 | 4 分 | 5分 |
充血 | < 1/5 | 1/5-2/5 | 2/5-3/5 | 3/5-4/5 | 上皮全层 |
出血 | < 1/5 | 1/5-2/5 | 2/5-3/5 | 3/5-4/5 | 上皮全层 |
上皮细胞变性坏死 | < 1/5 | 1/5-2/5 | 2/5-3/5 | 3/5-4/5 | 上皮全层 |
病变总积分= 充血积分+出血积分×2+上皮细胞变性坏死积分×3
2结果与分析
2.1受试物对大鼠体重的影响
30天喂养实验第1天、第15天、第30天各组间大鼠体重无显著性改变,且组间差异无统计学意义(P>0.05)。证明受试物对大鼠中期、末期体重无明显影响。详见表
3。
表 3大鼠体重结果(;g)
组别 | 剂量(g/kg·bw) | 动物数量/(只) | 体重 | ||
Day1 | Day15 | Day30 | |||
空白对照品 | - | 10 | 196.9±9.7 | 327.9±14.2 | 396.5±31.4 |
模型对照组 | - | 10 | 205.8±11.2 | 338.2±13.6 | 403.7±33.2 |
低剂量组 | 0.14 | 10 | 203.4±8.4 | 337.3±10.5 | 402.1±30.8 |
中剂量组 | 0.28 | 10 | 199.6±10.7 | 334.6±16.7 | 398.4±19.7 |
高剂量组 | 0.85 | 10 | 207.1±14.3 | 335.5±19.6 | 405.2±39.5 |
2.2受试物对急性无水乙醇损伤大体观察结果
与空白对照组比较,模型对照组大体观察评分显著升高。与模型对照组比较,受试物中、高剂量组大体观察评分显著降低(P<0.01),证明受试物可显著减轻无水乙醇造成的胃粘膜损伤。详见表 4。
表 4急性胃粘膜损伤大体观察及评分结果()
组别 | 剂量(g/kg·bw) | 动物数量(只) | 损伤发生率(%) | 损伤积分指数(分 | 损伤抑制率(%) |
空白对照品 | - | 10 | 0.0 | 0.00±0.00 | - |
模型对照组 | - | 10 | 100.0 | 30.17±6.34 | - |
低剂量组 | 0.14 | 10 | 100.0 | 26.11±8.03 | 13.46 |
中剂量组 | 0.28 | 10 | 100.0 | 17.96±5.4** | 40.47 |
高剂量组 | 0.85 | 10 | 100.0 | 16.88±6.78** | 44.05 |
注:与模型对照组比较, **P<0.01
2.3受试物对急性无水乙醇损伤病理组织学检查评分结果
空白对照组大鼠胃粘膜均未见异常,与空白对照组比较,模型对照组胃粘膜病理组织学检查积分明显升高,与模型对照组比较,受试物中、高剂量组胃粘膜病理组织学检查评分显著低于模型对照组( P<0.05),证明受试物可显著改善胃粘膜损伤。详见表 5。
表 5急性胃粘膜损伤病理组织学检查评分结果()
组别 | 剂量(g/kg·bw) | 动物数量(只) | 病变情况(分) | 病变总积分(分) | 病变积分 ( | |||
充血 | 出血 | 上皮细胞变性坏死 | ||||||
空白对照品 | - | 10 | 1 | 0 | 0 | 1 | 0.10±0.35 | |
模型对照组 | - | 10 | 10 | 19 | 8 | 72 | 7.20±2.17 | |
低剂量组 | 0.14 | 10 | 7 | 15 | 6 | 55 | 5.50±3.06 | |
中剂量组 | 0.28 | 10 | 4 | 7 | 2 | 24 | 2.40±2.24* | |
高剂量组 | 0.85 | 10 | 3 | 6 | 2 | 21 | 2.10±1.63* | |
注:与模型对照组比较, *P<0.05
3 结论
将由白及提取物、白术提取物、茯苓提取物、三七提取物、人参提取物组成的复合受试物以0.14、0.28、0.85 g/kg·bw 剂量灌胃给予大鼠,采用无水乙醇造急性胃粘膜损伤模型。30天实验结果证实,急性胃粘膜损伤模型成立,实验过程中各组大鼠体重无异常(P>0.05),与模型对照组比较,0.28、0.85 g/kg·bw 剂量组急性胃粘膜损伤大体观察评分及病理组织学检查病变总积分均显著降低(P<0.05,P<0.01),说明复合受试物具有辅助保护胃粘膜的保健功能,本研究为原料白及提取物、白术提取物、茯苓提取物、三七提取物、人参提取物作为保健食品原料的开发提供了依据。
参考文献:
[1]董文秀,才丽平,花梦,等.消痈溃得康及其拆方预防乙醇致大鼠急性胃粘膜损伤的抗氧化机制[J].世界科学技术-中医药现代化,2016,18(12):2105-2110.
[2]何伟,舒晓奋,熊玉兰,等.茯苓饮抗胃粘膜损伤作用的研究[J].中国实验方剂学杂志,1995,1(1):22-24.