广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 广东 广州 510610
摘要:目的:探讨研究大蒜油具有增强免疫力功能的科学依据。方法:经口给予小鼠不同剂量的大蒜油30天,检测其体重增长、脾脏和胸腺体重比值以及各项免疫功能指标。结果:各组间小鼠体重增长差异无显著性(P>0.05),小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值差异亦无显著性(P>0.05),小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性测定结果均为阳性,小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能测定结果为阴性。结论:大蒜油具有增强小鼠免疫功能的作用。
关键词:大蒜油;免疫功能;小鼠
大蒜不仅是人们日常生活中经常食用的蔬菜和调味品,同时具有一定的药用功效,从古至今,埃及、中国、日本等国就一直用大蒜治疗多种疾病[1]。大蒜油为大蒜用水蒸气蒸馏法制得的食品添加剂[2]。郑昱等[3]探讨不同剂量大蒜油对正常小鼠免疫功能的影响。以2.0 mg/kg、4.0 mg/kg、8.0 mg/kg低、中、高3个剂量大蒜油进行实验。结果8.0 mg/kg剂量大蒜油组小鼠的吞噬指数明显高于对照组,碳廓清能力提高(P<0.05);食用大蒜油2.0 mg/kg、4.0 mg/kg、8.0 mg/kg剂量组小鼠吞噬率均高于对照组(P<0.05),并且随着食用剂量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油2.0 mg/kg、4.0 mg/kg、8.0 mg/kg剂量组小鼠光密度差值均高于对照组(P<0.05)。结果表明大蒜油具有提高小鼠免疫功能的效果。鉴于此,本实验主要研究大蒜油具有增强免疫力功能。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物:选用健康SPF昆明种小鼠,体重18~22g。
1.1.2 受试物及剂量选择:大蒜油(大蒜素含量大约20%)。大蒜油人体推荐量为每人每日48mg/60kg.bw,按相当于其5、10、30倍确定小鼠的低、中、高剂量,即各组小鼠每日剂量分别为4mg/kg.bw、8mg/kg.bw、24mg/kg.bw,经口每日一次灌胃,灌胃体积按10ml/kg.bw。灌胃前用大豆油配制受试物,对照组连续给予等体积的大豆油,30天后测各项免疫指标。
1.1.3 主要仪器设备:酶联免疫检测仪、紫外分光光度计、血细胞计数器、光学显微镜、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型底细胞培养板。
1.2 方法
1.2.1 脏器体重比值测定:小鼠称重后颈椎脱臼处死,取其胸腺、脾脏,去尽筋膜,用滤纸吸干脏器表面血污并称重,计算胸腺体重比值与脾脏体重比值。
1.2.2 免疫功能检测:细胞免疫功能检测采用迟发型变态反应(足跖增厚法,DTH)和ConA诱导的脾淋巴细胞转化实验(MTT法);体液免疫功能检测采用抗体生成细胞测定(Jerne改良玻片法)和血清溶血素的测定;单核-巨噬细胞功能检测采用小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法);NK细胞活性测定采用乳酸脱氢酶LDH测定法。
1.2.3 结果判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定体液免疫功能测定结果阳性,单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定NK细胞活性结果阳性。
1.2.4 统计学处理:采用SPSS 19.0软件进行统计分析,计量资料以±s表示。对所得数据进行完全随机设计单因素方差分析(不符合应用条件时需进行数据转换),进一步两两比较采用LSD-t法。P<0.05为差异有统计学意义。
2 实验结果
2.1 不同组间小鼠体重、脏器体重比值比较:小鼠初始体重在各组间差异无统计学意义(P>0.05),灌胃30天后发现体重增长值在各组间差异均无统计学意义(P>0.05),小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值在各组间比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)。
2.2 不同剂量组小鼠细胞免疫功能指标比较:小鼠迟发型变态反应结果显示,大蒜油4mg/kg.bw、8mg/kg.bw、24mg/kg.bw剂量组的小鼠足跖肿胀度均高于对照组,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验结果显示,各组间的淋巴细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.3 各剂量组小鼠体液免疫功能指标比较:小鼠抗体生成细胞数测定表明各组间抗体生成细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。小鼠血清溶血素实验中,大蒜油4mg/kg.bw、8mg/kg.bw、24mg/kg.bw剂量组的抗体积数均高于对照组,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 各剂量组小鼠细胞和体液免疫功能指标比较(n=10)
组别 | 足跖肿胀度(mm) | 淋巴细胞增殖能力(吸光度差值) | 抗体生成细胞数 (×103/全脾) | 抗体积数 |
对照组 | 0.30±0.15 | 0.248±0.074 | 76.68±25.93 | 150.55±41.52 |
4mg/kg.bw | 0.51±0.18* | 0.231±0.083 | 79.29±23.64 | 207.69±40.65* |
8mg/kg.bw | 0.57±0.21* | 0.252±0.090 | 82.30±32.61 | 214.50±31.18* |
24mg/kg.bw | 0.60±0.17* | 0.264±0.099 | 85.88±35.99 | 221.62±39.11* |
*表示与对照组比,P<0.05。
2.4 不同剂量组小鼠非特异性免疫功能指标比较
2.4.1 小鼠单核巨噬细胞吞噬功能影响:采用小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力测定实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定实验。结果小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力测定实验吞噬指数a在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定实验吞噬率平方根反正弦转换值和吞噬指数在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
2.4.2 小鼠NK细胞活性:大蒜油4mg/kg.bw、8mg/kg.bw、24mg/kg.bw剂量组的小鼠NK细胞活性平方根反正弦转换值均高于对照组,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
见表2。
表2 不同剂量组小鼠非特异性免疫功能指标比较(n=10)
组别 | 吞噬指数a | 吞噬率平方根反正弦转换值 | 吞噬指数 | NK细胞活性平方根反正弦转换值 |
对照组 | 6.34±0.67 | 0.51±0.13 | 0.34±0.16 | 0.35±0.08 |
4mg/kg.bw | 6.56±0.85 | 0.53±0.14 | 0.36±0.17 | 0.50±0.09* |
8mg/kg.bw | 6.67±0.79 | 0.56±0.15 | 0.37±0.13 | 0.56±0.07* |
24mg/kg.bw | 6.73±0.80 | 0.58±0.12 | 0.39±0.15 | 0.59±0.08* |
*表示与对照组比,P<0.05。
3 讨论
大蒜油含有大蒜素活性物质,具有活化由糖脂质组成的细胞膜功能,能再度提高其渗透性,于是细胞的新陈代谢加强,活力提高,机体的免疫力随之增强。本实验结果,低、中、高剂量大蒜油可以提高小鼠足跖肿胀度、可提高小鼠抗体积数、能提高NK细胞活性,与对照组比较具有显著性差异。结果提示大蒜油具有一定的增强免疫力作用。
参考文献
[1]万吉林.大蒜的主要化学成分及生理功能研究进展[J].现代食品,2022, 28 (21):10-14+21.
[2]GB 1886.272-2016《食品安全国家标准 食品添加剂 大蒜油》.
[3]郑昱,郑建芳.大蒜油对小鼠免疫功能影响的研究[J].河南医学研究,2016,25(1):15-17.