微生物检验的基本操作技术要点

微生物检验的基本操作技术要点

刘展志

成都市青白江区疾病预防控制中心，四川省成都市，610330

微生物检验是微生物检测员的主要工作，然而人们对于微生物检验总会感到有一种神秘感。下面为大家介绍一下微生物检验的技术操作要点。

一、无菌操作的环境

（一）无菌室

第一，无菌室的结构包括：缓冲间、更衣间与操作间；第二，无菌室的消毒与防污染。每天在使用前，需要紫外线照射至少0.5~1小时；每月使用新洁尔灭对地面与墙壁进行擦拭与消毒；每季度使用甲醛过氧乙酸、乳酸进行熏蒸，时间为2个小时，特殊情况下可以增加熏蒸的次数。第三，无菌室使用要求：（1）无菌室内要保持清洁，工作后使用2%-3%煤酚皂溶液进行消毒，对工作台面进行拭擦，不得存放和实验无关的物品。（2）无菌室要注意将门关紧，打开紫外线，比如利用室内悬吊紫外灯进行消毒，距离1.0m处使用30W紫外灯，照射时间大于30min。在使用紫外灯时，应注意不要在紫外线下直接操作，避免造成损伤，使用酒精棉球每隔两周对灯管进行轻轻拭擦，除去其灰尘与油垢，以减少紫外线的影响。（3）处理与接种食品标本时需要在无菌室操作，不要随意出入，若要传递物品，则可通过小窗传递。注意在无菌室内安装空调时，则应安装过滤装置。

（二）超净工作台

超净台的使用和保养：第一，需要保持风速稳定，并符合要求；第二，使用前应开启紫外灯，至少照射30分钟；第三，提前让超净台工作10－15分钟；第四，使用完毕后，使用70%酒精擦拭台面与台内四周。

（三）无菌器材

第一，灭菌器材包括：培养基、玻璃器皿、无菌衣等；第二，消毒器材包括：凳子、天平、工作台、试管架、手套等。第三，无菌间通常只要求放置转椅、无菌操作台等物品；无菌操作台上通常只要求放置以下物品：打火机、酒精灯、接种针、洗耳球、镊子、消毒棉球、油性笔、试管架、灭菌平皿、电子天平、灭菌吸管、培养基、250ml灭菌三角瓶、均质器等。

二、无菌操作技术

无菌操作技术就是在操作实验过程中，避免机体被微生物侵入，使无菌物品与无菌区域免受污染的管理方法与操作技术；在微生物实验中，无菌操作技术是一项基本技术，是确保微生物实验顺利进行的重要环节。

（一）无菌操作技术的内容

无菌操作技术包括两方面的内容：第一，打造无菌的培养环境，比如培养容器的灭菌、提供密闭的培养容器、培养基的灭菌等；第二，在操作与培养过程中，采取有效的措施，避免其它微生物的侵入，比如紫外线杀菌、超净台的消毒和检测、甲醛熏蒸、操作工具、操作方法等。

（二）无菌操作的原则

第一，在实施无菌操作时，一定要明确物品摆放的无菌区与非无菌区，接种时一定要戴工作帽与穿工作服，在进入无菌室前一定要用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦净双手；第二，在操作前20～30分钟，首先需要启动超净台与紫外灯，接种所使用的平皿、吸管与培养基等一定要进行消毒灭菌，打开包装没有使用完的器皿，不要再放置后再进行使用，金属用具应用95%酒精点燃烧灼3次或高压灭菌。避免用手直接拿取无菌物品，比如瓶塞等，一定要用消毒后的钳、镊子等；第三，取出吸管时，吸管尖部不要接触外露的部位，使用吸管接种于平皿或试管时，吸管尖不要触及平皿边或试管；第四，接种某种细菌或样品一定要在酒精灯前进行操作，接种样品或细菌时，吸管取出后与试管塞打开后，都要利用火焰消毒；第五，在接种细菌前接种针或接种环应通过火焰烧灼金属丝，必要时还需要烧到杆、环和针的连接处；第六，吸管吸取样品或菌液时，应使用橡皮头吸取，不要直接用口吸。在超净台内操作时应倾倒平板，并在开启与加盖瓶塞时，一定要使用酒精灯进行反复的烧。

小结

总之，微生物检验是一个十分严谨的过程，需要在无菌操作的环境中，采取无菌操作技术。了解无菌操作技术的内容，并掌握无菌操作的原则，才能使微生物检验的过程更加顺利，最终完成微生物检验的目标。