从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌

从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌

张素琴,冯丽珍

   武警内蒙古自治区总队医院检验科 （内蒙古 呼和浩特 010040）

[摘要]：目的 对从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌进行鉴定和药敏分析，为临床诊断和治疗提供参考。方法：按《全国临床检验操作规程》第四版方法进行接种培养涂片染色镜检，以法国梅里埃API Coryne条码鉴定菌种，K-B法做药敏试验。结果：该肺部感染患者痰培养分离出菌株，经菌落形态、染色镜检生化试验生物学性状符合隐秘杆菌属，API Coryne条码鉴定为溶血隐秘杆菌。药敏试验对喹诺酮类、碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类抗生素均敏感，对复方新诺明天然耐药。结论：溶血隐秘杆菌是引起肺部感染的病原菌，此菌对多种抗生素敏感，值得临床关注。

关键词：肺部感染  痰液  溶血隐秘杆菌 

Abstract: [Objective]To identify and analyze the susceptibility of Arcanobacterium haemolyticus in sputum of patients with pulmonary infection, in order to provide reference for clinical diagnosis and treatment. [Methods] According to the fourth edition of the National Clinical Test procedure, the smear staining was carried out. The strains were identified by API Coryne bar code in France by Merieux, and the drug sensitivity test was done by K-B method. [Results] The strains were isolated from sputum culture of the patients with pulmonary infection and identified as Arcanobacterium hemolyticus by colony morphology and biochemical test and staining microscope. The biological characters were conformed to Arcanobacterium hemolyticus by API Coryne bar code. Drug sensitivity tests for quinolones, carbapenems, Penicillins, cephalosporins, macrolides antibiotics are sensitive to compound Xinomin natural resistance. [Conclusion]Arcanobacterium haemolyticus is the pathogen causing pulmonary infection, which is sensitive to various antibiotics and deserves clinical attention.

Key words: pulmonary infection,  sputum,  Arcanobacterium haemolyticus

溶血隐秘杆菌,属于放线菌科，隐秘杆菌属，为兼性厌氧菌。 该菌可引起大龄儿童咽炎、伤口及软组织感染、骨髓炎、心内膜炎等[1]。国内溶血隐秘杆菌临床分离的报道极少，可见其作为病原菌引起严重会厌炎[2]和糖尿病患者膝关节炎性渗出[3]的报道。国外对溶血隐秘杆菌可引起咽炎、皮疹、肺炎、脑膜炎、脓毒症、盆腔脓肿[4]、特发性细菌性腹膜炎、泌尿道感染、无症状精液感染性不育均有报道。但是，在痰液中检出此菌报道罕见，本文由肺部感染患者经导管吸痰做痰培养中分离出溶血隐秘杆菌，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1临床资料：患者刘某某 女 69岁，2019年1月16日以急性上呼吸道感染收入院，既往史：患有脊髓空洞症，长期卧床并发褥疮，主诉：因受凉后出现咳嗽、咳痰、咽痛、可伴发热，听诊：双肺呼吸音清，双肺可闻及干鸣音及湿啰音，以右肺为著。CT扫描：双肺可见多发斑片状渗出，病灶分布广泛，边缘模糊，其内有支气管充气表现，纵膈内可见略大淋巴结，双侧胸腔少量可见水样密度影，以右侧为著，两侧肺门略大，双肺各级气道通畅。复查胸部CT：回报示双肺炎症，伴胸腔少量积液，右肺点状结节及纤维索条形成。诊断：双肺炎症双侧胸腔积液（少量）。常规检查：血常规：白细胞：10.8×10

9/L，中性粒细胞比率:80.0%，肝功能、肾功能、尿、便常规结果均正常，血沉89 mm/h↑,超敏C反应蛋白114.7mg/L↑。体温：38.4℃，咳大量白色黏痰，痰液粘稠不易咳出，经导管吸痰做细菌培养。分离出溶血隐秘杆菌，按药敏结果给予左氧氟沙星联合亚胺培南治疗，间断吸痰，经抗炎化痰一周后，体温恢复正常，血、尿常规正常，咳痰量少再次培养无致病菌检出，于2月1日痊愈出院。

1.1.2实验试剂及培养基：普通营养琼脂（批号171115）、麦康凯琼脂（批号171110）、药敏纸片（批号181119）均由杭州滨和生物有限公司提供，革兰氏染色液（批号417064）、抗酸染色液（批号417091）均由珠海贝索生物公司提供，血琼脂平板按照《实用临床微生物学检验与图谱》[1]方法配制，采用法国生物梅里埃公司提供API Coryne棒状杆菌鉴定系统。试剂与培养基均在有效期之内使用。标准金黄色葡萄球菌ATCC25923。

1.2方法

1.2.1按照《全国临床检验操作规程》第四版[5]进行无菌操作采集患者导管吸痰液，立即接种血琼脂平板置37℃5%CO2温箱培养24h观察菌落形态，再挑取纯培养单个菌落进行革兰染色、抗酸染色，接种营养肉汤管培养，通过CAMP反向抑制试验、多项生化试验及API Coryne条码鉴定菌种。

1.2.2分纯菌株参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）用血平板作纸片药敏试验。

2 结果

2.1样品分离培养：痰标本接种培养基经37℃24h 5%的CO2培养血琼脂平板菌落形态为灰白色、凸起、针尖大小，半透明有狭窄β溶血的菌落。48h菌落稍大，粗糙扁平，β溶血明显。麦康凯培养基不生长，普通MH琼脂不生长。肉汤呈絮状沉淀生长。

2.2菌株染色镜检形状：革兰氏染色呈阳性细长、不规则杆菌，24h培养细菌具棒状末端膨大，48h培养菌落涂片染色为断裂成短的不规则杆状或球状，革兰氏染色着色不均，见图（1）。抗酸染色：阴性。

2.3生化反应：O/F试验：F，触酶阴性，不水解明胶，硝酸盐还原试验、脲酶、七叶苷均阴性，乳糖阳性，碱性磷酸酶阳性，β-半乳糖苷酶阳性，杆菌肽耐药，CAMP抑制试验阳性（见图2）。API Coryne鉴定编码：6530361，鉴定结果为溶血隐秘杆菌，极好鉴定，T值1.0，可信度99.9%且仅一个鉴定选项。

                                               溶血抑制区

溶血隐秘杆菌

图1 革兰染色（1000×）                        图2 CAMP抑制试验阳性

2.4药物敏感试验：目前由于没有溶血隐秘杆菌药物敏感判断标准，参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）中链球菌药敏试验项目进行试验，结果见下表

药物敏感结果（K-B法）

分类药物名称   纸片含量/片抑菌折点（mm）判定

多肽类      万古霉素       30ug          24                 敏感

青霉素类    青霉素G10IU32敏感

头孢类      头孢唑林       30ug30     敏感

            头孢呋辛       30ug26     敏感

            头孢曲松       30ug30     敏感

            头孢吡肟       30ug30     敏感

头霉素类    头孢西丁       30ug26敏感

碳青霉烯类  亚胺培南       10ug30     敏感

氯霉素类     氯霉素  30ug                   22                 敏感

喹诺酮类     环丙沙星       5ug26 敏感

             左氧氟沙星     5ug23敏感

大环内酯类   红霉素         15ug       30敏感

林可霉素类   克林霉素2ug        30敏感

四环素类     四环素         30ug                   30                 敏感

磺胺类      复方新诺明1.25/23.75ug         24           天然耐药

3讨论

隐秘杆菌属有5种，其中溶血隐秘杆菌（Arcano-bacterium haemolyticam）、伯尔德隐秘杆菌（Arcano-bacterium bermardiae）和化脓隐秘杆菌（Arcano-bacterium pyogenes）与医学有关，该菌属因脂肪酸分析显示更接近放线菌属和棒状杆菌属[6]。溶血隐秘杆菌为兼性厌氧菌，初次分离应在5%CO2环境中分离，此菌生长缓慢，在痰液中更易与杂菌混合，难以分离，故临床检出率低。因该菌对多种抗菌素敏感，本例患者是在未使用抗生素之前由导管吸痰留取标本，进行培养，这样降低了受其他杂菌污染的影响，提高了阳性检出率，避免漏检，值得临床关注。

溶血隐秘杆菌菌落形态与棒状杆菌极相似，但在绵羊血平板上有狭窄的β溶血环，其溶血性没有β性溶血性链球菌明显，革兰氏染色呈纤维弯曲的阳性杆菌。杆菌肽耐药与A群链球菌相区别。CAMP正向试验B群链球菌、李斯特氏菌、棒状杆菌、厌氧芽孢梭菌能产生CAMP因子，促进金黄色葡萄球菌溶血素（溶血活性增强），两菌的交界处，溶血圈增大呈阳性反应。而此菌能产生磷脂酶抑制金黄色葡萄球菌，使两菌交界处溶血圈无或小，CAMP试验呈反向抑制。CAMP反向抑制为阳性也是溶血隐秘杆菌与其他隐秘杆菌的主要鉴别点[7]。

溶血隐秘杆菌引起咽炎、皮疹，高发于青少年（15-18岁），如不能充分治疗，感染后可加重为肺炎、脑膜炎和脓毒症[8]。本例为高龄女性患者，因脊髓空洞症长期卧床产生褥疮，免疫力低下，故易并发肺部感染，该患者在住院期间使用左氧氟沙星联合亚胺培南治疗并给予间断吸痰，经抗炎化痰治疗后痊愈出院。临床用药与本菌体外试验药敏结果符合，溶血隐秘杆菌的药敏试验对喹诺酮类、碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类抗生素敏感，对复方新诺明天然耐药[9]，虽然本文体外试验复方新诺明有一定大小的抑菌圈，但它属于天然耐药，故报告耐药，应引起临床重视。

参考文献：

[1] 陈东科, 孙长贵. 主编 实用临床微生物学与图谱[M]第一版.北京:人民卫生出版社,2011.

[2]陈威巍, 熊杰, 曾平,等. 溶血棒状杆菌致严重会厌炎一例报 道[J]. 解放军检验医学杂志, 2002, 1(2): 144.

[3] 赵豪莲, 李珍大, 张小卫,等. 糖尿病患者膝关节渗出液中分离出 溶血棒状杆菌l株[J]. 临床检验杂志, 2002, 20(1): 23.

[4] Van Loo IH, van den Wildenberg WJ,van Huijstee PJ,et al. Pelvic abscess caused by Arcanobacterium haemolyticum mimicking a soft tissue tumour [J].J Med Microbiol, 2007, 56(Pt 12): 1684-1686.

[5]尚红, 王毓三, 申子瑜. 主编 全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社, 2015:670-673.

[6]李林，陈亚宝，田凤喜等. 骨科患者切口感染分泌物中检出溶血隐秘杆菌一例并文献复习[J].海南医学，2011,22（9）：110-111.

[7]郭晓艳，康运凯. 溶血隐秘杆菌致糖尿病足部感染1例[J].河南医学研究，2018,27（21）：3907.

[8] Van der Eerden MM,de Graaff CS,Boersma WG,et al. Faryngitis met een holtevormende pneumonie veroorzaakt door Arcanobacterium haemolyticum [J]. Ned Tijdschr Geneeskd, 2006, 150(20): 1139-1142.

[9]Mackenzie A，Fuite L A，Chan F T，et al．Incidence and Pathogenicity of Arcanobacterium haemolyticum During a 2 － Year Study in Ottawa［J］．Clin Infect Dis， 1995，21(1) :177 －181．

作者简介：张素琴，本科，检验师，主要从事微生物工作。

通信作者：冯丽珍，本科，副主任技师，Fenglizhen631016@sina.com。