基因芯片核酸检测对G6PD缺乏症的诊断价值探讨

基因芯片核酸检测对G6PD缺乏症的诊断价值探讨

肖杰,王丽玲,胡荣,朱智楠,阮小洁,

广东省基因芯片工程技术研究中心，珠海赛乐奇生物技术股份有限公司，广东珠海519001

[摘要]目的：探讨基因芯片核酸检测方法对G6PD缺乏症患者进行基因检测的诊断价值。方法：选取接收的100份血样(阴性标本和阳性标本各50份)，分别使用基因芯片核酸检测(观察组)和高铁血红蛋白还原法(对照组)对血样进行检 测，最终用Sanger测序法评判结果。结果：观察组的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值、诊断符合率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：基因芯片核酸检测方法在诊断C6PD缺乏症时，灵敏度更高、特异性更好、准确率更好，值得在临床上进行推广。

[关键词]基因芯片;G6PD缺乏症；高铁血红蛋白还原法；Sanger测序法

DiagnosticValueofFluorescenceQuantitativePCRGeneDetectioninG6PDDeficiencyWANG

Heng-li,ZHONGZhi-juan(TheFifhAffliatedHospitalofSunYat-senUniversily,Zhuhai519001,China)

Abstract: Objective toexplorethediagnosticvalueofgene chipforgenedetectioninpatientswith G6PD deficiency.Method100bloodsamples(50fornegativeand50forpositivesamples)wereselectedfrom theundergrad- uatestudy,andthebloodsampleswere testedbygene chip(observationgroup)andethemoglobinreduc-  tion(controlgroup) respectively.finalevaluationofresultsbySangersequencing.ResultsThespecificity,sensitivity,negative predictivevalue,positivepredictivevalueanddiagnosticcoincidencerateoftheobservationgroupwereallsignificantlyhigher  thanthoseofthecontrolgroup(P<0.05).(Conclusiongene chiphashighersensitivity,betterspecificity  andbetteraccuracyinthediagnosisofC6PDdeficiency,whichisworthyofclinicalapplication.

KeyWords:Gene Chip; G6PDdeficiency; Methemoglobinreductionmethod;Sangersequencing

G6PD（hereditary glucose-6-phosphate dehydrogenase，中文名称：遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）缺乏症属于一种常见的遗传性酶缺乏病[1]。G6PD缺乏症是临床常见遗传性疾病，世界范围内患病人数为2亿人。中国属于发病率较高的区域之一，国内患病率为0.2%~44.8%[2]。我国分布规律呈“南高北低”的态势，长江流域以南，尤以广东、海南、广西、云 南、贵州、四川等地为高发区，个别地区在40%以上 [3]。G6PD缺乏症属于X染色体连锁不完全显性遗传，男性半合子酶活性呈显著性缺乏，女性杂合子酶活性变化范围较大，介于正常至重度降低之间[4]。由于G6PD缺乏症变异型很多，临床表现差异极大，传统常用的G6PD 缺乏症筛查方法用于临床筛查时临界值时不能明确诊断[5]。因此，寻找一种简便快捷、特异性高、灵敏度好的检测方法具有重要意义。本研究旨在探究基因芯片检测方法对于G6PD缺乏症患者的诊断价值。

1 材方与法料

1.1材料：选取珠海赛乐奇医学检验实验室自2022年10月～2023年2月接收的100份血样(阴性标本和阳性标本各50份)，入选本研究的血样均应符合以下的纳入排除标准。纳入标准：①阳性血样提供者经诊断是G6PD缺乏症患者；②阴性血样提供者为健康正常人，且无任何血液系统疾病；③血样提供者BMI值在18.4～28.6 kg/m²范围内。排除标准：①有先天性心脏病或其他血管疾病；②患有恶性肿瘤的患者；③有肝肾疾病的患者；④有其他血液系统性疾病的患者。阴性标本和阳性标本提供者的一般资料包括性别、年龄、BMI等比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1  G6PD缺乏症检出率（%）

1.2  仪器及试剂：ABI普通PCR仪；AU5800系列全自动生化分析仪；高铁血红蛋白还原实验MHBR试剂(0.0004M美兰和2.5%NaNO等比例混合)；珠海赛乐奇生物技术股份有限公司G6PD核酸检测试剂盒（基因芯片法）；广州奕新核酸提取试剂盒。

1.3  高铁血红蛋白还原法：取新鲜的静脉血0.9 ml，加入肝 素抗凝剂0.1 ml，充分混匀，低速离心10 min，取出后调整血细胞和血浆的比例为1:1后再次混匀，得到抗凝血。用移液 枪移取上述抗凝血50μl，并加入高铁血红蛋白还原实验MH-BR试剂50μl，充分混匀，在恒定温度37℃条件下放置3h, 后取出加入4.9 mL蒸馏水，混合均匀，2 min后，即显色。若颜色呈鲜红色，则是正常情况；若颜色呈棕色、紫色或者棕红色，则是缺乏G6PD。颜色与血红蛋白的还原率有关，正常人还原率≥75%，对于G6PD缺陷症患者来说，高铁血红蛋白还原率降低，呈现的颜色便不同。

1.4  基因芯片核酸检测: 使用广州奕新核酸提取试剂盒提取DNA，提取后的DNA若不能及时进行PCR扩增，则储存在-20℃冰箱。提取核酸进行PCR扩增，扩增后产物经过杂交，洗脱，TMB显色得到检测结果。

1.5  统计学分析：本研究获得的所有数据及资料均使用SPASS 19.0软件进行统计学分析，对数据及资料进行t检验，对数据的置信区间及数据之间是否具有统计学差异进行分析。导入数据样本，执行“分析-比较均值-单样本t检验”，一般设定置信区间为95%，确定之后分析结果，观察P值；P>0.05时，数据无差异，不具有统计学意义；当P≤0.05时，数据间存在显著性差异，具有统计学意义。

2 结果

观察组的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值、诊断 符合率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P≤0.05)，见表2。

表2观察组与对照组结果比较

3 讨论

G6PD缺乏症是一种遗传性酶缺乏病，我国华南地区发病率较高，寻找准确快速方便的检测手段对于临床治疗至关重要。本研究表明，基因芯片核酸检测是一种很好的检测手段，比临床传统的高铁血红蛋白还原法具有高特异性、高灵敏度、高阴性预测值、高阳性预测值和高的诊断符合率。因此，基因芯片核酸检测技术检测G6PD基因突变方法稳定、快速，在临床上推广可行。随着医学技术的不断发展，该技术具有检测灵敏度高，特异性好的优势，值得临床医生推广使用。

4 参考文献

[1] 周婧瑶，张钰，胡琦，等.四川地区新生儿 G6PD 缺乏症筛查及确诊 情况分析[J].中国妇幼健康研究，2020，31（2）：263-266.

[2] 杜姿岑.28 例肠病性肢端皮炎的临床与遗传学研究[D].川北医学院， 2019

[3] 刘晗，蒋玮莹.人类葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分子生物学研究进展 [J].国际遗传学，2009，32:18-22.

[4] 杜传书.蚕豆病病因发病机理探讨Ⅲ红细胞-6-磷酸 葡萄糖脱氢酶杂合子的研究[J].遗传学报，1974，1(1):

[5] 郭昭鹏，吴群燕，陈仕国，等.深圳地区育龄人群 G6PD 基因突变谱 特征分析[J].中国计划生育学杂志，2020，28（1）：18-21.