改良瑞氏吉姆萨快速染色液的配制及应用

改良瑞氏吉姆萨快速染色液的配制及应用

刘云鹏,刘承锦,蒋庆姣,刘江 ,银慧玲通讯作者

桂林优利特医疗电子有限公司  广西  桂林  541001

【摘要】目的：通过改良瑞氏吉姆萨染色液配方和方法实现一步快染；用于白带常规检测，确认染色效果及结果。方法：自配瑞氏吉姆萨染液，对360例白带样本采用常规染液和改良后染液检验，分析改良前后效果、结果差异。结果：改良瑞氏吉姆萨快速染色在滴虫、真菌、线索细胞及清洁度等，与常规瑞氏吉姆萨染色检测结果无显著差异（P＞0.05）。结论：改良瑞氏吉姆萨染色液在15-25s对白带样本进行染色，效果、结果较常规染液无显著性差异；改良染液操作便捷，利于使用。

【关键词】表面活性剂；瑞氏吉姆萨染色液；白带；

瑞氏吉姆萨染色是一种常用染色方法，可对血液、体液细胞染色检查，如对白带的染色检查【1】，是对妇科疾病常用的手段之一。

常规瑞氏吉姆萨染色流程为A液染色、B液染色、水洗，需要4-30min。本文在常规染剂上优化配方及流程【3-4】，对白带样本进行15-25秒快速染色，观测效果、检测结果与常规染色方法的差异。

1 材料与方法

1.1瑞氏吉姆萨试剂及染色方法

珠海贝索生物技术有限公司，批号20220216。

使用方法如下：

①白带于玻片上烤干或烘干，滴加染色A液(约0.5ml-0.8ml)覆盖整个标本染色约2min；

②加A液2-3倍量的缓冲液B液于A液上，两液混合，染色3-10min后水洗，干燥、镜检。

1.2改良瑞氏吉姆萨试剂及染色方法

改良试剂配制：

染液A配制：瑞氏吉姆萨染料 0.83g，甲醇0.5L，甘油50mL，曲拉通X-100 5mL，吐温-80 10mL；染料放乳钵内研磨至细粉末，加甘油、甲醇研磨，再加入曲拉通、吐温继续研磨，最后转移加甲醇定量，摇匀待用。 　　

缓冲液B液配制：1%KH2PO4 30mL；1/15M KH2PO4 73.5 mL，结晶紫0.5g，纯化水定量至1L。

使用方法如下：

①将A液与B液约按3:1混合，得到可直接使用混合染液。

②白带于玻片上烤干或烘干，滴加混合染液(约0.5ml-0.8ml)覆盖整个标本染色约15-25S后水洗，干燥、镜检。

1.3试验方法

选取2022年期间360例患者白带样本，均采用常规瑞氏吉姆萨染色与改良瑞氏吉姆萨快速染色后显微镜检查，并将检验结果进行对比分析。受检者平均年龄为（42.57±5.63）岁，平均病程（2.42±0.71）月，符合临床诊断标准【1】。本研究已通过伦理委员会审批，受检者自愿入组，临床资料完整。

1.4 观察指标

对比两种染剂成片率及对滴虫、霉菌、线索细胞、清洁度（含白细胞、上皮细胞、杆菌）等染片效果及检查结果。

1.5 统计学分析

应用 Wyn Enterprise,BI软件进行研究结果数据处理，计数资料采用(x±s）表示，行t检验；计数资料采用[n(100%)]表示，行x²检验。若P＜0.05说明存在对比意义。

2. 结果

360例受检者经对比检查，常规瑞氏吉姆萨染色效果时间影响大，后采取固定染色8min，染色成片率89%；细胞质染色清楚，浅紫红色；胞浆颗粒清晰；核浆染色细致；杆菌染色呈蓝色。改良的快速染色染色时间15秒、25秒效果无差异，成片率91%；细胞质染色呈紫红色，鲜艳，细腻；胞浆颗粒清晰，可区分；核浆染色细致；杆菌染色呈蓝紫色，轮廓清晰。

染色后，显微镜检查，常规瑞氏吉姆萨染色滴虫、霉菌、线索细胞等检出量、检出率分别为17、4.36%；102、26.15%；101、25.9%；316、80.13%。改良的快速染色滴虫、霉菌、线索细胞等检出量、检出率分别为17、4.36%；103、26.41%；107、27.44%；316、80.13%。

分析可得：两种染色法染色效果、检查结果无差异显著，改良的快染方法可行。

3.讨论

3.1 瑞氏吉姆萨染色法常用于血液、体液及组织染色，但存在染色时间长、操作不稳定等缺陷，在高速的全自动仪器设备中适用性不高。本文针对该缺点，从染色剂组分和方法上进行改良，应用在白带染色检查中起到了快速且良好的染色效果。

3.2 细胞染色是使染色剂透入被染物，采用添加单一的非离子型表面活性剂达到改良效果的方法有一些文献报道【5-6】。曲拉通X-100、吐温-80均属于非离子型表面活性剂，含亲水和亲油基团，具有降低表面张力，促进染色剂溶解、转化，增加细胞的渗透性，起助染剂的作用。本文综合考虑两种作用，改良两者配比，采用适量的曲拉通X-100可改善细胞通透性的特性，结合吐温-80对细胞的无毒性、促溶行，在染液中加入适当配比的表面活性剂来促使染剂快速进入细胞，达到快速染色的效果。增加结晶紫，并优化缓冲浓度增加细胞质、核浆的染色鲜艳度，改善染色效果。用前混合染剂使用，从而使染剂配比稳定，保障了成片率。

3.3瑞氏吉姆萨染色法也是白带检验的常用手段，可以检出病原体的类型和分布情况，例如滴虫、细菌、真菌等，为后续治疗提供依据

【2】。改良后瑞氏快速染色方法的检测结果与传统的瑞氏吉姆萨染色结果一致性良好，达到临床要求。但在实际应用中尤其是高通量的检验设备中，改良后的快速染色方法具有现实意义。

参考文献

[1]陈琼娣,李晶,李远诊.两种不同检测方法在白带检测诊断中的应用比较[J].实用医技杂志,2020,27(11):1466-1468.

[2]肖征,章京楠,曹正,等.对比快速染色法与革兰氏染色法对阴道炎的诊断价值[J].标记免疫分析与临床,2021,28(3):510-513.

[3]孟凡，靳宏辉.采用析因设计研究瑞氏-吉姆萨染色法的影响 因素[J].医疗卫生装备，2015年8月第36卷第8期:124-126.

[4]夏克明，周燕.瑞氏染色法中缓冲液对染色结果的影响[J].贵州医药，2007年5月第31卷第5期:449-450.

[5]顾萍，周航城.非离子表面活性剂在病理细胞学中的应用[J].中国临床保健杂志，2005年8月第8卷第4期:353.

[6]卢立军，眭翔，王一平，韩勇，粱晓俐.表面活性剂对结核杆菌染色效果的影响[J].临床与实验病理杂志，2001 Dec;17(6):538-539.