4种培养基监测口腔综合治疗台水路污染的比较研究

4种培养基监测口腔综合治疗台水路污染的比较研究

刘振华 ,陈永刚 ,杨怀义 ,范婷文 ,姜楠  ,李洋  ,杨福生 ,王海青 ,富大鹏

北京市中关村医院   北京市  海淀区100190

【摘要】目的：比较4种不同培养基检测口腔综合治疗台菌落总数结果的不同。方法：选取5台A-dec口腔综合治疗台作为研究对象，分别于消毒前后进行采样，用4种不同的培养基进行细菌培养，重复3次，进行细菌菌落计数。结果：生活饮用水标准检验方法推荐培养基、 医疗机构消毒技术规范推荐培养基、改良胰蛋白胨大豆琼脂培养基细菌培养结果无明显差异，与R2A培养基培养结果有明显差异。结论：几种培养基均可进行口腔综合治疗台水路菌落的检测，R2A结果明显更高，漏检率大大降低。

【关键词】培养基 口腔综合治疗台水路 细菌感染 感染控制

基金项目：海淀区卫生健康发展科研培育计划HP2021-12-20101

刘振华 北京市中关村医院口腔科 副主任医师 北京100190

陈永刚 共同第一作者 北京市中关村医院口腔科  主治医师 北京100190

杨怀义 中国科学院微生物所 主任/研究员 北京 100101

范婷文 中国科学院微生物所 助理工程师 北京 100101

姜楠 北京市中关村医院口腔科 主治医师 北京100190

李洋 北京市中关村医院口腔科 医师 北京100190

杨福生 北京市海淀区医院管理中心 副主任医师 北京 100088

王海青 北京市中关村医院 科教科  副主任医师 北京100190

富大鹏  通讯作者 北京市中关村医院  副主任医师 北京100190

口腔综合治疗台是口腔科日常诊疗中必不可少的设备之一，口腔手机、三用枪等外接设备在使用过程中经常密切接触患者的唾液、血液、龈沟液等，水路管道一旦被污染，可疑致病菌就能通过不同方式进入患者口腔，或形成气溶胶散发在口腔诊室的空气中，对医务人员和患者都是一种潜在的风险。由于口腔综合治疗台内部水路系统构造精密、复杂，且有生物膜的形成，难以彻底清洁与灭菌，为管路内病原微生物定居繁殖提供了条件[1, 2]。因此，对口腔综合治疗台水路细菌含量进行日常监测，是口腔科预防医院感染的重要环节[3-4]。

1. 实验材料
   1. 培养基

1. 生活饮用水标准检验方法推荐培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水定容至1L。
2. 医疗机构消毒技术规范推荐培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水定容至1L。
3. 改良胰蛋白胨大豆琼脂培养基：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，无水磷酸二氢钾2.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水定容至1L。
4. R2A培养基：酵母浸出粉0.5g，蛋白胨0.5g，酪蛋白水解物0.5g，葡萄糖0.5g，可溶性淀粉0.5g，磷酸二氢钾0.3g，无水硫酸镁0.024g，丙酮酸钠0.3g，琼脂15g，蒸馏水定容至1L。

    以上培养基PH均调至7.2±0.2。使用高压锅，121°C下高压灭菌15min。

1.2实验试剂耗材

9cm培养皿，500ml锥形瓶，无菌封口膜，7.5‰次氯酸钠消毒液，灭菌生理盐水，离心管15ml，酒精棉球。

1.3仪器设备

牙椅，超净台，恒温培养箱，高温灭菌锅，摇床，全自动菌落计数仪。

2. 实验方法

2.1实验对象

随机选取某医院口腔科诊室内的口腔综合治疗台Adec300牙椅 5台，使用年限3年，采集口腔手机、三用喷枪、洁牙机的相应出水口共3个采样点的水样进行细菌检测，根据Adec牙椅水路推荐维护保养说明[9]每月消毒一次，采集消毒前后的水样进行菌落检测，重复3次。

2.2消毒及采样方法

消毒在当日诊疗工作结束后进行，排空口腔综合治疗台内余水，摘下储水瓶，配置750mg/l次氯酸钠消毒剂，反复摇动5s后安装，操作牙椅冲洗开关，直到消毒液从手机管路中均匀稳定流出（大概15-20s），停留20分钟，操作冲洗开关，直到消毒液从系统中排出。

2.3检测方法

菌落的计数方法：以无菌操作方法，用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注已融化并冷却到45℃左右的培养基，旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀，均匀铺板于培养皿中，保证稀释样品后平铺后，每个培养皿的菌落数大于20cfu，不超过300cfu，进行菌落总数记录，用平皿只倾注培养基作为空白对照。

3. 结果

五台牙椅水路的不同培养基菌落数

不同培养基检测的牙椅出水口菌落数表

4. 讨论
   1. 未经处理的口腔综合治疗台水路中存在大量致病菌，包括假单胞菌、军团菌、结核分枝杆菌和埃希氏杆菌等，污染的水经口腔手机、三用枪、洁治器喷出形成气溶胶弥散到诊室空气中，使医务人员和患者面临被病原微生物污染的危险，故对口腔水路的日常监测以及采取相应的消毒措施势在必行。
   2. 洁牙机在停止的瞬间产生虹吸，将细菌吸入水路，防回吸的高速手机也无法完全避免回吸，三用气枪也存在同样的问题。Arvand[11]等报道连接器械的水路管线输出水中的军团菌数量显著高于漱口水。因此可以优先将三用枪、快速手机和洁牙机出水口采样点作为检测采样点。可以更加真实地反映口腔综合治疗台诊疗用水的污染情况。

校对报告

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参考文献

 [1] 江宁，徐春华，田靓，等. 上海市医疗机构口腔综合治疗台水污染情况调查[J]. 中国消毒学杂志， 2014,31(07):729-731.

[2] 沈瑾，苏静，孙惠惠，等. 牙科综合治疗台水路污染状况调查[J]. 中国卫生标准管理， 2014,5(08):53-55.

[3] 天津市市场和质量监督管理委员会. 口腔综合治疗台用水微生物标准[S].：天津市卫生和计划生育委员会， 2018.

[4] 北京市市场监督管理局. 口腔综合治疗台水路消毒技术规范[S].:北京市卫生健康委员会, 2019.