莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达的影响

莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达的影响

丁健，高月*，郑长民，张胜昌，顾东亚，黄德伦通讯作者

广西中医药大学， 广西  530200

【摘要】 目的：探讨莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达的影响。方法：实验设空白组及药物组，药物组以50μM莪术醇干预人肝癌Huh7细胞，空白组添加相同体积的DMSO，处理48 h后，提取各组RNA,经qPCR观察莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达的变化情况。结果：与空白组相比，药物组人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达明显降低（P＜0.05）。结论：莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达具有抑制作用。

关键词：莪术醇；人肝癌Huh7细胞；Oct4基因

原发性肝癌（primary liver cancer，PLC）目前是全世界六大常见高发癌症之一，它的致死率在所有癌症中排行第三位，仅次于肺癌和结直肠癌[1]。莪术醇作为广西莪术的主要成为之一，不仅具有活血化瘀的功能，其还具有一定的抗癌的功效，被广泛应用在治疗肝癌、胃癌、鼻咽癌、乳腺癌等恶性肿瘤的研究中[2]，但其在肿瘤治疗中的相关机制尚未明确，本实验以人肝癌Huh7细胞为研究对象，加以莪术醇加以药物干预，观察莪术醇对人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达的变化情况，现将实验情况汇报如下：

1. 材料与方法

1.1实验细胞 人肝癌Huh7细胞系购自于北京北纳创联生物技术研究院。

1.2主要试剂与仪器 胎牛血清（FBS， 04-007-1A），高糖DMEM（061055571A），DMSO（索莱宝，D8371-50ml）,10mM莪术醇（MCE，HY-N0104），RNA提取试剂盒（Promega，Z6010），反转录试剂盒（Promage，2790），QPCR试剂盒（Promage，A6001）。

1.3 细胞培养 人肝癌Huh7细胞模型诱导：将细胞接种到六孔细胞培养板中，密度为1000个细胞一个孔，使细胞悬浮在培养基中，培养7天，待细胞成直径1mm左右细胞球之后，进行传代，连续培养三代后。

1.4 实验方法 向诱导好的Hub-7肝癌干细胞加入莪术醇处理，终浓度为50μM，空白组添加相同体积的DMSO，处理48h。采用RNA提取试剂盒提取处理组和空白组的RNA，并进行反转录实验。具体实验方法根据试剂盒说明书进行。

引物：

2. 结果

与空白组相比，药物组人肝癌Huh7细胞Oct4基因表达明显降低（P＜0.05）。

Figure 1．50μM的莪术醇处理人肝癌Huh7细胞 48小时后Oct4的表达情况

3. 讨论

目前，对于肝癌的治疗手段主要有手术治疗、放疗、化疗、靶向治疗和中医药治疗等。但肿瘤的复发、转移以及耐药性仍然是癌症难以攻克的主要原因[3]。许多民族药能调控肝癌转移相关信号通路，直接或间接抑制微血管生成是目前治疗肝癌的有效措施之一。广西民族药莪术不仅具有活血化瘀的功能，其还具有一定的抗癌的功效，被广泛应用在治疗肝癌、胃癌、鼻咽癌、乳腺癌等恶性肿瘤的研究中[5]。基因Oct4在肿瘤干细胞中高表达，被看作是肿瘤干细胞的标志基因。本实验通过莪术醇处理人肝癌Huh7细胞后，干性基因Oct4的表达明显降低,说明莪术醇对人肝癌Huh7细胞在其干性方面具有抑制作用。该结果为后续莪术醇抗肝癌方面的进一步研究提供了一定的理论依据。

参考文献

[1] Llovet JM, Kelley RK, Villanueva A, et al. Hepatocellular carcinoma. Nature Reviews Disease Primers, 2021, 7(1): 6

[2] Hao W, Zheng L and Xin-xing P. Curcumol promotes the apoptosis of hepatocellular carcinoma HepG2 cells by regulating PI3K/AKT pathway. Central South Pharmacy, 2019, 17(01): 11-14

[3] Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin, 2021, 71(3): 209-249

[4] El Hout M, Dos Santos L, Hamaï A, et al. A promising new approach to cancer therapy: Targeting iron metabolism in cancer stem cells. Seminars in Cancer Biology, 2018, 53: 125-138

[5]马春兰, 张宝亮 and 张常虹. 莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响. 肿瘤学杂志, 2020, 26(07): 616-620

项目编号：2019-2021年广西一流学科建设开放课题（2019XK088）