ATP生物发光法在微生物检验中的应用研究

ATP生物发光法在微生物检验中的应用研究

黄欢    ,姚文珍

呼伦贝尔市疾病预防控制中心  内蒙古呼伦贝尔市  021000

摘要：在社会现代化发展中人们关注微生物污染，ATP上发光法基于各项理论和技术在实践中有较广的应用范围，此种研究方法通过实践不断完善，在具体检测中具有明显的优势。本次首先分析食品检验中现代生物技术的重要性，基于生物发光法理论进行概述，然后针对具体应用研究进行介绍，希望后续发展可以以此为基础。

关键词：ATP生物发光法；微生物检验；应用研究

一、现在生物技术在食品检验中的重要性分析

在对食品进行安全检验时，如果品质较高，可以保证食品提供的安全，在我国社会近几年的发展中对食品安全问题关注力度比较大，当前提出了各种现代化生物理论，在各种理论指导下现代生物技术广泛应用，运用领域逐渐扩展。同时，社会现代化发展中各项生物技术实现创新研发，在实际检验中以精准测试为基础，同时保证实验检测的安全环保性，目前生物技术应用在食品安全检验中比较适用。现代社会利用传统生物或者是食品检验技术不能保证食品的安全性，由此可以深刻认识到现代生物技术的发展需要。基于此本次研究主要是针对ATP生物发光法在微生物检验中的具体应用。

二、生物发光法基本概述

（一）应用原理

ATP生物发光法就是三磷酸腺苷生物发光法，在具体应用中，主要是通过荧光光束酶与mg2+的相互作用，依次是三磷酸腺苷得到活化，在产生荧光素后与酶相互结合，形成复合体后会释放焦磷酸。在整体结构氧化后会逐渐形成复合物，此时会导致二氧化碳被释放，在复合物激发状态下达到返回状态实现发光，此时会形成氧化荧光素。

（二）优缺点分析

ATP生物发光法在使用中操作比较简便，而且实际应用中速率非常快，检验过程中对各种物质具有足够的灵敏度，从上个世纪三磷酸腺苷生物发光法检验范围已经实现较大扩展，在实际检测过程中几分钟就可以获取结果，而且根据目前所知的微生物检测来看，其检测数量最快。分析其缺点主要是不能就微生物和非微生物进行有效判别，如果检验中存在特异性分布的微生物不能有效区分种类，同样在利用三磷酸腺苷生物发光法检测时，受样品或提取物影响会产生离子干扰，此时可能影响检测结果测定，在检验中影响发光作用，不能直接了解样品的特异性条件。

三、ATP生物发光法在微生物检验中的具体应用

（一）水中微生物检测

考虑到水基质特征，对水中微生物检测中酶活性受到影响比较小，目前三磷酸腺苷生物发光法检验应用比较多。有李成思、吴慧清等人检验饮用水的微生物含量，研究中利用三磷酸腺苷生物发光法，首先需要通过微滤膜技术直接过滤微生物，然后加入合适试剂，对实际发光值进行检测，通过实际操作对比数值，不同过滤膜孔径大小对内部细菌影响比较小，数值没有明显差别，分析中主要是了解到空间比较大的玻璃膜速度会较快。通过此项研究结果可知，可以使用较大孔径的过滤膜来操作，以此提升速率，增加操作的简便性。利用三磷酸腺苷生物发光法进行检验，操作比较简单，而且检验过程中成本比较低，可以针对具体状态显示微生物数量。

（二）乳品工业生产检测

李春燕和霍桂成等人利用ATP生物发光法研究牛乳制品微生物检测中，在具体应用研究中，需要准备好缓冲液首先把生牛乳进行稀释，按照20倍的比例稀释完成后通过设备抽取50ul进行细胞裂解处理，过滤膜上滴入分解剂，然后在均匀摇晃后进行过滤，然后把内部加入50ul反应剂，在经反复处理以后测量荧光数值。根据本项研究结果可知，三磷酸腺苷生物发光法检验与日常应用的方法在结果上具有一定的关系，根据对系数的分析，呈现出良好的线性状态，具有明显的相关性。

（三）肉类微生物检测

舒伯华、孙道临等人利用三磷酸腺苷生物发光法分析肉类微生物检测，根据此方面的相关研究指出，在肉类食品检测中利用三磷酸腺苷生物发光法，可能由于肉类食品自身存在的 ATP导致具体检测结果受到影响，所以利用ATP生物发光法进行肉类食品生物检测时，需要提前把样品细胞中存在的 ATP进行去除处理，在去除样品细胞中存在的APP时，需要选用合适浓度的混合液，通常情况下根据。研究需要会把tratonx-100与Apviase液体相互混合，浓度分别选用0.2%和0.15%的，除此之外还需要添加合适浓度的三氯乙酸，液体混合后进行摇匀振摇，处理时间控制在一分钟左右，然后利用专业设备对混合液进行离心处理，然后取用液体上清对肉类ATP进行检测，根据测量获得数值明确肉类细菌的ATP发光值，在整项研究中完成各项操作时间大约为一刻钟。如果对熟肉进行微生物检测，此时肉类中存在的ATP比较少，针对最后检测结果的影响比较小，所以对熟肉进行微生物检测时可以直接略过样品细胞ATP去除环节，直接对样品进行测定，完成整项操作流程时间会在5分钟以内。

（四）物体表面微生物检测

曹立荣和张伟等人主要是通过三磷酸腺苷生物发光法对餐具微生物污染情况进行分析，在研究中首先在餐具测定范围内滴入释放液体，然后利用无菌棉拭子进行涂抹，控制到测定范围内，整体面积明确具体数值。然后通过添加释放液的棉拭子来获取ATP数值，最后需要利用无菌棉拭子头部来提取ATP液点，把提取物质放在检测膜上，利用设备检测具体数值，把具体检测数值与国际通用标准检测中显示的菌群和总数进行对比。利用多种结果获得阳性概率，根据具体数值23.41%、25.51%、29.03%可知，菌群和数量与三磷酸腺苷生物发光法差异性不大。

目前会使用多种抗菌药导致耐药性增加，在进行微生物检测时敏感谱存在差异，临床进行检验需要选择合适的抗生素，而且如果可以快速获得结果更有实际价值。传统实验检验中要想获得培养结果需要较长时间，用时比较长导致获得敏感信息缺乏时效性。按照过去的医疗系统需要通过分子检验来获取色谱和基因，在联合处理中通过检测获得代谢产物，直接了解耐药性，长期研究发展实现进步。

总结

由以上论述可知，微生物检测中利用ATP生物发光法具有明显优势，现代食品加工中利用三磷酸腺苷生物发光法进行检测需要在现有检测技术上进行创新，在研究中选择合适的提取物，减少外界对检测结果的影响，加强此项技术的生物识别特异性分析，未来发展中人们需要根据此种研究方法应用问题进行改善，以此在更多领域得到推广应用。

参考文献

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