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[摘 要]通过查阅国内相关文献资料,归纳并总结了近年来降血压类中成药中非法添加化学药物的种类、危害、检测技术。为中成药非法添加化学药物的检测技术提供参考。国内科研工作者涉及使用的检测方法主要有:薄层色谱法、近红外光谱法、液相色谱法、液质联用技术和气质联用技术等。
[关键词]降血压类中成药; 非法添加; 检测方法
岛津SPD-16高效液相色谱仪紫外-可见检测器,采用岛津LC-16高效液相色谱仪器溶液传输单位;Sartorius BT25S十万分之一天平;KH-400B超声波清洗器;Water purifier实验室用超纯水机。
氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾均为中国食品药品检定研究院提供。乙腈(色谱纯) 甲醇(色谱纯) 磷酸(分析纯)。所测样品为市场购得的清脑降压片(陕西盘龙药业集团股份有限公司)。
色谱柱:岛津WondaSil C18-WR 5μm(4.6 I.D. ×150㎜);流动相:0.2%磷酸溶液-乙腈 75:25,等度洗脱,流速为1.0ml/min;室内温度:24℃,进样量:10μL;紫外检测波长:220nm。
精密称定氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾各15mg,加甲醇约2ml,超声10min,分别定容至10ml容量瓶中。其浓度约为1.5mg/ml。
临用时精密量取各对照品储备液1.0ml,加甲醇稀释至5ml容量瓶中,既得浓度为300μg/mg的对照品溶液。
精密量取上述储备液各1ml,混合并定容至5mL容量瓶中。
根据《中国药典》2015版 一部的方法,取清脑降压片10片,除去包衣,精密称定,研细,取约两片重量,精密称定,用70%乙醇25ml溶解,称重。超声处理60min,放冷,称重后用甲醇不足减失的重量。摇匀,滤过。取此溶液通过0.25μm滤膜,即得供试品溶液。
3.4 自制阳性供试品溶液
精密量取“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml与“ 3.2”混合对照品溶液1ml , 混合用甲醇稀释至5ml,即得自制阳性供试品溶液。
4.1.1HPLC特性
精密量取“3.2”下混合对照品溶液20ul,按“2.1”的色谱条件进行分析,氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾三种药品在220nm波长处均有良好吸收且分离度良好。
4.1.2 线性试验
精密吸取按“3.2”下方法制备的混合对照品溶液,稀释成一系列不同浓度的对照品溶液,进样20ul进行测定。以浓度(ug/ml)为横坐标,峰面积A为纵坐标,绘制标准曲线。结果见表1。
化合物 | 线性方程 | R² | 线性范围(μg/ml) |
1氢氯噻嗪 | y=81687x-179545 | 0.9984 | 30-350 |
2盐酸地尔硫卓 | y=49580x-66155 | 0.9982 | 30-350 |
3氯沙坦钾 | y=67305x-540121 | 0.9987 | 30-350 |
4.1.3 重现性
取混合对照品溶液连续进样6次,化合物氢氯噻嗪,氯沙坦钾,地尔硫卓的RSD分别为2.95%、2.63%、2.07%
精密量取按“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml,用甲醇稀释至5ml后,精密量取20ul,按“2.1”的色谱条件进行分析。
4.3.1 HPLC特性
精密量取“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml与“ 3.2”混合对照品溶液1ml , 混合用甲醇稀释至5ml,精密量取20ul,按“2.1”的色谱条件进行分析。经加样检测方法确定1,2,3三个峰即对应是氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾。
4.3.2 重现性
取“3.4”方法制备的阳性供试品,分别重复进样6次,各20 ul,测定峰面积,进行分析。得到氢氯噻嗪、地尔硫卓、氯沙坦钾的RSD值分别为2.99%、3.48%、3.60%
分别取按“3.1”制成的的三种供试品溶液各稀释5倍[1],与溶液[1]100uL和按“3.1”制成的临用对照品溶液75uL混合制成的溶液[2]进行回收率试验,进样测定。此[1]和[2]溶液浓度分别约为70μg/ml和190μg/ml,在测定的线性范围内。按标准曲线公式用峰面积计算回收率。结果三种对照药品1,2,3的回收率分别为101.7%、98.4%、99.5%。
紫外全波长扫描此3个化合物均在波长220nm处吸收良好,故选择220nm为检测波长。本实验曾使用0.2%磷酸:甲醇=75:25、0.2%磷酸:乙腈=7:3、0.2%磷酸:乙腈=8:2等流动相进行分析。但结果分离度不高或使用时间过长。经多次尝试,采用“2.1”下色谱条件进行测量,可以兼顾试验时间和分离度,在20分钟内完成测定且药品分离度良好。本实验仪器无柱温箱,因此将实验室温度调至24℃进行。由于中药制剂本身成分复杂,具有多种成分干扰。虽然重复性试验中部分数据的RSD值较大,但考虑到实际情况,本方法测定非法添加成分基本可靠。
参考文献:
[1]. 陈林等, 降压类中成药及保健食品中21种非法添加化学药物的快速检测与确证方法研究. 分析测试学报, 2016(08): 第937-942页.
[2]. 中成药与保健食品中违禁添加的种降压类化学药物的一从法检测.
[3]. 吴嫣艳, 曹玲与丁安伟, 降压保健食品中非法添加氢氯噻嗪的检测. 南京中医药大学学报, 2011(01): 第92-94页.
[4]. 李涛, 朱小红与林芳, GC-MS联用方法检测降压类中成药及保健食品中非法添加的化学药物. 药物分析杂志, 2010(11): 第2212-2215页.
[5]. 张小龙等, 中药及保健食品中非法添加状况分析. 中国药师, 2014(10): 第1749-1753页.
通讯作者:郭钰祺,女,199508,汉,四川省遂宁市,本科,药学初级,药师,研究方向:西药学, 924862411@qq.com