HPLC法测中成药中违法添加的3种降压类化学药品

HPLC法测中成药中违法添加的 3种降压类化学药品

张宁 1 郭钰祺 * 通讯作者 2

联勤保障部队第 943 医院 甘肃 武威 733000

1. 联勤保障部队第九四五医院 四川 雅安 625000
   
   

[摘 要]通过查阅国内相关文献资料，归纳并总结了近年来降血压类中成药中非法添加化学药物的种类、危害、检测技术。为中成药非法添加化学药物的检测技术提供参考。国内科研工作者涉及使用的检测方法主要有：薄层色谱法、近红外光谱法、液相色谱法、液质联用技术和气质联用技术等。

[关键词]降血压类中成药； 非法添加； 检测方法

1 仪器和试药

1.1仪器

岛津SPD-16高效液相色谱仪紫外-可见检测器，采用岛津LC-16高效液相色谱仪器溶液传输单位；Sartorius BT25S十万分之一天平；KH-400B超声波清洗器；Water purifier实验室用超纯水机。

1.2 试剂

氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾均为中国食品药品检定研究院提供。乙腈（色谱纯） 甲醇（色谱纯） 磷酸（分析纯）。所测样品为市场购得的清脑降压片（陕西盘龙药业集团股份有限公司）。

2 色谱条件

色谱柱：岛津WondaSil C18-WR 5μm（4.6 I.D. ×150㎜）；流动相：0.2%磷酸溶液-乙腈 75:25，等度洗脱，流速为1.0ml/min;室内温度：24℃，进样量：10μL；紫外检测波长：220nm。

3 溶液的配制

3.1对照品储备液

精密称定氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾各15mg，加甲醇约2ml，超声10min，分别定容至10ml容量瓶中。其浓度约为1.5mg/ml。

临用时精密量取各对照品储备液1.0ml，加甲醇稀释至5ml容量瓶中，既得浓度为300μg/mg的对照品溶液。

3.2混合对照品溶液的配置

精密量取上述储备液各1ml,混合并定容至5mL容量瓶中。

3.3 供试品溶液

根据《中国药典》2015版 一部的方法，取清脑降压片10片，除去包衣，精密称定，研细，取约两片重量，精密称定，用70%乙醇25ml溶解，称重。超声处理60min，放冷，称重后用甲醇不足减失的重量。摇匀，滤过。取此溶液通过0.25μm滤膜，即得供试品溶液。

3.4 自制阳性供试品溶液

精密量取“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml与“ 3.2”混合对照品溶液1ml ， 混合用甲醇稀释至5ml，即得自制阳性供试品溶液。

4 方法与结果

4.1 混合对照品溶液测定

4.1.1HPLC特性

精密量取“3.2”下混合对照品溶液20ul，按“2.1”的色谱条件进行分析，氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾三种药品在220nm波长处均有良好吸收且分离度良好。

4.1.2 线性试验

精密吸取按“3.2”下方法制备的混合对照品溶液，稀释成一系列不同浓度的对照品溶液，进样20ul进行测定。以浓度（ug/ml）为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

4.1.3 重现性

取混合对照品溶液连续进样6次,化合物氢氯噻嗪,氯沙坦钾,地尔硫卓的RSD分别为2.95%、2.63%、2.07%

4.2 供试品测定

精密量取按“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml，用甲醇稀释至5ml后，精密量取20ul，按“2.1”的色谱条件进行分析。

4.3 自制阳性供试品测定

4.3.1 HPLC特性

精密量取“3.3”下方法制备的供试品溶液1ml与“ 3.2”混合对照品溶液1ml ， 混合用甲醇稀释至5ml，精密量取20ul，按“2.1”的色谱条件进行分析。经加样检测方法确定1，2，3三个峰即对应是氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓、氯沙坦钾。

4.3.2 重现性

取“3.4”方法制备的阳性供试品，分别重复进样6次，各20 ul，测定峰面积，进行分析。得到氢氯噻嗪、地尔硫卓、氯沙坦钾的RSD值分别为2.99%、3.48%、3.60%

4.4 回收率试验

分别取按“3.1”制成的的三种供试品溶液各稀释5倍[1]，与溶液[1]100uL和按“3.1”制成的临用对照品溶液75uL混合制成的溶液[2]进行回收率试验，进样测定。此[1]和[2]溶液浓度分别约为70μg/ml和190μg/ml，在测定的线性范围内。按标准曲线公式用峰面积计算回收率。结果三种对照药品1,2,3的回收率分别为101.7%、98.4%、99.5%。

结果与讨论：

紫外全波长扫描此3个化合物均在波长220nm处吸收良好，故选择220nm为检测波长。本实验曾使用0.2%磷酸：甲醇=75:25、0.2%磷酸：乙腈=7:3、0.2%磷酸：乙腈=8:2等流动相进行分析。但结果分离度不高或使用时间过长。经多次尝试，采用“2.1”下色谱条件进行测量，可以兼顾试验时间和分离度，在20分钟内完成测定且药品分离度良好。本实验仪器无柱温箱，因此将实验室温度调至24℃进行。由于中药制剂本身成分复杂，具有多种成分干扰。虽然重复性试验中部分数据的RSD值较大，但考虑到实际情况，本方法测定非法添加成分基本可靠。

参考文献:

[1]. 陈林等, 降压类中成药及保健食品中21种非法添加化学药物的快速检测与确证方法研究. 分析测试学报, 2016(08): 第937-942页.

[2]. 中成药与保健食品中违禁添加的种降压类化学药物的一从法检测.

[3]. 吴嫣艳, 曹玲与丁安伟, 降压保健食品中非法添加氢氯噻嗪的检测. 南京中医药大学学报, 2011(01): 第92-94页.

[4]. 李涛, 朱小红与林芳, GC-MS联用方法检测降压类中成药及保健食品中非法添加的化学药物. 药物分析杂志, 2010(11): 第2212-2215页.

[5]. 张小龙等, 中药及保健食品中非法添加状况分析. 中国药师, 2014(10): 第1749-1753页.

通讯作者：郭钰祺，女，199508，汉，四川省遂宁市，本科，药学初级，药师，研究方向：西药学， 924862411@qq.com