高效液相色谱-串联质谱法测定保健酒中西地那非含量

高效液相色谱 -串联质谱法测定保健酒中西地那非含量

陈丽丽

鸡西市检验检测中心 黑龙江省 鸡西市 158100

摘要：建立高效液相质谱法测定酒中违禁药品西地那非含量方法。样品采用乙腈超声提取，经安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18分离，梯度洗脱，在LC-MS多反应检测MRM模式下进行定量分析。结果表明西地那非在0~500ng/ml范围内呈良好的线性关系，回收率97.2-105.4%，RSD(n=5) :1.7%。

关键词：高效液相质谱法 保健酒 西地那非

西地那非商品名为“万艾可”， 用于治疗男性勃起功能障碍，属于处方药。长期服用对人体具有一定危害，对患有心血管系统疾病、高血压、糖尿病患者的身体危害极大，严重者可致心肌梗死。

市场上保健酒品种多，2014年以来，湖北、广西多地就有酒厂因在保健酒中添加伟哥成分药物，称喝某品牌的一瓶125毫升的保健酒相当于吃两粒伟哥。检验保健酒的检验方法和质量控制标准尚不完善，导致一些保健酒企业铤而走险，钻不规范空子。”西地那非为处方药，在食品或保健食品等特殊食品中添加属于违法行为，必须予以打击。因此，建立一种准确、快速的测定方法，为市场安全监管工作提供有效的技术支撑。

1实验部分

1.1试药与仪器

1.1.1试药：甲醇/乙腈（HPLC级，默克公司）；乙酸铵（优级，国药集团化学试剂）；水（Milli-Q Advantage A10超纯水机制备超纯水）；西地那非标准物质（ Panphy chemicals corporation）

1.1.2仪器：液质联用仪 Agilent Technologies 6430 Triple Quad LC/MS

1.2仪器条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18 3.0×100mm 1.8um

波长230 nm；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；进样量：3μL；

流动相：甲醇+乙酸铵(0.1%乙酸)=35+65

扫描模式：多反应监测（MRM）ESI⁺

定量离子：475.2 定性离子：58.1 100.1 Frag(V)：190

1.3实验方法

1.3.1标准储备液的制备：

标准物质来源: Panphy chemicals corporation

精密称取10mg标准品置20ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即0.5mg/ml。

吸取上述0.5mg/ml 溶液1ml，用50%乙腈溶液稀释制50ml，即10μg/ml。

再吸10μg/ml 1ml用50%乙腈溶液稀释至20ml,即得每1ml含0.5μg的溶液。

1.3.2样品前处理

精密量取2ml试样置50ml量瓶中，加乙腈40ml,超声处理15min,冷至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀备用。吸取1ml上述溶液用50%乙腈稀释制50ml，摇匀备用。微孔滤膜（0.22μm）过滤上机。

2实验结果

2.1质谱条件的优化

根据待测物的化学结构，对待测物进行质谱参数优化。先优化电压，使母离子的影响最大，再产生子离子，通过优化碰撞能量使子离子的响应最大，得到MRM离子对及质谱采集参数。

多反应监测（MRM）质谱采集参数

2.2色谱条件的优化

按照流动相比例甲醇+乙酸铵(0.1%乙酸)=35+65，分离效果好，理论塔板数满足要求。通过实验发现，在流动相中添加0.1%乙酸，可以减少峰拖尾，优化色谱峰型。

标准品多重反应监测（MRM）总离子流图

2.3样品提取条件的优化

2.3.1本实验中，用乙腈作提取溶剂，超声15min,，回收率高。

2.3.2对于食品的非法添加药物监测，质谱法监测灵敏度高，高浓度对于待测物应将提取液进行稀释后检测。

2.4线性方程、线性关系及检出限

在选择的LC-MS条件下，采用选择的定量离子，选择一系列不同浓度的西地那非，在1ng/ml-800ng/ml范围内呈线性良好。线性方程y=546.2x-162.66。相关系数0.9997。以信号噪声比（S/N=3），计算出西地那非的检出限0.2μg /kg。

2.5 系统适应性

2.5.1方法精密度：在仪器最佳实验条件下，连续进行5次0.5μg/ml标液，结果表明重现性好， RSD为2.1%。

2.5.2分别称取样品3份，加入标准品，按照分析步骤进行操作。根据峰面积带入标准曲线并按照计算公式计算得（对照品+样品）测定值。进行回收率计算，结果表明回收率在97.2-105.4%。

2.6一级质谱定性分析

按照LC-MS质谱条件测定标准溶液和待测物质样液，在标准品出峰时间选择合适峰半峰宽积分，看是否存在与保准溶液出峰时间一致的定性离子，且定性离子的相对丰度与标准溶液的相对丰度一致，才可判断样品中是否存在对应的待测目标物。

2.7样品含量的测定

按照1.3.2样品前处理方法对10保健酒进行检测，采用比较供试品与对照品的色谱图、质谱图的方法进行定性分析，确定供试品中添加的化学成分。结果中有2批检测出非法添加西地那非。

3结论

目前市场中部分保健酒及其他保健食品中存在添加西地那非的现象，建立一种简单、快速、灵敏、准确地鉴定保健酒中是否添加西地那非的高效液相色谱串联质谱的分析方法。本方法 在ESI正离子采集模式下,采用LC/MS的多反应监测(MRM)对西地那非进行定量监测,采用外标法定量满足分析要求 。实验结果表明，样品中杂质对西地那非无干扰，峰形良好，结果准确，灵敏度高。该方法对将强质量管理，建立准确有效的违禁药物检测技术，保障身体健康都具有重要意义。

参考文献：

[1]康军，刘爱宁“补肾、壮阳”类中成药中违法成分枸橼酸西地那非的检测 实用药物与临床，2006,9（3）：178

[2] 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 批准件编号 2009030

[3]庞小峰，吕华冲，张怡红，等中成药及中药保健品中添加西地那非的快速检测方法 中国医院药学杂质，2008,28（8）：673-674