环状RNA circ0025847通过促进RNA结合蛋白QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖

(整期优先)网络出版时间:2021-11-07
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摘要目的探讨环状RNA circ0025847对结直肠癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法即时聚合酶链锁反应(real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测人结直肠癌细胞(HCT116,SW480)和人正常结肠上皮细胞(NCM460)中circ0025847和QK1的表达水平。CCK-8检测circ0025847和QK1对结直肠癌细胞增殖的影响。采用生物信息学方法筛选可与circ0025847结合的RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)。RNA pulldown和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验检测circ0025847是否与QK1结合。蛋白免疫印迹法(western blot)分析过表达circ0025847后QK1的表达水平。设置阴性对照组(NC组),circ0025847过表达组和circ0025847过表达组+ QK1抑制组,CCK8法观察结直肠癌细胞增殖。结果circ0025847在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为(1.01±0.05)、(0.49±0.08)和(0.45±0.10),QK1在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为(0.98±0.07)、(0.50±0.07)和(0.47±0.09),二者均在结直肠癌细胞中低表达。过表达circ0025847和QK1可抑制结直肠癌细胞的增殖。RNA pulldown和RIP实验证实circ0025847和QK1可直接结合。circ0025847可正调控QK1的表达(7 199.20±12.44 vs 3 889.80±11.03)。circ0025847通过促进QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖。结论circ0025847通过正调控QK1表达来抑制结直肠癌细胞的增殖,circ0025847可能是治疗结直肠癌的潜在作用靶点。