硫醚环化B螺旋肽对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

(整期优先)网络出版时间:2021-07-24
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摘要目的探讨硫醚环化B螺旋肽(thioether-cyclized helix B peptide, CHBP)对脓毒症导致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及其潜在机制。方法30只SPF级6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机(随机数字表法)分为三组:空白对照组、脓毒症致ALI组和CHBP预处理组(10 nmol/kg)。在ALI发生18 h后,通过免疫组化检测肺组织caspase-3阳性表达,通过免疫荧光检测肺组织TUNEL阳性率。体外培养小鼠肺上皮细胞(MLE-12)并分为对照组、脂多糖(LPS)组和CHBP预处理组(10 nmol/L)。刺激24 h后,ELISA检测细胞上清液的炎症因子水平,通过荧光TUNEL法检测各组细胞的凋亡比例以及用Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。使用Graphpad prism 7软件对数据进行单因素方差分析。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果LPS组小鼠出现明显ALI症状和肺组织病理改变。CHBP预处理组肺组织TUNEL阳性细胞数量(个/mm2)少于LPS组,差异有统计学意义[(22±2) vs (39.46±4.51),P=0.001]。CHBP预处理组肺组织caspase-3阳性细胞数(个/mm2)少于LPS组[(28.67±5.29) vs (52.87±3.76),P=0.029]。在体外实验中,相比LPS组,CHBP预处理明显抑制MLE-12细胞上清液炎症因子IL-6(pg/mL)[(70.64±5.59) vs (123.10±15.71),P=0.027],IL-1β(pg/mL)[(67.11±3.39) vs (100.70±7.61),P=0.007]和TNF-α(pg/mL)[(76.98±7.97) vs (138.50±13.12),P=0.007]的表达,抑制了凋亡相关蛋白caspase-3 [(0.085±0.063) vs (1.198±0.058),P=0.01]以及Bax[(0.562±0.026) vs (0.781±0.044),P=0.041]的表达,减少细胞凋亡,并且这一趋势与MLE-12细胞荧光TUNEL检测结果[CHBP预处理组(30.33±1.86) vs LPS组(45.00±2.88),P=0.006]一致。结论CHBP预处理可以减轻脓毒症导致的ALI,这一保护作用很可能是通过抑制炎症反应,减少肺上皮细胞凋亡实现的。