抗-M抗体对ABO血型鉴定与交叉配血试验的影响及处理

抗 -M抗体对 ABO血型鉴定与交叉配血试验的影响及处理

唐炳娣 叶志达 谢宁城

广州医科大学附属惠州医院 广东 广州 516002

【摘要】目的：观察探讨抗-M抗体对ABO血型鉴定与交叉配血试验的影响及处理。方法：选择2019年06月至2020年12月ABO血型鉴定正反型不一致及交叉配血不合的标本，筛选出用谱细胞鉴定为抗-M抗体阳性的标本，分析抗-M抗体对ABO血型鉴定与交叉配血试验的影响，并提出处理办法。结果：（1）30例患者中，分析血型，9例A型，7例B型，12例O型，2例AB型；30例RhD阳性。（2）免疫球蛋白类型检测显示，28例IgM型，2例IgG型；效价检测显示，抗M抗体阳性者IgM型抗体效价为1：1有6例，效价1：2有6例，效价1：4有8例，效价1：8有4例，效价1：16有2例，效价1：32有2例；IgG型抗体效价2例均为1:32。（3）4℃MM型与MN型检出性率100%，室温MM型检出性率100%，MN型漏检例数有4例，漏检率13.3%，37℃MM型漏检例数为10例，漏检率33.3%，MN型漏检例数为22例，漏检率73.3%。结论：抗-M抗体影响正反定定型不相符，主要是反定型细胞中存在有M抗原，不同程度地影响着反定型红细胞、O型红细胞凝集；交叉配血不合时，在4℃条件反应能有效避免漏检，37℃反应MN型杂合子易漏检。

【关键词】抗-M抗体；ABO血型鉴定；交叉配血试验

ABO血型鉴定准确性直接关系着交叉配血试验以及临床输血安全[1]。输血前，血型血清学检测时，ABO血型正反定型不相符或者交叉配血不合现象频繁发生，其中，不规则抗体所致ABO血型正反定型不相符、交叉配血不合比较常见[2]。在临床输血中，单纯性的抗-M引起的免疫性输血反应比例很低。但抗-M血清的反应强度和反应阈存在较大的个体差异，导致其对血型抗体鉴定上造成的影响可能大于实际临床风险[3]。本项目为了探讨抗-M抗体对ABO血型鉴定与交叉配血试验的影响以及处理，选择30例对象进行研究，现总结报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

以2019年6月至2020年12月为时间段，选择其中30例正反定型不相符或者交叉配血不合血标本作为对象，其中，男性13例，女性17例，年龄最小0岁，最大82岁，平均年龄（41.27±4.97）岁。？？（因更改了年龄范围，如何计算平均年龄？，需要改一下）。

1.2试剂及设备

本项目检测中所需试剂及设备包括：（1）抗A、抗B、抗M以及抗N血型定型试剂（由上海血液生物医药有限责任公司提供）；（2）抗D（IgM+IgG）血型定型试剂（由长春博德生物技术有限责任公司提供）；（3）抗人球蛋白微柱凝胶检测卡、不规则抗体检测试剂、ABO反定型试剂红细胞及ABO、RhD血型定型卡(以上均由长春博讯生物技术有限责任公司提供)；（4）抗体鉴定谱（由荷兰三昆试剂有限公司提供）；（5）2-巯基乙醇（2-mercaptoethanol，2-Me）（由上海血液生物责任有限公司提供）；（6）孵育器、专用离心机（由长春博研科学仪器有限责任公司提供）。

1.3血型血清学检测方法

采集5ml EDTA-K2抗凝全血标本，按照3500r/min标准离心处理5min，分离血清，采用血型血清学方法检测ABO、RhD血型，不规则抗体筛查以及特异性鉴定，对检出特异性抗体的血标本完成免疫球蛋白类型与抗体效价测定。

1.3.1 ABO、RhD血型鉴定以及交叉配血试验：采取微柱凝胶法全自动血型分析仪，完成ABO正反定型与RhD血型鉴定，ABO血型正反定型不相符的情况时，进一步采取盐水试管法予以ABO血型复检。采取微柱凝胶检测法完成交叉配血试验，用专用离心机离心后判读结果。

1.3.2筛查不规则抗体与特异性鉴定：被检测血清与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号抗体筛查细胞分别放置于4℃、室温以及37℃条件下在抗人球蛋白微柱凝胶检测卡及盐水介质中进行反应，同时设计自身对照孔排除冷凝集素和自身抗体的干扰，结果呈阳性的标本在反应较强的条件下通过1-16号谱细胞鉴定抗体特异性，并记录各反应条件下OMM型、OMN型、ONN型红细胞的反应情况，检出特异性抗体的标本再检测红细胞上相应抗原呈阴性与否。

1.3.3检测免疫球蛋白类型及IgG型抗M抗体抗体效价测定：被检测血清通过2-Me裂解IgM型抗M抗体之后，再和OMM型红细胞加到抗人球蛋白微柱凝胶检测卡上于37℃条件下反应15min，离心并观察结果及记录；被裂解的血清确定为IgG型抗M抗体后再通过生理盐水倍比稀释，于 37℃反应条件下通过OMM型红细胞对其抗体效价进行检测。

1.3.4 IgM型抗M抗体抗体效价测定：被检测血清通过生理盐水倍比稀释，基于4摄氏度与37摄氏度条件下，分别通过OMM型红细胞对IgM型抗M抗体抗体效价进行检测。

2结果

2.1 本组30例患者中，血型分布如表1所示。

表1：30例患者的血型分布状况

备注：30例患者血型鉴定中与含有相应抗原的反定型红细胞、O型红细胞均表现出意外凝集反应。

2.2免疫球蛋白类型检测

本组30例患者免疫球蛋白类型检测显示，28例IgM型，2例IgG型。

2.3效价检测

30例通过效价检测发现，抗M抗体者IgM型抗体效价为1：1有6例，效价1：2有6例，效价1：4有8例，效价1：8有4例，效价1：16有2例，效价1：32有2例；IgG型抗体效价2例均为1:32。

表2：抗M抗体阳性者抗体效价分布状况

2.4不同反应条件下的检出情况

4℃MM型与MN型检出性率100%，室温MM型检出性率100%，MN型漏检例数有4例，漏检率13.3%，37℃MM型漏检例数为10例，漏检率33.3%，MN型漏检例数为22例，漏检率73.3%。

表3：抗-M抗体与MM型、MN型抗原在不同反应条件下的检出情况

3讨论

1927年，Landsteiner与Levine发现了MNS血型系统，为第二个被发现的人类红细胞血型系统，其复杂性仅仅次于Rh血型系统^[3]。MNS血型系统以红细胞膜上涎糖蛋白A（glycophorin A，GPA）与GPB为主要基因表达产物，其中，前者可根据第1与第5氨基酸差异形成M抗原以及N抗原，后者则可根据第48位氨基酸不同而形成S抗原与s抗原，故而称为“MNS”血型系统^[4]。MNS血型系统比较复杂，且具有多态性特征，共涉及43个抗原，主要有M抗原、N抗原以及S抗原与s抗原^[5]。MNS血型系统抗体产生不同于ABO血型系统抗体，其不会规则恒定出现再缺乏相应抗原者血清中，是导致ABO血型鉴定困难以及交叉配血不合的常用不规则抗体^[6]。故此，检测MNS血型系统同种抗体具有重要的临床意义。本项目中30例患者，28例IgM型，2例IgG型，提示抗M抗体大部分是自然产生的IgM抗体，少数是由于妊娠或者输血免疫所致的IgG抗体。比较来说，4℃反应活性更大，37℃以及抗人球蛋白介质中的活性比较低，通常不会导致输血反应，不过其属于不规则抗体，在所致血型鉴定困难中所占比例较高。30例患者MNS血型系统同种抗体在ABO血型反定型以及交叉配血试验中和含有相应抗原的反定型红细胞、O型红细胞均表现出意外凝集反应，但是与不含有相应抗原的红细胞并没有出现凝集反应，提示该抗体是导致ABO血型鉴定困难以及交叉配血不合的重要原因。患者红细胞标本与抗-M和抗-N反应，结果与抗-M未发生凝集，与抗-N发生凝集，凝集强度大约2+，此现象表明红细胞无M抗原存在。抗-M抗体对配血存在影响，当患者与MM型、MN型抗原的红细胞进行常规交叉配血时，MM型抗原在盐水法与凝集胺法都可出现配血不相合，但杂合子MN型抗原却出现配血相合，进一步说明了抗-M抗体与杂合子MN型抗原反应在常规操作中易漏检。面对这种情况，我们在实践操作中，一定要注意分析抗-M抗体，血液保存温度控制2-6℃，对于低温麻醉状态下的手术患者，若是由此类抗体的话，激活补体，引起溶血反应，故此，在筛查出抗-M抗体的情况，建议选择不含相应抗原的血液成分，保证输血安全。

综上分析，抗-M抗体影响正反定定型不相符，主要是反定型细胞中存在有M抗原，不同程度地影响着反定型红细胞、O型红细胞凝集；交叉配血不合时，在4℃条件反应能有效避免漏检，37℃反应MN型杂合子易漏检。实际操作中，为了保证血型鉴定结果真实准确，遇到有抗-M抗体时需改变常规反应条件，以提高临床输血的安全性与有效性。

【参考文献】

[1]李丹, 张勇萍, 杨世明,等. 35例MNS血型抗体特异性及对ABO血型鉴定与交叉配血的影响[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2016(12).

[2]张勇萍, 安宁, 杨世明,等. 76例Lewis血型抗体血清学特征及其对输血相容性检测的影响[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2018, 034(003):270-272.

3. 吴擘颈，姚顶根，戎瑞明.MNS血型系统同种抗体70例临床特征分析[J]，中华医学杂志，2013，93（8）：592-593.

[4]李清, 古丽扎尔, 李志强. 吸收放散试验在高效价冷凝集素致ABO血型鉴定不符及交叉配血不合的应用[J]. 中国医药科学, 2012, 2(22):118-120.

[5]周雪莹, 陈宣宇, 于笑难. 同种抗体合并模拟同种特异性自身抗体血清学特点分析及配血对策[J]. 中国输血杂志, 2019, v.32(11):94-97.

[6]刘婧婧, 王艳侠, 甘佳. MNS血型系统同种抗体的分布、性质与免疫史研究[J]. 北京医学, 2015, 37(11):1111-1113.

[7]王玲, 向东, 陆琼,等. 同种及类同种特异性抗体检测结果与临床沟通的必要性探讨[J]. 国际输血及血液学杂志, 2012, 35(4):318-319.

作者简介：唐炳娣，女，1987年10月出生，大学本科学历，民族：汉，籍贯：广东惠州，

研究方向：主要从事医学检验研究；

职称：主管技师

科室：输血科。

单位名称：广州医科大学附属惠州医院

[基金项目]惠州市科技计划项目（2020Y252）

[作者简介]唐炳娣（1987-），女，主管技师，主要从事临床检验研究。

[通信作者]唐炳娣 E-mail：395226233@qq.com