酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析

酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析

古丽娜尔.哈布赛提1阿尔孜古丽.木塔力甫2

新疆阿勒泰地区吉木乃县人民医院检验科新疆836899

新疆自治区人民医院检验中心新疆830001

[摘要]目的：探讨酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果中的常见影响因素。方法：随机选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，将所有患者的血标本分为4个组，抗凝组与不抗凝组，静置水浴时间20分钟组与静置水浴时间40分钟组，每组各40个标本，都对其进行酶联免疫吸附法和胶体金标法检测，比较各组标本的检测结果。结果：抗凝组与不抗凝组比较，不抗凝组的阳性率低于抗凝组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05），静置水浴40分钟组的阳性率明显低于静置水浴20分钟组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05）。结论：标本的血清状态及静置时间的长短可以影响酶联免疫吸附法检测乙肝五项的结果，检测过程应严格按照标准步骤进行，以保证检测结果的准确性。

关键词:酶联免疫吸附法；乙肝五项；影响因素

【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0430-02

乙肝五项是医院常做的检测项目，其表面抗原HbsAg是患者感染乙肝病毒的标志物，是最常用的感染指标[1-2]。ELISA（酶联免疫吸附法）是临床实验室常用的检测手段，常用于检测血标本，具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点[3-4]。但是在检测过程中，由于工作人员自身或外界原因，容易在加样、孵育、洗板、显色、终止等各个环节的细节出现问题，从而导致最后检测结果的假阳性，影响结果的准确性[5]。因此分析其影响因素并采取相应的处理措施显得十分必要。本文就标本的血清状态及静置时间两个方面在ELISA检测乙肝五项中的影响进行分析，旨在总结经验避免再次出现问题，内容如下。

1资料与方法

1.1一般资料选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，其中男性89名，女性71名，平均年龄在30.17±4.95岁。所有标本在检测前的一般情况无明显差异，无统计学意义（P>0.05），可以进行研究。

1.2检测方法所有患者均在清晨空腹进行血标本的采集，抽取10ml静脉血，分别平均放置于5个试管内，为1份血标本。将160份血标本随机分为4组，分别为抗凝组、不抗凝组、静置水浴20分钟组和静置水浴40分钟组，每组各40份标本。抗凝组标本中加入低分子肝素钠，与不抗凝组标本静置水浴20分钟；静置水浴两组标本分别加入抗凝剂低分子肝素钠，一组置于37℃水浴箱内20分钟，一组放置40分钟。标本准备工作完成后，开始进行手工加样，将酶复合物进行稀释，完成后加入血清及阴阳性的对照。经过大约1小时的孵育过程，应用洗板机进行洗样，完成后加入底物，30分钟避光反应完成后加入终止液，进行酶标仪比色检测吸光度并判断结果。探讨检测过程中出现假阳性的原因。

1.3结果评价ELISA结果判断标准：当A值≥阴性对照平均值×2.1时，结果为阳性，反之为阴性；胶体金标准法结果判断标准：红色质控线和反应线同时出现，结果为阳性，只出现红色质控线，结果为阴性。当两种方法同时判断结果为阳性时，则标本检测报告为阳性，两种方法同时为阴性时，则标本检测报告为阴性。

1.4统计学方法通过检测将所获得的数据集中归类，录入数据库。运用统计学软件：SPSS16.0，对所获得的资料进行统计学分析。计量资料用（`x±s）表示，并用t检验；计数资料用X2检验；P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

采用ELISA检测法，抗凝组标本的阳性率明显高于不抗凝组，差异明显，具有统计学意义（P<0.05），见表1。静置水浴20分钟组的阳性率明显高于静置水浴40分钟组，差异明显，具有统计学意义（P<0.05），见表2。ELISA检测法的敏感性（89％）高于胶体金标准法（85％），但其特异性（93％）低于胶体金标准法（98％）。

3讨论

乙肝是一种常见的传染病，如不及时治疗，会逐渐发展成为肝硬化甚至肝癌[6]，严重影响患者的生命健康，造成严重的后果。因此选择一种及时有效的检测方法进行确诊，尽早的为患者实施治疗具有十分重要的意义。ELISA检测法作为常用的检测方法，常常在操作过程中由于各种原因引起误差，造成检验结果的不准确，为临床诊断带来难度[7-8]。

本研究中，抗凝组的假阳性率明显高于不抗凝组，主要与标本中含有纤维蛋白有关，可能的原因是标本发生严重溶血或者离心不彻底，造成操作过程中不能进行彻底的洗涤，影响了结果的准确性[9]。静置水浴时间短的阳性率高于对照组，说明标本的静止时间越长，其检测结果的阳性率越低，严重影响ELISA的检测结果。其原因可能是离心后，标本中的过氧化物酶的细胞成分以及纤维蛋白的含量不同，这些物质会粘附在酶标的反应孔内，从而影响检测结果的准确性[10]。为避免检测结果的误差，可以采取以下措施：（1）采集标本室要注意避免出现严重的标本溶血，血清标本要给予抗凝处理，方便标本进行彻底离心；（2）确保血块浓缩，使标本中的活性物质失活，降低异物的存在，避免出现假阳性；（3）进行离心时，加大离心速度，延长离心时间，避免受到红细胞和纤维蛋白的影响；（4）标本保存时间不宜过长，尽量在20分钟内进行，避免抗原或者抗体的免疫活性降低。

综上所述，本研究表明标本的血清状态及标本静置水浴时间是影响酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果的因素，但是该检测方法操作过程复杂，步骤繁多，每个细节都可能会因为人为或者外界的原因而造成结果的误差，因此应该加强对检测人员的技术水平和业务素质的培训，在操作过程中严格按照标准步骤进行，尽量避免由于人为因素而造成结果的误差。对于提高酶联免疫吸附法检测乙肝五项的结果准确性，仍然需要长时间的临床研究。

参考文献：

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[6]王淑春.酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗体阴性而电化学发光法检测阳性二例报告[J].山西医药杂志,2011,40(10):1042-1043.

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[8]王宁.285例HBV-DNA感染者的血清学检测情况分析[J].黑龙江医学,2014,38(4):433-434.

[9]王淑春.酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗体阴性而电化学发光法检测阳性二例报告[J].山西医药杂志,2011,40(19):1042-1043.

[10]Basu,A.,Leong,S.S.J..Developmentofanenzyme-linkedimmunosorbentassayanalyticalplatformforrefoldingyielddeterminationofrecombinanthepatitisBvirusX(HBx)protein[J].AnalyticalBiochemistry:AnInternationalJournalofAnalyticalandPreparativeMethods,2011,418(1):155-157.