徐晓丽杨晓丽王庆才(山东省泰安市中心医院消化内一科271000)
【摘要】目的通过检测胃癌患者血清和胃癌组织中8-OHdG的水平,探究8-羟基脱氧鸟苷在胃癌的发生和发展中的作用。方法选取2010年7月至2011年1月泰安市中心医院住院均经病理确诊的胃癌患者30例,慢性胃炎患者15例。正常对照20例,来自健康人群志愿者。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定研究对象血清中的8-OHdG的水平,同时采用免疫组化SP法检测研究对象胃组织中8-OHdG水平,并分别对胃癌患者与正常对照组血清8-OHdG水平以及胃癌患者与慢性胃炎及正常对照组胃组织8-OHdG表达情况进行比较。结果胃癌组织中8-OHdG的表达状况与胃癌组织的组织分化程度密切相关,在高中分化腺癌中,8-OHdG的表达情况明显低于低分化的腺癌(p<0.05)。患者胃癌组织中8-OHdG的表达与胃癌患者的性别、年龄无明显相关(p>0.05)。结论8-OHdG的水平变化可能与胃癌的发生发展有关,提示血清8-OHdG可能为辅助胃癌诊断的重要血清学标志物。8-OHdG与胃癌组织的分化程度、临床分期、浸润胃壁的深度以及是否伴有淋巴结转移等状况密切有关,可作为病理活检中辅助标志物判断胃癌病变。
【关键词】8-羟基脱氧鸟苷胃癌氧化损伤
胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,死亡率在恶性肿瘤中居第二位,其死亡率仍呈上升趋势,严重威胁人类健康,对我国国民经济造成重大负担[1]。先前大量研究表明,胃癌的发生发展是一个非常复杂的过程,它涉及多方面的因素,同时是一个多阶段的过程。各项基础及临床研究显示,环境因素,机体微量元素的失衡及幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染等均在胃癌的发生发展中扮演重要的角色。其中亚硝酸盐食物的过多摄入,抗氧化剂如维生素类的摄入过少均可促进胃癌的发生,加速胃癌的发展。
胃癌的发生是一个多阶段、进行性过程,通常经历了慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、腺癌等阶段。环境化学致癌物质的广泛存在和微量元素的失衡与胃癌的发生发展密切相关。动物实验和流行病学研究[2]证实亚硝酸盐等环境致癌物是胃癌的重要病因之一,致癌物质导致机体氧化损伤发生,产生大量的活性氧自由基,通过攻击损伤DNA或细胞,导致基因突变和产生癌症,当前的研究表明[3],氧自由基引发的脂质过氧化损伤在肿瘤的发病机理中占有重要的地位。随肿瘤标志物的提出及大规模的临床应用,血清学指标预测癌症的发生已成为一种简单有效投入少且无创的检测手段。本研究通过检测胃癌患者血清和胃癌组织中8-OHdG的水平,探究8-羟基脱氧鸟苷对于胃癌的作用性。
1.材料与方法
1.1基本资料
选择2010年7月至2011年1月期间泰安市中心医院的住院胃癌患者,共30例,其中男性16例,女性14例,平均年龄为50.86±9.0岁,其临床诊断均经过手术病理证实。慢性胃炎患者15例,其中男性8例,女性7例,平均年龄48.3±10.5岁,其临床诊断均经胃镜活检病理证实。正常对照组20例均来自健康志愿者,其中男性12例,女性8例,平均年龄42.53±7.32岁,均为身体健康者。
1.2分组方法
入选的胃癌病例均为试验时期首次诊断,未接受过治疗的病例。胃癌的诊断标准:参照目前国际上通用WHO肿瘤学专家委员会提出的诊断标准(2010),确诊依据是组织病理学检查结果。胃癌的病理分期诊断标准:参照2010年国际抗癌联盟(UICC)颁布的国际TNM分期标准。胃癌患者的排除标准:患者存在自身免疫性疾病、心脑血管疾病、肝肾疾病、糖尿病等疾病,术前应用放化疗治疗,或存在以下情况(长期服用或正在服用非甾体类消炎药、前列腺素及类似物、激素类药物、免疫抑制剂、长期酗酒)以及不能配合的患者。正常对照组入选标准:调查对象25~60岁,无良恶性肿瘤病史,无家族性肿瘤病史,无职业性致癌物接触史,无吸烟、酗酒等不良生活习惯,无自身免疫性疾病、心脑血管疾病、肝肾疾病、糖尿病等疾患,近几天未进行剧烈的体育活动,正常饮食的健康人。
1.3统计学处理
研究数据用统计学SPSS16.0软件包进行分析,采用卡方检验对计数资料进行统计分析,采用t检验对计量资料进行统计分析,检验水准以p<0.05有统计学意义。
2.结果
2.1各组一般资料比较
两组研究对象在性别、年龄、各项指标(AFP、CEA、CA19-9、CA74-2)的血清学检查结果方面差异无统计学意义。胃癌患者的8-OHdG结果明显高于正常对照组(见表1)。
表1各研究对象的临床资料及血清学检查结果
研究对象的临床资料及实验室结果采用均数±标准差的形式表示。
2.2与胃癌研究相关资料比较
胃癌患者、慢性胃炎患者及正常对照组的患者胃组织中8-OHdG表达情况见表2。与慢性胃炎及正常对照组胃组织相比,胃癌组织中8-OHdG的表达水平明显升高,且他们之间的差异均具有明显的统计学意义(P<0.05)。而慢性胃炎患者的胃组织与正常对照组胃组织相比,组织8-OHdG的表达水平明显升高(P<0.05)。
8-OHdG的表达情况与所研究胃癌组患者肿瘤临床分期的关系见表3。在9例I-II期胃癌患者中,阳性表达8-OHdG的比率为44.4%,在21例III-IV期胃癌的患者中,阳性表达8-OHdG的比率为90.5%,8-OHdG在III-IV期胃癌患者中的表达阳性比率明显的高于I-II期的胃癌患者,两者之间相互比较,可见明显的统计学差异(p<0.05)。
8-OHdG的表达情况与所研究的胃癌患者胃壁浸润深度的关系见表4。8-OHdG在18例研究的穿出浆膜的胃癌患者组中的阳性表达率为83.3%,在12例未浸透浆膜的胃癌患者中阳性表达率为66.7%,8-OHdG的阳性表达与所研究的胃癌患者胃壁浸润深度呈正相关(p<0.05)。
8-OHdG的表达情况与所研究的胃癌组织病理分型的关系见表5。8-OHdG在17例低分化的腺癌患者中的阳性的表达率为94.1%,在13例高中分化的腺癌患者中阳性表达率为53.8%,8-OHdG在高中分化的腺癌中的阳性表达率明显低于低分化腺癌中的阳性表达率,且两者的差异具有明显统计学意义(p=0.009,p<0.05)。
表2胃癌患者、慢性胃炎患者及正常对照组的患者胃组织中8-OHdG表达情况
3.讨论
机体存在清除活性氧和自由基的抗氧化体系,包括酶系和非酶系两大类。酶系主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽转硫酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、铜蓝蛋白等;非酶系主要包括维生素C、E、A、微量元素硒及谷胱甘肽等含巯基化合物[4]。8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)是羟自由基在特定碳原子位置上与脱氧鸟嘌呤核苷酸残基结合并进一步氧化生成的,是机体DNA氧化损伤的生物标记物。机体氧化损伤产生的8-OHdG经内切酶切除造成碱基脱落,导致机体DNA链断裂而使机体核苷酸的完整性和结构受到破坏。
机体8-OHdG的水平受多种因素的影响,包括年龄、吸烟、石棉环境及相关的工作[21]、剧烈的体育运动、自然界固有的和外界异常增多的辐射、大气颗粒物和具有挥发性的有机物等因素都能影响机体8-OHdG的表达[5]。本组研究对象在性别、年龄、各项指标(AFP、CEA、CA19-9、CA74-2)的血清学检查结果方面无差异。但检测胃癌患者的8-OHdG结果明显高于正常对照组。说明8-OHdG水平能够在一定程度上反映机体修复损伤的能力,也是间接反映机体抗氧化损伤的能力。
本组胃癌患者、慢性胃炎患者及正常对照组的患者胃组织中8-OHdG含量对比,胃癌组织中8-OHdG的表达水平明显升高,结果差异均具有明显的统计学意义(P<0.05)。而且慢性胃炎患者的胃组织比正常对照组8-OHdG的表达水平明显升高(P<0.05)。自由基产物持续堆积可以导致生物大分子物质的损伤,包括脂质、DNA、RNA和蛋白质等。有研究表明[6],胃部慢性炎症可能通过多种机制促进肿瘤的发生和发展。当机体处于氧化应激状态时,其自身的不良状态即可加重细胞和大分子物质的氧化损伤,包括DNA损伤等。在富含炎症细胞和多种生物因子的微环境中,已经存在DNA损伤或已经发生基因突变的增殖细胞会持续性失控性地增殖,最终导致癌变。
本研究结果证明8-OHdG的表达情况与所研究胃癌组患者肿瘤临床分期、胃壁浸润深度、病理分型有着关系。在本组高中分化腺癌数据分析,组织8-OHdG的表达情况明显低于低分化的腺癌(p<0.05),胃癌组织中8-OHdG的表达状况与胃癌组织的临床分期、浸润胃壁的深度以及是否伴有淋巴结转移等状况也有关系,且其之间差异具有明显的统计学意义(p<0.05)。另有研究证明[7],胃癌患者癌组织中hOGG1mRNA的表达明显增加,说明8-OHdG在胃癌的发生发展过程中发挥了重要的作用。
通过研究,我们认为8-OHdG的水平变化可能与胃癌的发生发展有关,并提示血清8-OHdG可能为辅助胃癌诊断的重要血清学标志物。并可作为病理活检中辅助判断胃癌病变的重要手段。另外在胃癌组织的组织分化程度、胃癌组织的临床分期、浸润胃壁的深度以及是否伴有淋巴结转移等临床诊断方面提供相关依据。
参考文献
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[7]NishibayashiH,KanayamaS,KiyoharaT,YamamotoK,MiyazakiY,YasunagaY,ShinomuraY,etal.Helicobacterpylori-inducedenlarged-foldgastritisisassociatedwithincreasedmutagenicityofgastricjuice,increasedoxidativeDNAdamage,andanincreasedriskofgastriccarcinoma.JGastroenterolHepatol2003;18:1384-1391.