注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素检查方法的建立

注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素检查方法的建立

高淑梅费丽娜

高淑梅费丽娜

吉林市中西医结合肛肠医院132001吉林市食品药品检验所132001

摘要:目的通过对注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素凝胶法试验，建立注射用过氧化碳酰胺的细菌内毒素检查法。方法采用《中国药典》2010年版二部附录中检测细菌内毒素的凝胶法，即采用细菌内毒素工作标准品与鲎试剂产生凝集反应的机理,判断注射用过氧化碳酰胺中细菌内毒素的限量。结果鲎试剂灵敏度在0.5EU/ml时,注射用过氧化碳酰胺稀释到浓度1.4mg/ml时，对细菌内毒素测定无干扰。结论使用细菌内毒素凝胶法检测注射用过氧化碳酰胺中的污染内毒素是可行的，可以用细菌内毒素凝胶检查法代替家兔热原检查法。

关键词:细菌内毒素鲎试剂注射用过氧化碳酰胺

注射用过氧化碳酰胺为白色结晶或结晶性粉末，易溶于水，遇强氧化物或还原物可分解。本品主要成分为碳酸酰胺过氧化氢。临床用于治疗各种低氧血症以及急性缺氧引起的胎儿窘迫。目前该品种中的内毒素检查为家兔热原试验法，不仅费时、费力、干扰因素多，而且结果的重现性差；采用检测细菌内毒素的凝胶法，则可避免以上缺陷，直接检测出供试品中污染的内毒素；本实验报道用凝胶法检测注射用过氧化碳酰胺中的细菌内毒素的可行性研究。

1材料与方法

1.1材料细菌内毒素工作标准品(180EU/支,中国药品生物制品检定所生产,批号150601－200965)。鲎试剂灵敏度0.5EU/ml,湛江博康海洋生物有限公司生产(批号:051020)。细菌内毒素检查用水,湛江安度斯生物有限公司生产,(批号:050960)。注射用过氧化碳酰胺,0.1g/支,多菲制药（中国）有限公司生产（批号：20110601、20110802、20110906）。

1.2方法

1.2.1复核鲎试剂灵敏度的标示值(λb)将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解,并在快速混匀器上充分混合15分钟,将工作标准溶液稀释成2、1、0.5、0.25λb等系列浓度,每一浓度稀释液平行做4管,结果符合规定,按下式计算鲎试剂灵敏度测定值(λc)。λc=lg-1（ΣⅩ/4）X为反应终点浓度的对数值。λc=0.5EU/ml。

1.2.2细菌内毒素限值(L)的确定参照注射用过氧化碳酰胺说明书按公式:L=K/M,式中K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量,注射液的K=5EU/（kg•h），每小时人体可以接受的最大内毒素剂量为(5Eu/kg・hr)×60=300Eu/hr(人平均体重按60kg计算)，而注射用过氧化碳酰胺人用每次最大剂量为1g，溶于500ml葡萄糖注射液或氯化钠注射液中，葡萄糖注射液或氯化钠注射液的内毒素限值为0.5Eu/ml，按每小时250ml输入人体计算，则葡萄糖注射液或氯化钠注射液带入的内毒素最大量为125Eu/hr，故注射用过氧化碳酰胺允许带入的内毒素最大量为300-125=175Eu/hr。因为注射用过氧化碳酰胺每小时注入人体量为500mg，所以注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素限值为175/500=0.35Eu/mg。

1.2.3供试品的最大有效稀释倍数(MVD)计算以鲎试剂灵敏度λb=0.5EU/ml为基准，根据公式MVD=cL/λb=2mg/ml×0.35/0.5=1.4倍。即供试品浓度稀释为1.4mg/ml时，可进行试验。

1.2.4干扰实验取3个批号的注射用过氧化碳酰胺,用细菌内毒素检查用水分别稀释成2.0mg/ml、1.8mg/ml、1.6mg/ml、1.4mg/ml系列浓度,将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λb系列浓度与鲎试剂进行干扰实验。实验表明，只有在供试品浓度稀释为1.4mg/ml时,鲎试剂灵敏度为0.5EU/ml时对测定无干扰，Es、Et都在0.5λ～2λ范围内。见表1。

表13批注射用过氧化碳酰胺干扰实验结果

根据上述试验条件测定数据,从3批供试品中随机各抽取2支,按批次分为3组,将供试品稀释成浓度为1.4mg/ml的溶液。每组取4支0.1ml鲎试剂,分别加入0.1ml细菌内毒素检查用水，再分别加入上述稀释好的供试品溶液各0.1ml,其中2支为供试品平行管;另2支加入细菌内毒素工作标准品0.1ml为供试品阳性管;阴性对照管加细菌内毒素检查用水0.1ml;阳性对照管加细菌内毒素工作标准品0.1ml。将各管中溶液轻轻混匀后塞严,垂直放入(37±1)℃恒温水浴锅保温60min。将试管从水浴中轻轻取出,缓慢倒转180度观察管内凝胶,不变形不从管壁滑落为阳性(+),反之为阴性(-),结果见表2。

3讨论

由于注射用过氧化碳酰胺有一定的刺激性,在进行热原实验时常引起家兔的躁动,容易对实验结果产生影响。故本研究的目的就是参照药品细菌内毒素检查的实验设计对以细菌内毒素检查法取代热原检查法的可行性进行实验研究,并建立注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素检查方法,为该产品的质量标准转正提供数据支持。经过多次稀释抗干扰试验、调整鲎试剂的灵敏度,试验结果显示注射用过氧化碳酰胺稀释成浓度为1.4mg/ml时，鲎试剂灵敏0.5EU/ml可消除其干扰。

参考文献:

1.《中国药典》2010年版二部:(附录)ⅪE

2.《中国药品检验标准操作规程》2010年版