高效液相色谱法测定利膈丸中大黄素的含量

高效液相色谱法测定利膈丸中大黄素的含量

金善玉王蕾蔡春实玄妮灵

金善玉王蕾蔡春实玄妮灵(吉林省延边州食品药品检验所吉林延吉133000）

【摘要】目的建立测定利膈丸中大黄素含量的方法。方法高效液相色谱法（HPLC法）。结果大黄素进样量在19.16μg～191.6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y=5093.1X-10339，r=0.9999，平均回收率为100.5%（RSD=0.7%）。结论该方法结果准确、简便快速、重现性好、可用于该制剂的质量控制。

【关键词】利膈丸大黄素高效液相色谱

利膈丸由莱菔子（炒）、大黄（酒炙）、甘草等十七味药材组成，全方有气滞不舒，胸膈胀满，脘腹疼痛之效。利膈丸现行标准《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二册》中没有含量测定项，笔者增用高效液相色谱法对利膈丸中的大黄素进行含量测定，以提升该制剂的质量控制标准。

1仪器与试药

日本岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；UV-型紫外检测器；大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0756—200009）；CQX25-06超声波清洗器（功率220V，50KHZ），甲醇为色谱醇，水为超纯水，其它试剂均为分析纯；利膈丸由吉林省白城市多邦药业提供，批号20051003，2005102，20050801。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液（80∶20）；检测波长：254nm；柱温：35℃；流速：0.8ml/min；进样量：5μl，按大黄素峰计理论板数不低于3000。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含大黄素5μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备：取本品，剪碎，精密称定1g，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml水浴蒸干，加10%盐酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷30ml，置水浴中加热回流1小时，冷却，酸液用三氯甲烷振摇提取3次，每次10ml合并三氯甲烷液，置水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液制备：取不含大黄的诸药，按利膈丸制备工艺制成不含大黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验：取供试品、大黄素对照品及阴性对照溶液，分别注入液相色谱仪测定，样品中其它组分的色谱峰达到基线分离，阴性对照品无干扰。（见图1）

图1

2.3.2线性关系考察：取浓度为9.58μg/ml的大黄素对照品溶液，分别精密吸取2、4、6、8、10、20μl注入高效液相色谱仪测定，以对照品进样量为横坐标，吸收峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程Y=5093.1X－10339，r=0.9999。结果表明进样量在19.16μg～191.6μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.3.3精密度试验：供试品溶液连续进样6次，测得大黄素峰面积的RSD=0.2%，表明精密度良好。

2.3.4重复性试验：取同一批号供试品6份，按2.2.2项制备供试品溶液，测定。各测得含量的RSD=0.9%，表明重复性良好。

2.3.5稳定性试验：供试品溶液常温保存，分别在0、3、6、9、17、24h间隔测定，结果大黄素峰面积的RSD=0.6%，表明24h内稳定性良好。

2.3.6加样回收试验：取同一批号供试品6份，样品量约为供试品溶液制备方法的一半量，精密加入大黄素对照品，按供试品溶液制备方法操作，测定大黄素的含量，计算回收率，结果见表1。

表1大黄素回收率试验结果

加样回收试验表明，本方法回收率为100.5%，RSD=0.7%，方法准确可行。

2.4样品的含量测定取3批样品各3份（批号为20051003，2005102，20050801），按上述方法测定含量，大黄素含量的平均值分别为1.605，1.532，1.519mg/丸。

3讨论

3.1用HPLC法测定利膈丸中大黄素的含量，所用流动相和检测波长均参照中国药典[1]，检测波长254nm，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（80：20），分离效果好，且出峰时间合适。

3.2供试品水解用盐酸效果更佳，用硫酸水解蒸干时样品变黑。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：328，540，604，603，613,638.