葡萄球菌的检验方法

葡萄球菌的检验方法

朱春英(黑龙江省甘南县查哈阳农场职工医院162116

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)17-0228-01

葡萄糖菌属的细菌广泛分布于自然界，空气、水、土壤、物品、人和动物体表及与外界相通的腔道中皆有存在，葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，可将其分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等多种。金黄色葡萄溏球菌是临床常的致病菌，能产生多种毒素和酶，引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓炎症等疾病，污染食品后可产生肠毒素，引起葡萄球菌肠毒素中毒。

1检验程序

金黄色葡萄球菌检验程序。

2培养基及试剂

胰酪胨大豆肉汤；7.5％氯化钠肉汤；血琼脂平板；Baird-parker琼脂平板；肉浸液肉汤；灭菌生理盐水；免血浆；3.8％枸橼酸钠溶液1份加兔全血4份，混合静置，血细胞下沉，即可得到血浆进行试验。

3检验步骤

3.1增菌培养法

3.1.1检样处理称取25g固体样品，吸取25ml液体样品，加入225ml来菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。1）增菌及分离培养：吸取5ml上述混悬液，接种于7.5％氯化钠肉汤或胰酷胨大豆肉汤50ml培养基内，置30℃±1℃温箱培养24h，转种血平板和Baird-parker平板，36℃±1℃培养24h，挑取金黄色葡萄球菌可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。2）形态：本菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌体罗小，直径约为0.5～1μm。3）在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，也有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，地为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落,但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色淡些,外观可能粗糙并干燥。

3.1.2血浆凝固酶试验吸取1:4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀,放36℃±1℃温箱或水浴内,每30min观察一次，观察6h，如呈现凝固,即将试管倾斜或代表团时，呈现凝块者，被认为阳性果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。

3.2直接计数方法

3.2.1吸取上述110混悬液，进行十倍递交稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1ml，分别加入3个Baird-parker平板，每个平板接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml，然后用灭菌L棒涂布整个平板,如水分未被充分吸收,可将平板放在36℃±1℃温箱1h,等水分发后反转平皿置36℃±1℃温箱培养。

3.2.2在3个平板上点数周围有混浊带的黑色菌落，并从中任选5个菌落，分别接种血平板，36℃±1℃培养24h后进行染色镜检、血浆凝固醇试验，步骤同增菌培养法。

3.2.3菌落计数将3个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。