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【摘要】目的:对甲型HINI流感病毒实时荧光定量PCR快速检测及其临床意义进行探讨分析。方法:选择2017年7月至2018年6月间甲型H1N1流感患者100例作为此次实验检测对象,应用实时荧光定量PCR技术检测患者发病48小时后及恢复期血浆、咽拭子、下呼吸道分泌物中甲型H1N1流感病毒核酸情况。结果:发病后48小时100例患者咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸均阳性;40例重症患者中下呼吸道分泌物甲型H1N1流感病毒核酸阳性23例;40例重症患者中血浆甲型H1N1流感病毒核酸阳性15例。结论:实时荧光定量PCR方法能够对甲型H1N1流感病毒感染进行快速检测,作为重症患者的重要标志之一的血浆甲型H1N1流感病毒核酸检测具有一定临床意义。
【关键词】甲型H1N1流感病毒;实时荧光定量PCR;血浆;快速检测
[Abstract]objective:toexploreandanalyzetherapiddetectionandclinicalsignificanceofreal-timefluorescencequantitativePCRforinfluenzaa(HINI)virus.Methods:100patientswithinfluenzaa(H1N1)fromJuly2017toJune2018wereselectedasthetestsubjects.Real-timefluorescencequantitativePCRtechnologywasappliedtodetectthenucleicacidstatusofinfluenzaa(H1N1)virusinplasma,pharynxswabandlowerrespiratorytractsecretion48hoursaftertheonsetandrecoveryperiod.Results:allthe100patientswithpharyngealswaba(H1N1)influenzavirusnucleicacidwerepositive48hoursafteronset.In40severecases,therewere23casesofpositivenucleicacidofinfluenzaa(H1N1)virussecretioninthelowerrespiratorytract.Plasmaa(H1N1)virusnucleicacidwaspositivein15severecases.Conclusion:real-timefluorescencequantitativePCRcanbeusedforrapiddetectionofinfluenzaa(H1N1)virusinfection.Asoneoftheimportantmarkersofseverepatients,plasmaa(H1N1)influenzavirusnucleicaciddetectionhascertainclinicalsignificance.
[Keywords]a(H1N1)influenzavirus;Real-timefluorescencequantitativePCR;Plasma;Rapiddetectionof
当前实时荧光定量PCR技术广泛应用于甲型H1N1流感病毒核酸检测中,其具有敏感、快速、特异的优势。依据呼吸道病毒侵袭特点,早期病变局部病毒浓度较高,病情进展过程中血液中会侵入病毒,形成毒血症,所以应用实时荧光定量PCR技术对血液中甲型H1N1流感病毒核酸进行检测,有利于病毒血症的临床监测,为医生判断疾病严重程度提供依据[1]。本研究选择甲型H1N1流感患者100例作为检测研究对象,对其开展实时荧光定量PCR检测,现报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选择我市流感监测定点医院2017年7月至2018年6月间收治的甲型H1N1流感患者100例,患者均满足HIN1流感诊断标准,实验室确定咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸阳性,其中40例重症患者满足重症与危重病例诊断标准。其中包括女46例、男54例;年龄范围5~43岁,平均(32.2±2.5)岁。
1.2方法
1.2.1采集标准发病后48小时、恢复期采集患者咽拭子,同时取1ml外周血,加入乙二胺四乙酸二甲抗凝。应用真空吸引术吸取40例重症患者下呼吸道分泌物,同时进行外周血液标本采集。在零下4℃冰箱中保存咽拭子标本,离心血液标本获取血浆,在零下70℃冻存,24小时内检测。
1.2.2实验室检测选择江苏硕世生物科技股份有限公司提供的双荧光探针、甲型H1N1流感病毒(2009)核酸检测试剂盒。应用磁珠提取法提取下呼吸道分泌物、咽拭子、血浆中核酸。扩增的循环参数:逆转录反应50摄氏度30分钟,预变性95摄氏度5分钟,预扩增1个循环;变性95摄氏度10秒钟,退火、延伸及检测荧光55摄氏度40秒钟,扩增45个循环。FAM和VIC通道为检测通道,前者为H1N1RNA信号,后者为甲型流感病毒RNA信号[2]。
1.3数据处理
应用Microsoftoffice2016版Excel软件对本次研究数据进行统计分析,其中计数资料用n或%表示。
2结果
2.1结果判断
Ct>38或无数值样本为阴性,Ct≤35为阳性,35<Ct≦38需重复检测。
2.2发病后48小时甲型H1N1流感病毒RNA阳性率
100例咽拭子标本经实验室确认甲型H1N1流感病毒RNA检测结果全部为阳性,重症患者和轻症患者咽拭子中病毒RNA阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05);下呼吸道分泌物病毒RNA检测结果为阳性的气管插管重症患者23例;100例血浆中结果为阳性15例,全部为重症患者,重症患者阳性率37.5%,与轻症患者血浆病毒RNA阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)。详细数据见下表1。
表1:发病48小时后甲型H1N1流感病毒RNA阳性率[n(%)]
3讨论
甲型H1N1流感为临床常见传染病,对于该型病毒人类缺乏免疫力,在各种因素影响下甲型H1N1流感病毒阳性患者会具有不同的临床表现、预后,对于其病情进行较难预测[3]。实施荧光定量RT-PCR技术当前被广泛应用于基因表达定量检测,其具有敏感度高、程序结束后无需处理等优势[4]。本研究应用该技术检测下呼吸道分泌物、咽拭子、血浆中甲型H1N1流感病毒RNA,并对不同标本病毒RNA检测结构预测病情进行探讨,结果显示甲型H1N1流感重症、病情进展的重要指征之一就是血浆中病毒RNA阳性。
实时荧光定量RT-PCR检测显示,发病后48小时、恢复期轻症患者血浆中病毒RNA均为阴性,而重症患者发病后48小时血浆病毒RNA具有37.5%阳性率,恢复期阳性有2例。通常情况下流感病毒在血浆中很少能检测到,提示甲型H1N1流感的重症及预后差重要标志包括血浆中H1N1病毒RNA阳性[5]。临床研究认为,可通过甲型H1N1流感患者康复后血浆输注对重症甲型H1N1流感感染者进行治疗,但需检测供体血浆H1N1核酸,以保证生物安全[6]。
综上所述,实时荧光定量PCR方法能够对甲型H1N1流感病毒感染进行快速检测,重症患者的重要标志之一就是血浆中甲型H1N1流感病毒核酸阳性。
参考文献:
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