探讨临床体外诊断试剂性能验证方案的建立

探讨临床体外诊断试剂性能验证方案的建立

刘广亁

（宁阳县中医院检验科山东宁阳255000）

【摘要】目的：参考《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》（YY/T1258-2015）和《临床化学体外诊断试剂（盒）》（GB/T26124-2011）标准对四川新健康成生物股份有限公司的同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）进行性能验证，探讨临床体外诊断试剂性能验证方案的建立，确保正确选择产品。方法：选择2016年1月—6月在本院健康体检的志愿者血清作为待检样本，通过对该试剂的试剂空白、分析灵敏度、准确度、批内精密度和测定范围的检测，对结果综合分析，建立体外诊断试剂性能验证方案。结果：结果显示，试剂空白吸光度≥1.7222，试剂空白吸光度变化率为0.0050；分析灵敏度≥0.1074；准确度︱相对偏差︱≤5.69%；测定10.0μmol/L样本和20.0μmol/L样本的批内精密度分别为2.31%和2.03%；测定范围相关系数r=0.9997，在[2.0，10.0]μmol/L区间内，︱绝对偏差︱≤0.3μmol/L；在(10.0，50.0]μmol/L区间内，︱相对偏差︱≤2.15%。结论：建立正确的体外诊断试剂性能验证方案有助于掌握更加准确的产品质量信息，为临床诊治提供更加准确的结果。

【关键词】体外诊断试剂；试剂空白；分析灵敏度；准确度；批内精密度；测定范围

【中图分类号】R197.39【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）36-0272-03

ToexploretheestablishmentofperformanceverificationschemeofinvitrodiagnosticreagentLiuGuangqian.

TheLaboratoryoftheHospitalofTraditionalChineseMedicineofNingyang,Shandong,255000,China

【Abstract】ObjectiveEvaluatingPerformanceoftheHomocysteine（Hcy）assaykitbynzymecyclemethodbytheYY/T1258-2015andtheGB/T26124-2011standard,toexploretheestablishmentofperformanceverificationschemeofinvitrodiagnostic(IVD)reagent,ensureproperselectionofproducts.MethodChoosinghealthyvolunteers’serumsamplesforresearch,testingthereagentblank,analysissensitivity,accuracy,batchprecisionanddeterminationrange,analyzedresultscomprehensively,andToestablishanIVDreagentperformancevalidationprotocol.ResultsTheresultsshowedthat,thereagentblankwasmuchmorethan1.7222,thereagentblankabsorbancechangeratewas0.0050.Theanalysisofsensitivitywasmuchmorethan0.1074.Theabsolutevalueoftheaccuracywasnomorethan5.69%.Determinationof10mol/Lsamplesand20mol/Lsamples,thebatchprecisionwas2.31%and2.03%.Therwas0.9997,inthe[2.0，10.0]μmol/L,theabsolutevalueoftheabsolutedeviationwasnomorethan0.3μmol/L,inthe(10.0，50.0]μmol/L,theabsolutevalueoftherelativedeviationwasnomorethan2.15%.ConclusionItcanbeusefultomastermoreaccurateproductqualityinformationbyestablishingthecorrectIVDreagentperformancevalidationprogram,toprovidemoreaccurateresultsforclinicaldiagnosisandtreatment.

【Keywords】Invitrodiagnosticreagent;Reagentblank;Analysisofsensitivity;Accuracy;Batchprecision;Determinationrange

随着我国体外诊断试剂行业的迅猛发展，我国体外诊断试剂厂家也越来越多，相对于国外成熟市场，国内厂家普遍规模小、品种少[1]，面对众多品牌的同类产品该如何做出正确的选择呢？本文旨参考《临床化学体外诊断试剂（盒）》（GB/T26124-2011）标准对四川新健康成生物股份有限公司的同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）进行性能验证，探讨临床体外诊断试剂性能验证方案的建立，确保正确选择产品。报道如下。

1.一般资料

1.1临床样本来源

不同浓度的临床样本均来源于2016年1月—6月在本院健康体检的志愿者，血清样本的分离工作按照本院血清标准操作规程。样本要求非溶血、非黄疸、非脂血。

1.2仪器与试剂

主要仪器为日本日立全自动生化分析仪。试剂为同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）（批号为0416041），企业工作校准品[批号：XC-HCY-201401（12.3μmol/L）]，均由四川新健康成生物股份有限公司提供。

1.3参考依据

YY/T1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》[2]，GB/T26124-2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》[3]。

1.4方法

1.4.1试剂空白

（1）要求

试剂空白吸光度值≥0.8000（主波长340nm，光径10mm）；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.0200(主波长340nm，光径10mm)。

（2）试验方法

用纯化水测定试剂盒，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度（A1）和约5min（t）后的吸光度（A2），A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，计算出吸光度变化值(|A2-A1|/t），即为试剂空白吸光度变化率（△A/min），结果应符合上述要求。

1.4.2分析灵敏度

（1）要求

每10.0μmol/L同型半胱氨酸的吸光度变化率（△A/min）≥0.0100。

（2）试验方法

用（10.0±5.0）μmol/L的样本测试同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法），记录在试剂盒规定参数下产生的吸光度改变，换算为10.0μmol/L同型半胱氨酸的吸光度变化率(|△A/min|)，结果应符合上述要求。

1.4.3准确度

（1）要求

相对偏差在±15.0%的范围内。

（2）试验方法

连续测定企业工作校准品3次，分别计算3次测定结果与企业工作校准品标示值的相对偏差（B），结果均应符合上述的要求。如果有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，分别计算测试结果与企业工作校准品标示值的相对偏差（B），其20次测试结果均应符合上述要求。

1.4.4批内精密度

（1）要求

测试（10.0±2.0）μmol/L的样本，批内精密度CV≤5.0%；

测试（20.0±4.0）μmol/L的样本，批内精密度CV≤3.0%。

（2）试验方法

在重复性条件下，用线性范围内（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的两个不同浓度水平的样本分别连续10次重复测试试剂盒，分别计算测量值均值(x)和标准差(s)，按下列公式计算变异系数(CV)，结果应符合上述要求。计算公式：CV=S/X×100%

1.4.5测定范围

（1）要求

2.0μmol/L～50.0μmol/L，r≥0.9950；

在[2.0，10.0]μmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±1.0μmol/L。

在(10.0，50.0]μmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10.0%。

（2）试验方法

取接近测定范围上限的高值（H）和接近下限的低值（L）样本各一份，混合成至少6个浓度的样本(xi)，充分混匀，防止蒸发或其他改变。用各稀释浓度分别测试试剂盒3次，然后分别计算检测结果的均值（yi），以稀释浓度（xi）为自变量，以检测结果的均值（yi）为因变量求出线性回归方程，计算线性回归的相关系数（r）；同时将稀释浓度（xi）代入线性回归方程，计算yi的估计值（yie），用估计值（yie）及检测结果均值（yi）计算线性绝对偏差和相对偏差（Ri），结果应符合上述要求。

绝对偏差计算公式绝对偏差=检测结果均值（yi）-估计值（yie）

相对偏差（Ri）的计算公式

1.5统计分析

采用Excel软件收集整理和分析数据。

2.结果

2.1试剂空白

试剂空白吸光度分别为1.7535和1.7222，试剂空白吸光度变化率分别为0.0050和0.0050。

2.2分析灵敏度

测定同型半胱氨酸浓度为10.0μmol/L的样本，两次吸光度变化率（△A/min）分别为0.1099和0.1130。

2.3准确度

重复三次测定企业工作校准品结果分别为11.6μmol/L、12.9μmol/L和12.5μmol/L。

2.4批内精密度

重复10次测定同型半胱氨酸浓度分为为10.0μmol/L和20.0μmol/L的样本，结果见表1。由表1计算出批内精密度分别为2.31%和2.03%。

图1稀释浓度和测试均值的线性相关图

3.讨论

YY/T1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》标准是由国家食品药品监督管理总局于2015年颁布实施的推荐性文件，适用于使用酶循环法对人血清或血浆中的同型半胱氨酸进行定量将侧的试剂盒，基于分光光度原理，包括手工试剂和在半自动、全自动生化分析仪上使用的试剂；GB/T26124-2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》标准是由国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会于2011年共同颁布实施的推荐性文件，适用于医学实验室进行临床化学项目定量检验所使用的基于分光光度法原理的体外诊断试剂盒，标准中规定了体外诊断试剂盒的通用试验方法，两份标准给本次试验提供了参考依据，结合本次试验用的同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）产品特点，制定了本研究的试验方案。体外诊断试剂临床使用单位建立正确合理的性能验证方案对临床规范化管理、产品优选和结果的准确性均具有重大意义[4-5]。

本次实验结果可见，试剂空白吸光度≥1.7222（主波长340nm，光径10mm），试剂空白吸光度变化率为0.0050（主波长340nm，光径10mm），满足“试剂空白吸光度值≥0.8000（主波长340nm，光径10mm）；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.0200(主波长340nm，光径10mm)”的要求。测定同型半胱氨酸浓度为10.0μmol/L的样本，分析灵敏度≥0.1074，满足“每10.0μmol/L同型半胱氨酸的吸光度变化率（△A/min）≥0.0100”的要求。准确度︱相对偏差︱≤5.69%，满足“相对偏差在±15.0%的范围内”的要求。重复10次测定同型半胱氨酸浓度分为为10.0μmol/L和20.0μmol/L的样本，批内精密度分别为2.31%和2.03%，满足“测试（10.0±2.0）μmol/L的样本，批内精密度CV≤5.0%；测试（20.0±4.0）μmol/L的样本，批内精密度CV≤3.0%。”的要求。测定范围相关系数r=0.9997，在[2.0，10.0]μmol/L区间内，︱绝对偏差︱≤0.3μmol/L；在(10.0，50.0]μmol/L区间内，︱相对偏差︱≤2.15%，满足“2.0μmol/L～50.0μmol/L，r≥0.9950；在[2.0，10.0]μmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±1.0μmol/L；在(10.0，50.0]μmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10.0%。”的要求。

综上所述，本次试验验证了四川新健康成生物股份有限公司生产的同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）相关指标，结果为符合厂家宣称的质量标准且符合临床需求，符合本院需求。建立正确的体外诊断试剂性能验证方案有助于掌握更加准确的产品质量信息，为临床诊治提供更加准确的结果。受限于试验条件，本次试验并未开展批件精密度、抗干扰能力等指标的验证，根据临床机构的实际需求和条件可以考虑增加这些指标的验证。

【参考文献】

[1]刘晓明，姜文亭，方立，谭彦宏.关于建立医院检验试剂、消耗性材料托管机制的探讨与思考[J].医疗卫生装备，2011，32(3):98-99，102.

[2]国家食品药品监督管理总局.同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）[S].中国标准出版社，2015年3月2日.

[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）[S].中国标准出版社，2011年11月1日.

[4]刘凤玲.临床检验试剂盒的选择及其质量控制[J].中国实用医药，2010，5(19):251-252.

[5]熊声贺，王琴琴，黄新城.应用EP7-A2方案评价循环酶法同型半胱氨酸试剂对其他生化检测项目的干扰[J].实用中西医结合临床，2011，11(4):67-68.