HIV抗体检测结果不确定时应用核酸诊断的可行性研究

HIV抗体检测结果不确定时应用核酸诊断的可行性研究

闫桂敏

哈尔滨市传染病院黑龙江哈尔滨150030

[摘要]：目的：探讨艾滋病病毒（HIV）核酸检测用于HIV感染者／艾滋病（AIDS）病人诊断的可行性，为制定新的检测策略提供依据。方法：2016年1月-2017年12月经HIV抗体确证实验结果为不确定的样本共计48例，进行核酸检测，并与抗体随访检测结果进行比较。结果：48例中，有23例检出HIV核酸。其中成功随访19例，随访过程中18例HIV抗体阳转，1例带型有进展但不满足诊断标准。被访者WB条带在2周随访时均出现明显变化。核酸阴性的25例，13例成功随访，WB条带无进展或阴性。结论：有条件开展HIV核酸检测的地区，对HIV抗体不确定者宜采用核酸检测尽早诊断；无核酸检测条件的地区，对HIV抗体不确定人群的随访间隔宜缩短至２周。

[关键词]：艾滋病病毒感染者/艾滋病病人；蛋白免疫印迹试验；结果不确定；核酸诊断

FeasibilitystudyofnucleicaciddiagnosiswhenHIVantibodydetectionresultsareuncertain

[Summary]Objective:ToexplorethefeasibilityofHIVnucleicaciddetectionfordiagnosisofHIV/AIDSpatientsandprovideevidenceforthedevelopmentofnewdetectionstrategies.Methods:48caseswereconfirmedbyHIVantibodyfromJanuary2016toDecember2017.Theresultswerecomparedwiththoseofantibodyfollow-up.Results:HIVnucleicacidwasdetectedin23outof48cases.Amongthem,19casesweresuccessfullyfollowedup.Duringthefollow-upprocess,18casesofHIVantibodyturnedpositive,and1casehadprogressbutdidnotmeetthediagnosticcriteria.WBoftherespondentsshowedsignificantchangesin2weeksoffollow-up.Therewere25caseswithnegativenucleicacid,13casesweresuccessfullyfollowedup,andWBhadnoprogressornegative.Conclusion:InareaswhereHIVnucleicaciddetectionispossible,itisadvisabletousenucleicaciddetectionasearlyaspossibleforthosewhoareuncertainaboutHIVantibodies.Inareaswherethereisnonucleicaciddetectioncondition,thefollow-upintervalforthepopulationwithuncertainHIVantibodiesshouldbeshortenedto2weeks.

[Keywords]::PeoplelivingwithHIV/AIDS;Proteinimmuneimprintingtest;Uncertaintyofoutcome;Nucleicaciddiagnosis

目前，蛋白印迹试验(Westernblotting，WB)是国内艾滋病确证实验室主要的确证方法。抗体检测也一直作为HIV/AIDS诊断的“金标准”。根据确证试验结果，检测报告可分为3种:HIV-1抗体阳性、HIV-1抗体阴性、HIV-1抗体不确定。近年来，随着艾滋病检测咨询服务不断扩大，艾滋病筛查检测量的快速增加，HIV-1抗体不确定结果的数量也不断增加。据相关文献报道[1]，WB试验中出现“HIV抗体不确定”的结果约占确证试验检测数的10%～20%。根据《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》，HIV抗体不确定结果者，要求被检者1个月后随访复检，给被检者造成巨大的精神压力，更延误了HIV感染者的尽早诊断，造成部分晚期艾滋病患者不能及时获得抗病毒治疗而病情加重，同时增加传播风险。本研究将核酸检测引入WB不确定结果的研究，以期为HIV早期诊断策略提供新思路。

1材料与方法

1.1样本2016年1月-2017年12月经HIV抗体确证实验结果为不确定的样本共计48例，经随访获得病毒载量和CD4+T淋巴细胞检测结果。采集并分离患者血清用于抗体复检和WB确证，随访采集的外周静脉血4ml～5ml，用乙二胺四乙酸二钾(EDTA－K2)抗凝管收集，于24h内检测CD4+T淋巴细胞绝对计数，抗凝血采集6h内常规离心分离血浆，－80℃保存用于病毒载量检测。所有患者的流行病学资料下载自全国艾滋病综合防治信息系统。

1.2方法用全自动酶联免疫荧光系统(miniVI-DAS)和胶体硒法，对所有送检初筛阳性标本做初筛复检，复检结果阳性的标本用WB进行确认实验，对检测结果为不确定者进行随访检测，分析条带进展情况，并进行核酸检测。VIDAS检测试剂盒使用生物梅里埃公司(法国Biomerieux)生产的VIDASHIVDUOUltra抗原抗体诊断试剂盒；胶体硒法使用AlereMedical公司的DetermineHIV-1/2；确证实验采用新加坡GenelabsDiagnosticsHIV-1及HIV-2检测试剂盒；核酸检测采用NucliSensEasyMAG核酸提取系统和NucliSensEasyQ检测系统。CD4+T淋巴细胞绝对计数采用美国贝克曼公司的COULTEＲEPICSXL型流式细胞仪进行。实验过程严格按照各试剂盒说明书进行操作。结果判断依据《全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)》执行。HIV抗体不确定判定标准为抗体WB实验出现HIV抗体特异性条带，但不足以判定阳性者。

2结果

48例中，有23例检出HIV核酸。其中成功随访19例，随访过程中18例HIV抗体阳转，1例带型有进展但不满足诊断标准。被访者WB条带在2周随访时均出现明显变化。核酸阴性的25例，13例成功随访，WB条带无进展或阴性。

3讨论

目前国内艾滋病确证实验室在HIV/AIDS诊断时，主要还是以HIV抗体检测结果为判断依据，出现不确定的结果有方法学上的原因，也有被检测者自身的免疫状况的影响。HIV初次感染人体后要经历2个月～3个月的HIV感染急性期，部分患者体内尚未产生抗体或者产生抗体的水平很低，抗体检测无法得到明确的诊断结果[2]。而急性期患者体内可检测到很高的病毒载量，因此核酸检测完全可对窗口期感染者做出明确的诊断。在本研究中，成功随访的19例ＷＢ结果不确定、核酸阳性者中，18例HIV抗体发生阳转，提示，ＷＢ结果不确定的样本可以直接通过核酸检测结果进行诊断，核酸阳性即可报告阳性。在临床实践中，HIV核酸检测有定性和定量两类，前者用于HIV感染的辅助诊断，后者常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。其定性检测通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定[3]：①HIV核酸检测阴性,只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染；②HIV核酸检测阳性,可以作为艾滋病病毒感染的辅助诊断指标，不单独用于艾滋病病毒感染的诊断；③在核酸定性检测结果报告时，操作人员应注明所使用的引物序列，以及所反应的条件。定量检测的主要方法包括：第一、通过生化仪器的读数报告结果，应标注该结果是在使用什么试验方法，以及所收集的样品量和样品种类；第二、当试验测定的结果明显低于最低检测限的状态下，应标注最低检测限的水平状态。目前由于HIV核酸检测的成本较高，在感染早期或疾病终末期作为HIV/AIDS的诊断依据方面的应用较少，今后通过增大样本量，积累相关案例，为核酸检测在HIV-1感染诊断中的广泛应用提供更多参考。本研究认为，有条件开展HIV核酸检测的地区，对HIV抗体不确定者宜采用核酸检测尽早诊断；无核酸检测条件的地区，对HIV抗体不确定人群的随访间隔宜缩短至２周。

[参考文献]

[1]段星,冯霞,王继宝,等.HIV抗体检测结果不确定时应用核酸诊断的可行性研究[J].中国艾滋病性病,2014,20(11):815-817.

[2]刘昱慧,洪航,傅小红.核酸检测在HIV抗体不确定样本辅助诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志,2016,26(18):2611-2613.

[3]刘春华,孙国清,薛秀娟,等.抗体检测与核酸检测在HIV诊断中的优势分析[J].中医临床研究,2014,6(15):114-116.