RNA恒温扩增技术快速检测（ＴＢ－ＳＡＴ）痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病的临床观察

RNA恒温扩增技术快速检测（ＴＢ－ＳＡＴ）痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病的临床观察

段占举赵丽红王立平郭玉珍白慧颖候结宁

哈尔滨市胸科医院150056

结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病。由于肺结核病的症状，体征和X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别。肺结核病确诊目前我们在临床主要靠痰涂片和痰结核菌培养阳性来定诊。但是依据常规痰涂片阳性率低，痰培养时间长需45天，这些原因给快速诊断病情带来困难。2014年我院引进RNA恒温扩增技术快速检测痰结核分枝杆菌给临床带来希望。一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒。目的用RNA恒温扩增实时检测（SAT—TB）快速检测临床痰标本中的MTB，并对检测效果进行评估。方法痰标本取自哈尔滨市肺科医院的肺部感染性疾病与肺结核鉴别的患者

资料和方法

1.研究对象；2014年7月至2015年1月就诊于哈尔滨市胸科医院的患者76例，男43例，女76例。年龄最高89岁，最少7岁。平均年龄48岁。咳嗽46例，胸闷23，咳痰31，低热19.，高热3例。咳血6例，体检发现肺阴影3例。盗汗8例。消瘦10例。76例病人肺CT显示肺部阴影不能除外肺结核

2.方法，以上病例全部留取痰结核菌涂片，痰结核菌培养，及ＴＢ－ＳＡＴ结核菌。ＴＢ－ＳＡＴ原理；同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，实时反映扩增循环情况。

3.结果；痰结核培养阳性4例，痰涂片阳性6例，ＴＢ－ＳＡＴ阳性5例。诊断明确肺结核6例，临床诊断30例。肺癌7例。肺炎18，声带结核2例，间质肺2例支气管扩张2例，肺化脓2例，淋巴瘤1例

讨论；结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病。由于肺结核病的症状，体征和X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别。肺结核病确诊目前我们在临床主要靠痰涂片和痰结核菌培养阳性来定诊。但是依据常规痰涂片阳性率低，痰培养时间长需45天，这些原因给快速诊断病情带来困难。2014年我院引进RNA恒温扩增技术快速检测痰结核分枝杆菌给临床带来希望。一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒。RNA检测的优势。美国基因探针公司Gen-Probe——RNA转录介导RNA恒温。国内为SAT技术，即实时荧光的TMA。RNA扩增技术用于病原体检验的优势。可以区分“死菌”“活菌”：病原体死亡，RNA很快降解。可以诊断“活动性感染”，指示RNA转录活跃。潜伏感染：指示RNA不转录。不易污染：靶标和扩增产物都是RNA。操操作简单——无需核酸提取，最快2小时出结果。可区分结核杆菌和非结核分枝杆菌。更高的灵敏度和特异性。但是我们发现76例患者仅5例ＴＢ－ＳＡＴ阳性，同时这5例患者痰结核菌阳性，灵敏度83%。临床诊断30例经过抗结核治疗均好转。因此我们认为ＴＢ－ＳＡＴ检查在痰结核阳性病人的检测中阳性率高，痰结核菌阴性的患者ＴＢ－ＳＡＴ检查也是阴性。研究结果没有提高结核分枝杆菌的检出率.，可能是标本留的时间较长，或其他人为因素还待观察。总之RNA恒温扩增技术快速检测（ＴＢ－ＳＡＴ）痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病为我们提供了一个检测方法值得探讨。在目前对诊断鉴别肺感染性疾病基础上，又提供了一种新的既经济又易掌握的技术方法。

ObjectiveTostudythecross-resistancebetweenrifampinandrifabutininmultidrugresistantMycobacteriumtuberculosiscomplexstrains，andthereforetoprovidelaboratorydataforusingrifabutininthetreatmentofmultidrugresistanttuberculosis.MethodsAnalysiswasconductedondrugsusceptibilityteststoisoniazid，rifampin，ofloxacin，streptomycin，ethambutol，amikacinandcapreomycinofthepulmonarytuberculosispatientswithsputumculturepositiveinShanghaiPulmonaryHospitalAffiliatedTongjiUniersityfromJune2009toJanuary2011.TheMIC90ofrifabutinandrifampinagainst99multidrugresistantMycobacteriumtuberculosisclinicalstrainsweredeterminedbymicroplateassays.ResultsThecross-resistanceratebetweenrifampinandrifabutinwas85.9%，buttheMIC90ofrifabutin（$amp；$lt；16mg/L，median2mg/L）wassignificantlylowerthanthoseofrifampin（$amp；$gt；2mg/L，median$amp；$gt；32mg/L）.TheMIC90ofrifabutinwere8to32timeslowerthanthoseofrifampin.Thecross-resistancestrainsinthelowerandthemediangroupswere0/9and5/9respectively，thestrainsofthehigherrifampin-resistantgroupwerealmostallcross-resistant（98.8%，80/81）（χ2=9.14，P$amp；$lt；0.01）.Thecross-resistanceratebetweenrifampinandrifabutinincreasedwiththeresistancelevelofrifampin.Itwasconfirmedthatdifferentdrugresistancespectrum（P=0.799）wasnotsignificantlyassociatedwiththecross-resistanceratebetweenrifampinandrifabutin.ConclusionsRifabutinhadactivitiesagainstmultidrugresistantMycobacteriumtuberculosiscomplexstrainsinvitro，andthereforemaybeusedasanalternativeforthetreatmentofmultidrugresistanttuberculosis.