母婴ABoHDN血型血清学检查

母婴ABoHDN血型血清学检查

张艳华

张艳华（黑龙江省七台河市七煤医疗中心朝阳医院154600）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)13-0180-02

【摘要】血型血清学检查对HDN的诊断有重要意义。通过血清学检查可了解母婴血型是否不合，母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的IgG抗体，患儿红细胞是否被来自母亲的IgG抗体所致敏。

【关键词】血型血清学检查检查结果分析血型抗体孕妇血清

1临床资料

一般资料通过4例母子Rh血型不合引起的新生儿溶血症的病因调查分析，探讨普及开展产前血型血清学检查的必要性。方法：产前血型血清学检测和新生儿溶血三项试验。结果：4例新生儿溶血症中3例由Rh血型系统抗-D引起，1例由抗-E引起。

2母亲血清中IgG抗A(B)检查

ABO血型系统HDN由IgG抗A(B)引起，检测母亲血清中有无IgG抗A(B)抗体及其效价，即可预测ABO血型系统HDN发生的可能性。正常人血清中的抗A(B)，一般多为IgM和IgG抗体的混合物，当IgM抗A(B)抗体效价等于或大于IgG抗A(B)抗体时，则IgG抗A(B)抗体被其掩盖，因为它们具有相同的特异性，因为无法检出IgG抗A(B)抗体，必须除IgM抗A(B)抗体。应用2-巯基乙醇(2-Me)，可以打开IgM型抗体重链之间的二硫键，使之不能再与相对应的红细胞发生凝集。当母亲血清中IgG抗体效价≥64，其血型不合胎儿就可能发生ABO新生儿溶血病。应用达亚美微柱凝胶卡检测母亲血清IgG抗体效价，操作步骤如下：

(1)配制中和血清。取母亲血清、二巯基乙醇液各200td，充分混匀。

(2)将上述中和血清置37℃水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。

(3)取6支干净试管排于试管架上。

(4)第1管加50/11中和血清和达亚美2号稀释液350μl。

(5)第2～6管分别加入达亚美2号稀释液200μl。

(6)从第1管吸出200μl液体，加入第2管，混匀，再从第2管吸出200μl液体，加入第3管混匀，依次倍比稀释。

(7)取达亚美Liss/Coombs卡(一卡六管)1张，撕去铝箔，在达亚美Liss/Coombs卡的六管中，各加入父亲0.8%的红细胞悬液50μl。

(8)从第1～6管中，各取出25μ1液体，分别加入达亚美，Liss/Coombs卡的六管中。

(9)将加好血样的达亚美Liss/Coombs卡置于达亚美孵育器内，孵育15分钟。

(10)将孵育好的Liss/Coombs卡置于达亚美离心机内，离心10分钟。

(11)判断结果，第1～6管的IgG抗体效价依次为：1：6；1：32；1：64；1：128；1：256；1：512。

3婴儿及父母的ABO血型鉴定

婴儿及父母的ABO血型的鉴定是检查新生儿溶血病的必要试验，为方便以后进一步检查的程序，父母或母子的ABO配合和不配合的判断。

4患儿血样检查

诊断ABO新生儿溶血病最有力证据是证实患儿红细胞被来自母亲的IgG抗A(B)抗体所致敏。

4.1患儿红细胞直接抗人球蛋白试验：如果患儿红细胞已被IgG抗A(B)抗体所致敏，则直接抗人球蛋白试验应得到阳性结果，但由于ABO新生儿的A(B)抗原数量较少，所以被结合的抗体亦很少，呈弱阳性的混匀视野外观或阴性结果，如果选用敏感性强的微柱凝胶卡做直接抗人球蛋白试验，可以大大提高其阳性率，方法如下：

①取患儿血液，离心，取压积红细胞，用达亚美2号稀释液(1D-Diluent2)配成0.8%的红细胞悬液；

②在Liss/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔；

③加入50μ1上述红细胞悬液；

④在达亚美离心机上离心10分钟；

⑤判断结果。

4.2患儿红细胞抗体放散试验：在收集血样前病人无须特殊准备。采用患儿血样，用EDTA抗凝，以防体外补体成分激活而引起直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性。为了得到可靠结果，要使用新鲜血标本，步骤如下：

①用0.9%生理盐水将患儿红细胞洗涤1遍，至少需1.0ml压积红细胞；

②用Diacidel洗涤溶液，清洗1.0ml压积红细胞4次；

③最后1次洗涤后，立即倾去洗涤液，保留部分上清液，以检测是否存在不规则抗体；

④在1.0ml已洗涤的红细胞中，加入1.0mlDiacidel放散液，混匀；

⑤立即以900r/min离心1分钟；

⑥将放散液移入一个干净试管中；

⑦在上述放散液中加入5滴Diacidel缓冲液，混匀，观察是否有蓝色出现，如有则表明达到中性pH值(6.5～7.5)，如未出现蓝色，则边搅拌边加入更多的Diacidel缓冲液(每次加1滴)；

⑧将放散液以900r/min离心1分钟，完全清除所有残留细胞；

⑨现在放散液即可检测。

用上述放散液，按正常操作步骤来进行抗体筛查和鉴定，采用最后一次洗涤的上清液做平行试验，作为阴性对照。

在放散试验中，会遇到一种交叉反应性抗体(抗C抗体)，这就是。型人血清中，除抗A抗体、抗B抗体以外的第三种抗体，表示的符号有抗C抗体、抗AB抗体、抗(A+B)抗体等。它针对的特异性是A和B抗原所共有的。因而它能凝集A型和B型红细胞。Wiener等认为一个血型抗原可以有多种特异性，如一个A1抗原有A1、A和C3特异性血型抗原，而不是在细胞上有A1、A、C3抗原。

4.3患儿血清中游离抗体测定：新生儿血清中的IgG抗A(B)抗体来自母亲，因此，如果在新生儿血清中发现有与其红细胞不配合的IgG抗A(B)抗体时，表明婴儿可能受害。方法如下：

①取患儿血液，经离心后，分离血清；

②取Liss/Coombs卡，标记患儿的姓名或编号，撕去铝箔；

③分别加入50μl，0.89，6A、B、0标准红细胞，然后各孔均加入25μl上述血清；

④在达亚美孵育器上孵育15分钟，在达亚美离心机上离心10分钟；

4.4患儿血清胆红素测定：患儿血清胆红素的高低，是衡量新生儿溶血病严重度的一个重要指标，以便决定是否需要换血。以改良J-G法为常用，如采用胆红素单项自动测定仪则更为方便。

一般认为在正常情况下，足月新生儿脐血胆红素(MW584.7)24小时<102μmol/L(<6mg/d1)；48小时<128μmol/L(<7.5mg/d1)；3～7天<205μmol/L(<12mg/d1)。未成熟新生儿24h<136μmol/(<8mg/d1)；48小时<205μmol/(<12mg/d1)；3～7天＜256μmol/(＜15mg/d1)；超过这个范围作为病理性黄疸考虑。

4.5注意事项

①患儿血清学检查时间的选择，用患儿脐血做上述3项试验，0型母亲分娩的A型或B型患儿有1/5为阳性，这样就把许多不发病的新生儿统计在内，如果把采血时间放到产后10天，所致敏的红细胞已大部分破坏，3项试验检出率降低，使真正的ABOHDN漏检，故采血宜在出生后3～7天。用3项试验检测ABOHDN阳性率为2.5%。

②采血器具应洁净干燥，最好用一次性真空抽血管，防止溶血。

③新生儿血样本最好用脐血。

④采血样本如果暂时不能做，要随即分离血清。

参考文献

[1]雷鸣,吴梓梁,高卫仪,赵惠聪.新生儿ABO溶血病血型抗体与临床的关系[J];广州医学院学报;1995年01期.

[2]张伟东;肖露露;付涌水;罗广平;叶欣.O型孕妇血清中IgG抗A(B)效价的调查分析[A];第五届全国优生科学大会论文汇编[C];2000年.

[3]陆志刚;王跃歌.孕妇ABO血型IgG抗体测定及其临床意义[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年.