伤科活血合剂质量标准的研究

伤科活血合剂质量标准的研究

蓝明雄李国荣林慧菁

蓝明雄李国荣林慧菁（东莞市食品药品检验所广东东莞523109）

【摘要】目的提高伤科活血合剂的质量标准。方法建立了该中药制剂中红花、赤芍和广木香的薄层色谱鉴别方法，以及利用高效液相色谱法对制剂中的梓醇进行含量测定。结果在供试品色谱与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的清晰斑点，分离度高；含量测定中，测得梓醇在0.01～0.20mg/mL的浓度范围内呈良好线性关系（r=0.9998），平均回收率为101.27%（RSD=1.24%，n=9）；阴性均无干扰。结论所建立的方法专属性高、简单可行，适用于伤科活血合剂的质量控制。

【关键词】伤科活血合剂薄层色谱法高效液相色谱法梓醇

【中图分类号】R927.11【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）21-0119-02

伤科活血合剂，为湖北省仙桃市中医院骨伤科自发研制的两种医院制剂，由生地、赤芍、红花、制乳香、土鳖、当归、桃仁、制没药、桑枝、煅燃铜、广木香等多种药材通过中药现代化手段提取制成，临床上用于上肢的跌打损伤和气血瘀滞，效果良好，深受广大患者欢迎。然而，这种中药制剂缺乏完善的质量标准和普遍适用于地级市的有效分析手段。因此，为控制该医院制剂的质量，本文利用薄层色谱法（TLC）补充了其中3种主要药材的鉴别手段，以及利用高效液相色谱法（HPLC）对其君药生地中的梓醇进行含量分析。结果表明，该方法专属性高、简单可行，适用于该品种的质量分析和控制。现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent1200系列高效液相色谱仪（厂家：美国安捷伦；型号：1200Series），薄层色谱扫描仪-成像系统（厂家：瑞士CAMAG公司；型号：REPROSTAR3），超声波清洗器（厂家：昆山市超声仪器有限公司，型号：250W/40kHz）。

1.2试药伤科活血合剂（批号：20111001，20111201，20120101，20120301）各阴性对照合剂，均购自仙桃市中医院生产并提供；红花对照药材（批号：907-8903）、赤芍对照药材（批号：1093-200402）、木香对照药材（批号：921-200405），均购于中检所；芍药苷对照品（批号：736-200934），梓醇对照品（批号：808-9602），均购于中检所；硅胶G薄层板（德国Merck公司），其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1红花取伤科活血合剂20ml，置水浴蒸干，残渣加80%丙酮溶液5ml浸渍15分钟，时时振摇，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，加80%丙酮溶液5ml，同法制成对照药材溶液。再取缺红花阴性对照合剂20ml，同法制成缺红花阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（7:2:3:0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。结果：供试品色谱中，在与红花对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，分离度高，阴性对照无干扰（见图1）。

2.1.2广木香取伤科活血合剂20ml，置水浴蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5g，加甲醇5ml超声处理30分钟，滤液作为对照药材溶液。再取缺广木香的阴性对照合剂20ml，同法制成缺广木香阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。结果：供试品色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫色斑点，阴性对照无干扰（见图2）。

2.1.3赤芍取伤科活血合剂10ml，置水浴蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加乙醇10ml，超声处理15分钟，过滤，滤液作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺赤芍阴性对照合剂10ml，同法制成缺赤芍阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，置105℃加热至斑点显色清晰。结果：供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（见图3）。

2.2梓醇的含量测定

2.2.1系统适应性试验色谱柱为AgilentTC-5C18反相色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（2:98）；柱温为35℃；检测波长为210nm；理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。进样量为10μL。

2.2.2供试品溶液的制备精密量取本品10mL，水浴蒸干，残渣加流动相溶解并定容至10mL，即得。

2.2.3对照品溶液的制备精密称定梓醇对照品适量，加流动相溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2.4阴性对照溶液的制备取缺生地的处方按照制剂工艺制成阴性对照合剂。照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成缺生地阴性对照溶液。

2.2.5专属性试验分别取梓醇对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述色谱条件进样，测定，考察方法的专属性。结果表明，各成分分离度符合要求，阴性对照溶液无干扰，专属性良好。结果见图4。

注：1为梓醇

图4阴性对照（A）、对照品（B）和供试品（C）溶液的液相色谱图

2.2.6稳定性取同一份供试品溶液（批号：20111001），自制备后，分别在0、3、6、12、24、48小时进样，测定梓醇含量。结果表明，供试品溶液在48h内稳定（RSD=0.51％）。

2.2.7仪器精密度分别精密吸取同一份供试品溶液10μL，按上述色谱条件连续进样5次，测定梓醇的峰面积。结果梓醇峰面积的RSD为0.12％，表明该方法精密度良好。

2.2.8重复性取同一批样品（批号：20111001）6份，按上述供试品制备方法和色谱条件测定梓醇峰面积，计算含量。结果梓醇含量的RSD为1.12％，表明该方法重复性良好。

2.2.9线性范围取梓醇对照品适量，分别加流动相制成0.01、0.02、0.05、0.10、0.15和0.20mg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=0.7147X＋0.0228，相关系数r=0.9998。结果表明，梓醇在0.01～0.20mg/mL的范围内，呈现良好的线性关系。

2.2.10中间精密度试验取同一批样品（批号：20111001），由3个不同操作者按上述含量测定方法分别测定2份，计算梓醇含量。结果表明，该方法中间精密度高，受随机变动因素影响程度较小（RSD=1.51％）。

2.2.11加样回收率试验取同一批号样品（批号：20111001；含梓醇0.12mg/mL）按表1要求分别精密加入样品和对照品9份，按上述方法制备供试品溶液，测定，计算梓醇的含量。结果梓醇的平均回收率为101.27％（RSD=1.24％），表明该方法准确度高。

表1回收率试验结果

2.2.12样品测定另取3批伤科活血合剂样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，外标法计算梓醇的含量。结果3批样品中梓醇的含量结果分别为：0.11mg/mL（批号：20111201）、0.15mg/mL（批号：20120101）、0.14mg/mL（批号：20120301）。

3讨论

3.1红花的TLC鉴别实验中，本试验选用极性较大的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（7:2:3:0.4）系统作为展开剂，展开后直接在日光下观察斑点，方法简单准确，改善了国内很多相关文献报道方法的不足[1]。而广木香的TLC鉴别中，笔者采用5%香草醛硫酸溶液作为显色剂配合不加热的显色方法，斑点颜色鲜明且彻底排除了阴性对照的干扰，大大提高了该方法的专属性，弥补了相关文献报道方法的漏洞[2,3]。另外，笔者曾经采用不同品牌的薄层板，包括德国Merck公司、青岛海洋化工集团有限公司和自制手铺薄层板，以及不同的温度、湿度下分别对红花、赤芍和广木香的定性鉴别进行比较，发现实验结果无显著性差异，表明该TLC方法耐用性良好，受外界因素的影响很小，适合作为该医院制剂的鉴别手段。

3.2生地为伤科活血合剂的君药，其主要有效成分为梓醇等[4]，为极性较大的成分。因此，该医院制剂水煎煮的提取工艺能对其提取出来。另外，本品的稳定性试验研究表明，在低温储藏条件下，梓醇含量测定结果无明显变化。考虑到上述因素，笔者选用梓醇作为质量标准提高过程中含量分析的目标成分，与中国药典2010年版一部一致[5]。

3.3笔者认为本方法准确度高、重复性好且操作简便，可作为本品的质量控制手段。另外，由于本实验选取样品批次太少，需要扩大取样批数分析后才能确定本品中梓醇的含量限度。

参考文献

[1]冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中国医药导报，2010.

[2]文秀云.伤科跌打片薄层色谱鉴别研究[J].医学信息：中旬刊，2011.

[3]张晓丽，吴品昌，李楠，等.木香顺气丸质量标准研究[J].辽宁中医药大学学报，2011.

[4]祝慧凤，万东，张芬.地黄梓醇脑保护的药理作用及机制研究进展[J].中国中药杂志，2009.