COX-2在肾癌中的表达及其临床意义

COX-2在肾癌中的表达及其临床意义

秦卫华1吕红凯2

秦卫华1吕红凯2

（1临汾市人民医院泌尿外科山西临汾041000；

2临汾市人民医院泌尿外科山西临汾041000）

【摘要】目的：研究COX-2在肾癌中的表达，探讨其与肾癌的发生、发展以及患者预后之间的关系。方法：应用免疫组织化学的方法对48例肾癌组织及5例正常肾组织中COX-2的表达情况进行检测，并通过对患者随访，探讨其与肾癌临床病理学参数及患者预后之间的关系。结果：COX-2在肾癌组织中的表达较正常组织明显增高，且COX-2的表达与肾癌的病理分期之间呈显著的负相关关系(P＜0.05)。COX-2表达阴性者的生存率低于COX-2表达阳性者，但二者之间的差别无统计学意义(P＞0.05)。COX-2的表达与肾癌的临床分期、肿瘤大小以及患者的年龄、性别均无显著相关性。结论：COX-2的表达可能与肾癌的发生、发展有关，其有可能作为肾癌早期诊断的指标。

【关键词】环氧化酶-2；肾癌；生存率；免疫组化

【中图分类号】R730.3【文献标识码】B

肾癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，其发病率占我国泌尿系肿瘤的第二位。肾癌的治疗仍以根治性手术为主，放、化疗无效，免疫治疗效果也不明确，迫切需要发现特异、敏感的早期诊断、鉴别诊断和预后评估的因子，以及新的、有效的肾癌治疗方法。

1材料与方法

1.1标本来源收集2003年1月到2009年8月在临汾市人民医院住院患者手术切术的肾癌标本和由于非肿瘤原因行肾切除的部分正常肾组织，其中肾癌标本48例，男性32例，女性16例，年龄34～76岁，平均年龄56.29岁。术后均经病理证实为肾细胞癌。由于非肿瘤原因行肾切除的部分正常肾组织5例，男性3例，女性2例，年龄26～83岁，平均年龄52岁。上述病例术前均未接受化疗、放疗、肾动脉栓塞术及其他药物治疗。

1.2主要试剂兔抗人环氧化酶－2单克隆抗体、二步法免疫组化检测试剂盒、HRP-DAB底物显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。

方法选取肾癌组织及正常肾组织的石蜡切片，运用免疫组化（二步法）方法进行染色。

一抗浓度为1:100，具体操作均按说明书进行，以DAB显色，苏木素复染，PBS置换一抗做空白对照，用已知阳性标本做阳性对照。

1.4结果判定参照陈丰霖等人[1]的方法，阳性染色结果判定如下：COX-2染色阳性者在细胞膜(部分在细胞浆)有棕黄色颗粒沉着。要求细胞结构清晰，阳性细胞定位好，以同一显微镜倍数(×40)观察全片，选择5个高倍(×400)视野，合并计算所分析的5个不同视野着色细胞百分率及胞膜、胞浆的着色程度。根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评定：基本不着色为0分，着色淡为1分，着色较深为2分；着色细胞占计数细胞百分率：≤5%为0分，6%—25%为1分，26%—50%为2分，≥51%为3分，以每张切片染色程度和染色细胞百分率得分相乘的积为最后得分。得0—1分者判为阴性（－），得2分者判为弱阳性（＋），得3—4分者判为中等阳性（＋＋），6分者判为强阳性（＋＋＋）。

1.5统计学处理应用SPSS13.0对结果进行处理，率的比较采用Χ2检验及Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman秩相关，非参数检验采用Wilcoxon秩和检验，生存分析采用Kapalan-Meier法。

2结果

2.1COX-2在肾癌组织和正常肾组织中的表达COX-2在肾癌组织中的阳性率为72.9%，主要定位在细胞膜和/或细胞浆，染色程度深，COX-2在正常组织亦表达，阳性率为20%，染色程度较浅，为弱阳性，且局限在集合管系统。COX-2在肾癌组织中的表达较正常组织明显增高，且二者差别有统计学意义（P＝0.032＜0.05，见表1）。

2.2COX-2的表达与临床病理参数之间的关系COX-2的表达与肾癌的病理分级之间呈显著的负相关关系，相关系数为-0.354（P＜0.05，见表2）。COX-2的表达与肾癌临床分期（TNM分期）之间无相关关系（P＞0.05，见表2），但早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ）中COX-2的表达阳性率(75%)高于其在晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ）中的表达阳性率(71.4%)。按肿瘤直径将所有肾癌组织分为三组：A组（d≤4㎝）、B组（4㎝＜d≤7㎝）、C（d＞7㎝），三组肿瘤组织中COX-2表达的阳性率两两进行比较，检验水准α＝0.0125，其P值均大于0.0125，即三组中COX-2表达阳性率两两比较差异无统计学意义。COX-2的表达与患者的性别、年龄无显著相关性（P＞0.05）。

COX-2的表达与患者生存率的关系本实验随访了其中43例患者，随访时间为4—71个

月，并对其进行生存分析，得出图1，从图中可以看出，COX-2表达阴性患者的生存曲线较低，说明其生存率较低，而COX-2表达阳性患者的生存曲线较高，说明其生存率较高，但二者进行比较P=0.117＞0.05，无统计学意义。

表1COX-2在肾癌组织和正常肾组织中的表达

表2COX-2的表达与肾癌的病理分级及临床分期

*病理分级采用高分化、中分化、低分化（未分化）的三级分类标准（将Fuhrman分级中的I、II级合并为一级即高分化、Ⅲ级为中分化、Ⅳ级为低分化或未分化）

讨论

3.1COX-2概况1976年，Hemler等分离出具有酶活性的环氧化酶，这是一种可与膜结合的糖蛋白。它是花生四烯酸转化为前列腺素和二十烷类的限速酶。目前发现两种环氧酶，即COX-1和COX-2，二者具有不同的结构和生理功能。COX-1在大多数组织中表达，参与前列腺素的合成。在多数组织中，COX-2为诱导性表达，其可被广泛的血管内外激活物(如：IL-1、TNF、5-HT、EGF、TGF-α等)诱导表达[2]。COX-2在正常肾脏中有重要的生理功能,正常肾脏中远曲小管细胞可表达COX-2,近曲小管不表达,这可能是肾细胞癌因起源不同导致COX-2表达出现组织学差异的原因,但无论是远曲小管来源的颗粒细胞癌还是近曲小管来源的透明细胞癌COX-2表达都增加,可见COX-2在肾细胞癌中的表达不仅仅与起源部位相关[3]。

图1COX-2表达阳性患者与阴性患者生存曲线的比较

3.2本实验结果及展望本研究运用二步法免疫组织化学的方法对正常肾组织及肾癌组织中COX-2的表达情况进行检测，发现其在肾癌组织中的表达较正常组织明显增高，这与国外HidaT[4]及国内方立[3]等人的研究结果相一致，提示COX-2的表达可能与肾癌的发生、发展有关。本研究中COX-2的表达与肾癌的病理分级之间呈显著的负相关关系。一般来说,随着肿瘤细胞的生长,会产生一些促进血管生长的物质,以保证肿瘤细胞的养分供给,血管越丰富肿瘤细胞生长越快,本研究中高分级的肾细胞癌中可促进血管形成的COX-2表达不升反降,可能与高度恶性的肾细胞癌中血管生长的速度跟不上肿瘤细胞的扩增速度,血管相对减少,引起供血不足有关[5]；还可能与COX-2的表达为肾癌发生的早期事件有关。流行病学调查发现长期服用阿斯匹林能降低结肠癌的发生率，使得近年来非甾体抗炎药(NSAID)，尤其是COX-2抑制剂对肿瘤的防治成为研究的热点之一，其很有可能成为预防和治疗肿瘤的一类新型药物，主要有Celecoxib(赛来昔布),Rofecoxib(罗非昔布)、NS398等。

4结论

COX-2的表达为肾癌发生的早期事件，与肾癌的发生、发展有关，有可能作为肾癌早期诊断的指标，并有可能为肾癌的预防提供新的靶标。

参考文献

[1]陈丰霖，王小众，李建英等.胃癌组织中COX-2与NF-κB的表达及关系[J].临床消化病杂志，2003，15(3):109-110.

[2]JonesDA，CaltonDP，McIntyreTM，etal．MoleculalcloningofhumanprostaglandinendoperoxidesynthasetypeⅡanddemonstrationofexpressionresponsetocytokines[J].BiolChem，1993，268(12)：9049-9054.

[3]方立，刘修恒，罗洪波.肾细胞癌中COX-2与血管生成的相关性研究[J].武汉大学学报，2006，27（2）：152-156.

[4]HidaT,KozakiKI,MuramatsuH,etal.Cyclooxygenase-2inhibitorinducesapoptosisandenhancescytoxicityofvariousanticanceragentsinnon-smallcelllungcancercelllines[J].ClinCancerRes,2000,60(6):2006-2011.

[5]KohlerHH,BarthPJ,SiebelA,etal.Quantitativeassessmentofvascularsurfacedensityinrenalcellcarcinoma[J].BrJUrol,1996,77:650-654.