ALK新抗体D５F３在非小细胞肺癌患者中的临床应用价值

ALK新抗体D５F３在非小细胞肺癌患者中的临床应用价值

林清华１吴联平１陈丽珠１谢强２刘加夫１林玉琼１

林清华１吴联平１陈丽珠１谢强２刘加夫１林玉琼１黄小红１福建省福州市肺科医院１病理科;２肿瘤科福建福州３５０００８基金项目:福州市卫生系统科技计划青年科研项目(２０１３－S－wq２４)作者简介:林清华,女,主治医师.

【摘要】目的探究ALK新抗体D５F３在非小细胞肺癌患者中的临床应用价值.方法选择经RT－PCR检测的２００例非小细胞肺癌患者的石蜡包埋标本(包括EML４－ALK突变型和野生型),应用ALK新型抗体D５F３(CST公司生产)检测该基因蛋白表达情况,分别从阴性、阳性(＋~３＋)进行对比其敏感性和特异性.结果检测结果显示,(＋)符合率为１５．７８％,(＋＋)符合率为２３．０７％,(＋＋＋)符合率为１００％,差异有统计学意义(P＜０．０５).结论D５F３新抗体在NSCLC患者高度的敏感性及特异性,具有筛选价值,节约社会资源,为广大肺癌患者服务.【关键词】D５F３;非小细胞肺癌;临床应用价值;EML４－ALK;EffectoftheantibodyD５F３innonsmallcelllungcancerpatients【Abstract】objective:ToinvestigatetheeffectoftheantibodyD５F３innonsmallcelllungcancerpatient．Method２００paraffinembeddedspecimensofpatientswithnonsmallcelllungcancertestedbyRT－PCR(includingEML４－ALKmutantandwildtype)wereselected．ThegeneproteinexpressionweretestedbyALKnewantibodyD５F３andthesensitivityandspecificitywerecomparedbynegativeandpositive(＋~３＋)．ResultTestresultsshow(＋)thecoincidencerateis１５．７８％,(＋＋)thecoincidencerateis２３．０７％and(＋＋＋)complianceratewas１００％,(P＜０．０５)．Conclusion:D５F３newantibodyinNSCLCpatientswithahighdegre【eKoefysweonrsidtsiv】ityandspecificity,withthescreeningvalue,savesocialresources,forthemajorityoflungcancerpatients．D５F３;nonsmallcelllungcancer;clinicalapplicationvalue;EML４－ALK;【中图分类号】R７３４．２【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－００５６－０２

前言肺癌是全世界死亡率最高的恶性肿瘤,每年新增肺癌人群超过６５万人,其中８０－８５％为非小细胞肺癌(non－smallcelllungcancer,NSCLC)患者,治疗以铂类药物化疗为主,疗效不到１５％[１].随着基因组学的不断进步发展,分子靶细胞已成为治疗非小细胞肺癌(non－smallcelllungcancer,NSCLC)的研究热点,其中棘皮动物微管相关蛋白样４－间变性淋巴瘤激酶(echinodermmiＧcrotubule－associatedprotein－like４－anaplasticlymphomakinase,EML４－ALK)继EGFR肺癌基因之后发现的新的肺癌分子靶点,临床已寻找到显效的靶向药物应对[２－３].临床上筛选ALK融合阳性的患者成为主要关注的问题[４],因此本研究入组经RT－PCR检测的２００例非小细胞肺癌患者的石蜡包埋标本,应用ALK新型抗体D５F３(CST公司生产)检测该基因蛋白表达情况,从阴性,阳性(＋,２＋,３＋)等方面分析其敏感性和特异性,进而评估其临床应用价值.

１资料与方法

１．１临床资料收集２０１３年６月~２０１５年３月福州肺科医院病理科经RT－PCR检测的２００例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的石蜡标本,其中包括经支气管镜活检、CT引导经皮肺穿刺、内科胸腔镜胸膜活检、闭式胸膜活检标、淋巴结活检、手术切除等标本.男性１１２例,女性８８例,年龄为３０~８６岁,平均年龄(６０．２４±３．７５)岁,两组患者的一般资料相仿,差异无统计学意义(P＞０．０５).１．２纳入标准所有患者均符合以下条件:?非小细胞肺癌指南?[５]具有以下部分临床特点:胸部胀痛、痰血、低热、咳嗽等症状;晚期可出现疲乏、体重减轻、食欲下降以及呼吸困难等症状;X线胸片显示肺内异常,组织活检病理确诊为非小细胞肺癌,并且经RT－PCR检测EML４－ALK融合基因突变情况.所有患者在检测前均未接受过放疗以及化疗治疗.１．３方法１．３．１检测方法采用免疫组化法.首选优化实验条件,每批染色设阳性对照.将已知阳性片作为阳性对照,正常肺组织为阴性内对照.免疫组化染色采用EliVision两步法,一抗ALK(D５F３)XP兔单抗试剂购自美国CST中国分公司,EliVision试剂盒购自福州迈新公司.ALK(D５F３)抗体按１:２５０稀释,新鲜配制DAB显色剂显色.染色步骤按照试剂盒说明书进行操作(手工操作).

１．３．２结果判读[６－８]由两名有经验的诊断医生进行结果判读.判读标准:肿瘤细胞明确无着色为(—);＞５％肿瘤细胞呈微弱或模糊的胞质着色为(＋);＞５％肿瘤细胞呈中等强度胞质着色为(２＋);＞５％肿瘤细胞呈颗粒状胞质强着色为(３＋).排除已知染色因素,具体分为以下几种:(１)巨噬细胞内颜色较淡的胞浆点状染色;神经来源细胞,如神经细胞以及神经节细胞;(３)排除出现正常黏膜内以及坏死组织区域的背景染色.１．４统计学分析计量数据以均数±标准差(X±s)表示,计€€€数资料采用％表示,采用SPSS１７．０统计软件进行单因素方差分析法,即one－wayANOVA进行差异性统计,使用Turkey检验进行组间检验、校正.所有数据比较,P＜０．０５认为有统计学意义.２结果２．１EML４－ALK蛋白在NSCLC组织中表达情况EML４－ALK蛋白在NSCLC组织中阳性表达主要存在于细胞浆,表现为强的颗粒状胞浆染色.检测２００例肺癌组织中腺癌１５１例,鳞癌４０例,腺磷癌２例,大细胞癌１例,复合型大细胞癌１例,类癌２例,巨细胞癌１例,难分型非小细胞癌２例,４６例阳性表达,总阳性表达率为２３％(图１、２).所有患者EML４－ALK蛋白表达与年龄、病理分期以及分化程度均无显著差异,差异无统计学意义(P＞０．０５)见表１.

３讨论

EML４－ALK基因是NSCLC的一个潜在治疗靶点,目前已有了ALK抑制剂－克唑替尼[９,１０],目前ALK常用的检测方法有荧光原位杂交(FISH)、聚合酶链反应法(PCR)以及免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC).由于FISH、PCR检测法的技术、设备、结果判读需求及条件较高,不易在我国得到广泛普及.本文通过对RT－PCR检测的２００例非小细胞肺癌患者的石蜡包埋标本进行ALK新型抗体D５F３免疫组化检测的研究,发现IHC对NSCLC病例进行ALK筛查,就能对阴性及IHC３＋病例做出初步判断,再对IHC１＋以上病例进行分子病理验证,能够快速、准确对融合基因突变位点做出判断.从而证实了D５F３在NSCLC患者中有高度的敏感性及特异性,具有筛选价值,能节约社会资源,为广大肺癌患者服务.同时由于免疫组化表达的不确定性,其最终结果还需要以分子表达为依据.本研究我们还发现ALK突变在腺癌患者中的比例远高于鳞癌及其他类型的NSCLC患者,差异具有统计学意义(P＜０．０５).以往在肺癌检测相应的驱动基因中通常认为EGFR与EML４－ALK融合基因存在排斥性,不能同时出现其EGFR与EML４－ALK融合基因的同时突变[１１].我们研究中发现了一例EGFR与ALK同时突变的患者.同时王旭洲等[１２]也报道了六例两者同时发生突变的病例.此种现象值得我们进一步的研究,以进一步为临床广大患者服务.

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