单采血小板保存时间与低渗休克反应的相关性研究

单采血小板保存时间与低渗休克反应的相关性研究

宋自阆1张洪为

宋自阆1张洪为(通讯作者)2

（1自贡市第四人民医院检验科四川自贡643000）

（2泸州医学院附属医院四川自贡646000）

【摘要】目的：研究血小板低渗休克反应与血小板体外保存时间的相关性。方法：来源于10名自愿健康献血者的按血站标准采集的10袋单采血小板，置于22℃血小板保存箱保存7天，分别在保存的当天、第3天、第5天和第7天测定血小板低渗休克反应。结果：在5天之内，随着保存时间的延长，血小板低渗休克反应没有明显变化（P>0.05）。但是第7天发生了明显变化（P<0.05）结论：在正常的5天保存期内，血小板活力未明显受损，不影响输注。

【关键词】单采血小板；低渗休克反应；保存时间；血小板活力

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）08-0087-02

Relationshipbetweenstoragetimeandhypotonicshockresponseofapheresisplatelets

SongZilang1,ZhangHongwei(Correspondingauthor)2

1,thedepartmentofclinicallaboratoryinZiGongNO.4people，shospital,Sichuan，643000

2,thedepartmentofbloodtransfusionintheAffiliatedHospitalOfLuZhouMedicalCollege,Sichuan,646000

【Abstract】Objective:Toexploretherelationshipbetweenstoragetimeandhypotonicshockresponseofapheresisplatelets.Methods:Tenbagsofapheresisplateletswerecollectedfromvoluntaryblooddonorbybloodstationstandardandstoredinstoragetankfor7daysat22℃.HSR(Hypotonicshockresponse)wasdetectedatd0,d3,d5,d7.Results:HSRhadnosignificantchangewithstoragetimeprolongedwithinfivedays(P>0.05),butitwaswasgraduallydecreasedattheseventhday(P<0.05).ConclusionPlateletactivityhadnosignificantchangewithinfivedays.

【KeyWords】Apheresisplatelets;Hypotonicshockresponse;Storagetime;Plateletactivity

血小板是人体内唯一具有止凝血功能的血细胞，目前为止还未发现功能与之比拟的替代品。因此，血小板输注是一种临床上不可替代的治疗手段，是成分输血的重要部分[1]。目前，常用的血小板制品分为两种，一种是手工制备的浓缩血小板，保存时间为24小时；另一种是通过血细胞分离机制备的单采血小板，22℃下保存5天。单采血小板因为其浓度和纯度较好，保存时间较长，临床应用效果好[2]。低渗休克反应(hypotonicshockresponse,HSR)实验是检测血小板在低渗环境中发生肿胀后而最终又可恢复其原有形状的能力，是反映血小板活力的重要指标[3]。本研究拟检测单采血小板在保存期间的血小板低渗休克反应，评估保存期间的血小板活力。

1.材料与方法

1.1材料

CS3000血小板常温保存袋（Baxter公司，美国），CS-3000plus血细胞分离仪(Baxter公司，美国)，CHRONO-LOG560CA血小板凝集仪（美国），HELMER血小板恒温振荡保存箱（美国）。

1.2方法

1.2.1单采血小板的采集与保存

招募10位健康自愿献血者（1周内未服用影响血小板功能的相关药物，外周血血小板计数>1.5×1011/L），签订自愿献血知情同意书，按照血站标准操作规程采用CS-3000plus血细胞分离机采集浓缩血小板悬液10袋，每袋血小板含量为（2.5～3）×1011，200～250mL/袋，进口血小板常温保存袋保存，置于22℃血小板保存箱，水平振摇，保存7d。分别在d0（采血的当天）、d3、d5、d7留取样品检测HSR。

1.2.2HSR的测定

1.2.2.1每例标本分别取适量放置于2只专用塑料试管内，一管经3000rpm离心10分钟后的上清液即为乏血小板血浆（PPP）；

1.2.2.2调整另一管血小板浓度至3.0×1011/L，即为富血小板血浆（PRP），并用HEPES缓冲液调节PRP的pH为7.0；

1.2.2.3将等渗PBS缓冲液和低渗去离子水置于37℃水浴预温；

1.2.2.4血小板凝集仪开机预温后，在一测试杯中加入200μlPPP，置于测试孔中调零；

1.2.2.5在另一测试杯中加入200μlPRP，放入搅拌棒后插入测试孔中，取200μl等渗PBS缓冲液迅速注入此测试杯中，立即启动检测，并记录凝集仪在1min内的透光率变化；

1.2.2.6用低渗去离子水代替等渗PBS缓冲液重复以上操作，并记录凝集仪在5min内的透光率变化。

1.2.2.7将等渗PBS缓冲液透光率变化图中第1min的透光率值标记为TPBS，将低渗去离子水透光率变化图中的最大透光率值和第5min的透光率值分别标记为Tmax和T5min，则HSR的计算

图1HSR与血小板保存时间的关系图

3.讨论

血小板在低渗环境中依靠ATP产生一系列信息传导和生化反应，通过膜的被动运输，降低血小板内部离子的浓度来维持血小板的形态和体积。因此，HSR是一系列复杂的细胞内活动、膜离子通道和外部刺激反应[4]。血小板在低渗溶液渗透吸水肿胀，使血小板溶液的折光率减少，透光率增加。根据血小板在低渗溶液中的透光率变化，就可检测出其HSR的恢复率，从而判断血小板活力。HSR的恢复率越高，血小板的形态和体积就越接近正常，血小板功能就越好。血小板的低渗休克反应与保存血小板的恢复率密切相关，通过测定HSR可以预测血小板在体内的存活力[5]。因此，HSR是一项既实用而又必要的检测血小板体外功能指标。

限于技术和条件的不足，目前血站供应的血小板制品，往往仅仅以血小板数量≥2.5×1011/袋、红细胞混入量≤8.0×109/袋及白细胞混入量≤5.0×108/袋为质量标准，对其功能没有任何检测[6]。本文通过检测单采血小板保存期的第0、1、3、5、7d的HSR，发现随着保存时间的延长，血小板的HSR有所下降，但第0、3、5d的HSR并无显著性差异（P>0.05），第7d的HSR显著下降（P<0.05）。因此，单采血小板在保存5天之内HSR基本稳定，血小板活力正常。但是保存超过5天，则HSR显著下降，血小板活力发生明显变化，可能影响血小板输注效果。基于本研究，笔者认为有必要建立保存期各阶段的血小板HSR值的参考范围，为血小板功能的质量评估提供参考标准。同时建议，单采血小板在保存期间越早输注越好。

【参考文献】

[1]ThiagarajanP,Afshar-KharghanV.Platelettransfusiontherapy[J].HematolOncolClinNorthAm.2013,27(3):629-643.

[2]苏玥.血小板临床输血临床应用进展[J].内蒙古医学杂志，2012，44（18）：11-12.

[3]邬旭群,熊文,鲍自谦,等.血小板低渗休克反应检测方法的建立及应用[J].现代检验医学杂志，2006，21(1):6-8.

[4]OkadaY,MaenoE,ShimuzuT,etal.Receptor-mediatedcontrolofregulatoryvolumedecrease(RVD)andapoptoticvolumedecrease(AVD).JPhysiol,2001,532:3-16.

[5]MurphyS,RebullaP,BertoliniF,etal.Invitroassessmentofthequalityofstoredplateletconcentrates.TheBEST(BiomedicalExcellenceforSaferTransfusion)TaskForceoftheInternationalSocietyofBloodTransfusion.TransfusMedRev,1994,8:29-36.

[6]胡丽华.临床输血学检验[M].北京：人民卫生出版社，2012：146-150.